秦海峰，宋健玲

(太原理工大學化學化工學院，太原030024)

苯唑西林鈉(oxacillin sodium)屬半合成青霉素類抗生素，其抗菌作用方式與青霉素相似，對耐青霉素G的金黃色葡萄球菌具有殺菌作用。臨床主要用于治療敏感菌所致的各種感染，如肺炎、敗血癥、乳腺炎、燒傷創(chuàng)面感染、化膿性腦膜炎、骨髓炎、扁桃體炎、峰窩組織炎及膿皮病等。目前關(guān)于苯唑西林鈉的分析方法主要有高效液相色譜法［1-3］、分光光度法［4-5］、化學發(fā)光法［6］和電位滴定法［7］等。由于藥物分子中所含的能夠給予電子的基團能與電子接受體對硝基酚發(fā)生荷移反應(yīng)［8］。筆者利用對硝基酚作為配體與苯唑西林鈉反應(yīng)形成荷移絡(luò)合物，以此測定苯唑西林鈉含量。本文研究了苯唑西林鈉與對硝基酚形成荷移絡(luò)合物的反應(yīng)條件，探討了反應(yīng)機理。

1 實驗部分

1．1 主要儀器與試劑

儀器：UV-265紫外可見分光光度計(日本島津公司);HH-S型恒溫水浴鍋(河南鞏義市英峪予華儀器廠)。

試劑：3×10－3mol/L對硝基酚乙醇溶液(上海恒遠生物科技有限公司);500μg/mL苯唑西林鈉乙醇標準溶液(中國藥品生物制品檢定所);注射用苯唑西林鈉(上海新先鋒藥業(yè)有限公司);苯唑西林鈉膠囊(朗致集團博康藥業(yè)有限公司)。所用試劑均為分析純，實驗用水為二次去離子水。

1．2 實驗方法

準確吸取一定量的500μg/mL苯唑西林鈉乙醇標準溶液于10 mL容量瓶中，加入3×10－3mol/L對硝基酚溶液2．5 mL，用丙酮稀釋至刻度。搖勻后在(20±5)℃放置10 min，用1 cm的比色池以試劑空白為參比，于波長401．4 nm處測定其吸光度。

2 結(jié)果和討論

2．1 吸收光譜

按照實驗方法配制溶液，于分光光度計上掃描，所繪制吸收光譜見圖1。對硝基酚試劑的吸收波長λmax=325．0 nm，苯唑西林鈉吸收波長 λmax=339．0 nm．在苯唑西林鈉溶液中加入對硝基酚溶液后，在401．4 nm處出現(xiàn)一新的吸收峰，表明有新物質(zhì)生成，且吸光度值與濃度在一定范圍內(nèi)呈良好的線性關(guān)系。本實驗以絡(luò)合物最大吸收波長401．4 nm作為測定波長，同時以試劑空白為參比，測定溶液的吸光度值。

2．2 溶劑的選擇

選用水、乙醇、甲醇、丙酮、乙腈、二甲基亞砜等不同的溶劑按照實驗方法配制溶液，分別測量其吸光度。結(jié)果表明，苯唑西林鈉與對硝基酚在丙酮溶劑中的吸光度值最大，故本實驗選擇丙酮作為反應(yīng)溶劑。

2．3 反應(yīng)溫度與反應(yīng)時間的影響

按照實驗方法進行實驗，改變反應(yīng)的溫度和時間，測量其吸光度。結(jié)果表明，苯唑西林鈉與對硝基酚生成的絡(luò)合物在(20±5)℃下5～80 min時其吸光度達到最大值并趨于恒定。本實驗選擇反應(yīng)時間為10 min。

2．4 對硝基酚試劑用量的影響

按照實驗方法進行實驗，改變對硝基酚試劑用量。結(jié)果表明，苯唑西林鈉與對硝基酚反應(yīng)時，濃度為3×10－3mol/L 對硝基酚試劑用量在 2．4 ～5．0 mL范圍內(nèi)吸光度達到最大值并趨于恒定。本實驗選用對硝基酚試劑用量為2．5 mL，見圖2。

圖2 對硝基酚試劑用量的影響

2．5 標準曲線及靈敏度

分別取0．2，0．4，0．6，1．0，1．6 mL 的 500 μg/mL苯唑西林鈉標準溶液，按照實驗方法配制溶液，在401．4 nm處測量其吸光度，并繪制標準曲線，見圖3。苯唑西林鈉含量在10～80μg/mL符合比爾定律，相關(guān)系數(shù)為r=0．999 8，線性方程A=0．002 01+0．004 96 ρ，表觀摩爾吸光系數(shù)ε =2．22 ×103L/(mol·cm)。

2．6 絡(luò)合物組成及反應(yīng)機理探討

圖3 標準曲線

用等摩爾連續(xù)變化法測得苯唑西林鈉與對硝基酚形成絡(luò)合物的組成比為1∶1，見圖4。在苯唑西林鈉分子中含有電子給予體的基團存在［7-8］，而對硝基酚是一個良好的電子接受體［9］，在丙酮溶液中苯唑西林鈉與對硝基酚可生成穩(wěn)定的荷移絡(luò)合物。實驗測得在波長401．4 nm處有一強的特征吸收峰，與原來藥物吸收峰相比有明顯紅移，證明生成了荷移絡(luò)合物。

圖4 等摩爾連續(xù)變化法測定絡(luò)合物組成比

2．7 干擾物質(zhì)實驗

在實驗的最佳條件下考察了其他物質(zhì)對苯唑西林鈉測定的干擾情況。結(jié)果表明，當相對誤差在±5%時，800倍量的乳糖或淀粉，400倍量的蔗糖或萄葡糖，250倍量的硬脂酸鎂和100倍量的果糖等共存物質(zhì)均不干擾測定。

3 樣品分析

3．1 試樣溶液制備

分別取苯唑西林鈉膠囊20粒(苯唑西林鈉250 mg/粒)，將膠囊中藥劑倒出混勻，準確稱取含有苯唑西林鈉的藥粉1/50(約含苯唑西林鈉100 mg)，用適量水配成溶液，過濾，棄去殘渣，并將溶液置于200 mL容量瓶中，用水洗滌，除去不溶物，用水稀釋至刻度(質(zhì)量濃度約為500μg/mL)，搖勻備用。

取注射用苯唑西林鈉1支(苯唑西林鈉500 mg/支)，準確稱取苯唑西林鈉藥粉100 mg，用適量水溶解，置于200 mL容量瓶中，用水稀釋至刻度(質(zhì)量濃度約為500μg/mL)，搖勻備用。

3．2 樣品含量的測定

精密量取上述樣品制備溶液1．00 mL于10 mL的容量瓶中，按實驗方法進行測定。代入線性方程計算每枚藥物中苯唑西林鈉的平均含量，結(jié)果見表1。

3．3 方法的回收率和精密度

精密量取經(jīng)多次測定已知含量的同一批苯唑西林鈉適量樣品制備溶液，分別加入不同量苯唑西林鈉標準溶液。按實驗方法測量其吸光度，平行測定5次，按標準加入法測得回收率為98．35% ～100．2%，相對標準偏差≤2．71%，結(jié)果見表1。

4 結(jié)論

該方法利用對硝基酚試劑作為電子接受體與電子給予體苯唑西林鈉反應(yīng)，在室溫下形成穩(wěn)定的1∶1荷移絡(luò)合物，并在波長401．4 nm處出現(xiàn)較強的絡(luò)合物特征吸收峰，證明生成了荷移絡(luò)合物，與原來藥物吸收峰相比有明顯紅移。經(jīng)對實驗條件進行優(yōu)化，苯唑西林鈉含量在10～80μg/mL符合比爾定律，同時對市售樣品苯唑西林鈉針劑和膠囊進行了測定及回收率實驗。回收率為98．35% ～100．20%，相對標準偏差≤2．71%。該方法簡便快速，為定量測定苯唑西林鈉制劑提供了一種新方法。

表1 樣品測定結(jié)果及回收率(n=5)

［1］ 中華人民共和國衛(wèi)生部藥典委員會．中華人民共和國藥典(二部)［S］．北京：中國醫(yī)藥科技出版社，2010：441-443．

［2］ Samanidou Victoria F，Evaggelopoulou Evaggelia N，Papadoyannis Ioannis N．Development of a validated HPLCmethod for the determination of four penicillin antibiotics in pharmaceuticals and human biological fluids［J］．Journal of Separation Science，2006，29(11)：1550-1560．

［3］ 吳琦琦，劉雁鳴，倪孟祥．反相高效液相色譜法測定注射用苯唑西林鈉有關(guān)物質(zhì)［J］．中南藥學，2011，9(3)：203-205．

［4］ 龐向東，鄧欽心，吳言兵，等．玫瑰精B光度法測定苯唑西林的含量［J］．分析科學學報，2011，27(3)：406-408．

［5］ Gujral Rajinder Singh，Haque Sk Manirul，Shanker Prem，A novel spectrophotometric method for the determination oxacillin sodium［J］．International Journal of Biomedical Science，2009，5(4)：373-379．

［6］ 石文兵．KMnO4-魯米諾體系測定苯唑西林鈉［J］．分析試驗室，2009，28(6)：39-42．

［7］ 劉煒，杜增輝，張筱紅，張菁，?？∩剑蛩醽喒姌O的研制與電位滴定法分析測定青霉素類抗生素［J］．藥品質(zhì)量及檢驗，2002，37(4)：294-298．

［8］ Askal Hassan F，Saleh，Gamal A，Omar Nabil M．Utility of certainπ-acceptors for the spectrophotometric determination of some penicillins［J］．Analyst，1991，116(4)：387-390．

［9］ Magda Y El-Mammli．Spectrophotometric determination of flucloxacillin in pharmaceutical preparations using some nitrophenols as a complexing agent［J］．Spectrochimica Acta Part A，2003，59：771-776．