黃學斌 劉庭科

（廣東溫氏食品集團有限公司研究院，廣東省浮市 527400）

目前，多數(shù)豬場對接種豬瘟疫苗十分重視，但豬瘟免疫失敗的臨床現(xiàn)象還是比較普遍。具體表現(xiàn)為抗體水平參差不齊、離散度高、總體抗體滴度偏低、免疫豬群時有非典型豬瘟疫情發(fā)生，這說明豬瘟疫苗免疫沒有產(chǎn)生有效的保護作用。據(jù)何啟蓋教授對多個省市44個規(guī)?；i場進行豬瘟抗體水平監(jiān)測的結(jié)果 （豬群的免疫合格率僅有55.72%，母豬、育肥豬和仔豬的免疫合格率分別為67%、38%和22%）表明各豬場豬瘟疫苗的免疫質(zhì)量參差不齊，合格率偏低。豬瘟疫苗免疫是豬場防制豬瘟的重要途徑，疫苗質(zhì)量的監(jiān)控不到位和盲目性選擇是免疫失敗的重要原因之一。目前市場上豬瘟疫苗種類繁多，且夸大效果，質(zhì)量不一，導致臨床使用過程中，免疫效果差異顯著。因此評價來自不同廠家疫苗的免疫效果，對豬瘟的防治具有重大意義。

1 試驗材料

1.1 疫苗

試驗所用的疫苗分別為：A廠、B廠、C廠的豬瘟活疫苗 （均為細胞源），每頭份含細胞毒≥7 500個家兔感染量。

1.2 診斷試劑

豬瘟抗體診斷試劑盒 （IDEXX公司）。

1.3 試驗動物

試驗兔為新西蘭SPF級長白兔，購自華南醫(yī)科大學實驗動物研究所，均為雌性，未免疫過任何疫苗，每只重約1.6～2.0 kg； 豬體試驗于 2012 年 1～4 月在廣東新興某豬場進行，選擇同期分娩的健康原種母豬所產(chǎn)的仔豬40頭，試驗期間按照豬場正常生產(chǎn)流程管理，所有仔豬所處試驗條件和飼養(yǎng)管理條件相同。

2 試驗方法

2.1 兔體試驗

免疫安排：按照瓶簽標示用生理鹽水將每頭份疫苗稀釋7 500倍，各接種家兔2只 （即A廠疫苗接種試驗兔1和2，B廠疫苗接種試驗兔3和4，C廠疫苗接種試驗兔5和6），每只兔耳靜脈注射1 mL，兔7注射1 mL生理鹽水作為對照。家兔接種后，每隔6小時測體溫1次，連續(xù)測5天。接種疫苗后，兔的體溫反應(yīng)標準如下。定型熱反應(yīng) （++）：潛伏期48～96小時，體溫上升呈明顯曲線，至少有3個溫次超過常溫1℃以上，并稽留18～36小時。輕熱反應(yīng) （+）：潛伏期48～96小時，體溫上升呈明顯曲線，至少有2個溫次超過常溫0.5℃以上，并稽留12～36小時?？梢煞磻?yīng) （±）：潛伏期48～96小時，體溫曲線起伏不定，稽留不到12小時；或潛伏期在24小時以上，不足48小時及超過96小時至120小時出現(xiàn)熱反應(yīng)。無反應(yīng) （-）：體溫正常。如果兩只兔均為定型熱反應(yīng)或一只為定型熱另一只為輕熱反應(yīng)，說明疫苗合格，如果2只兔均為輕熱反應(yīng)，說明疫苗可疑。

2.2 仔豬免疫試驗

無豬瘟中和抗體 （40～50日齡）保育豬40頭，分為4組 （每組10頭），即每種疫苗設(shè)1組和生理鹽水空白對照組，共計4組；采用一次性免疫，疫苗組每頭豬按1頭份接種疫苗，對照組按1 mL/頭接種生理鹽水；分別在免疫前、免疫后15、30、45和60天采血。

豬瘟抗體的檢測采用阻斷ELISA方法，試驗操作參照試劑盒說明進行，抗體滴度用阻斷率表示，阻斷率通過450 nm波長樣本吸光度與陰性對照吸光度的比值。如果樣品的阻斷率大于或等于40%，該樣本就可以判為陽性 （有豬瘟抗體存在）；如果樣品的阻斷率小于或等于30%，該樣本就可以判為陰性（無豬瘟抗體存在），如果樣品的阻斷率在30%～40%之間，該樣本就可以判為可疑。試驗數(shù)據(jù)采用專門的軟件分析。

3 結(jié)果與分析

3.1 兔體熱反應(yīng)結(jié)果

圖1為兔免疫不同廠家的豬瘟疫苗后，不同時間的體溫變化曲線。從圖中可以看出，兔1、2、3、4體溫上升呈明顯曲線，在接種后48小時超過3溫次超出對照組兔體溫1℃以上，并稽留時間超過18小時?？梢娒庖逜廠和B廠的豬瘟疫苗兔子的體溫變化曲線均表現(xiàn)為定型熱，說明這兩個廠的疫苗合格。免疫C廠的豬瘟疫苗的兔5的體溫與兔7相比無明顯變化，表現(xiàn)為無反應(yīng)，免疫C廠的豬瘟疫苗的兔6體溫反應(yīng)為輕熱，說明C廠的疫苗質(zhì)量不合格。

3.2 仔豬免疫結(jié)果

由于試驗過程中部分仔豬不符合選用標準被淘汰以及采血過程中造成的操作誤差，本研究僅對已經(jīng)檢測的結(jié)果進行分析，結(jié)果見表1。從表中可以看出，C廠的豬瘟疫苗免疫30天豬瘟抗體檢測為陰性。A廠的疫苗在免疫后30天后抗體全部為陽性 （抗體100%大于40%）；B廠的豬瘟在免疫后15天后抗體全部為陽性，抗體離散度低于B廠最低，A廠次之，說明B廠疫苗免疫后群體抗體整齊度較好。

4 討論

兔體熱反應(yīng)是篩選豬瘟疫苗的先決條件，也是第一步。從兔體熱反應(yīng)來看，A廠和B廠的疫苗在注射兔體后，兔體體溫都有所升高，但程度不同，從總體的體溫反應(yīng)曲線來看，A廠和B廠的疫苗質(zhì)量較好，C廠較差。進一步利用豬體試驗對疫苗免疫效果進行評價，從豬體免疫前后離散度變化、免疫前后抗體阻斷率大于40%的變化以及免疫前后抗體平均值變化來看，B廠的疫苗抗體產(chǎn)生的最快，群體的抗體整齊度最好，A廠的疫苗次之，C廠的疫苗免疫失敗，可能是疫苗在保存和運輸環(huán)節(jié)出現(xiàn)失誤?？梢夿廠的疫苗值得在生產(chǎn)中推廣應(yīng)用。

圖2 不同廠家的豬瘟疫苗兔體反應(yīng)熱圖

表1 豬瘟抗體檢測結(jié)果