，，

(1.浙江大學(xué)動(dòng)物科學(xué)學(xué)院，浙江杭州 310058；2.衢州出入境檢驗(yàn)檢疫局； 3.浙江出入境檢驗(yàn)檢疫局)

豬瘟是由豬瘟病毒引起的一種急性、接觸性傳染病。一年四季均可發(fā)病，主要通過(guò)直接接觸，或因接觸被污染的媒介物而發(fā)病。豬瘟在我國(guó)被列為一類動(dòng)物傳染病，對(duì)養(yǎng)豬業(yè)危害極大。生產(chǎn)上，主要通過(guò)疫苗免疫預(yù)防，抗體水平監(jiān)測(cè)是評(píng)價(jià)免疫效果的重要手段，可為制定免疫程序提供科學(xué)依據(jù)。

本試驗(yàn)應(yīng)用美國(guó)IDEXX公司提供的豬瘟病毒抗體阻斷ELASA檢測(cè)方法及試劑盒，對(duì)2010年至2012年采自浙江杭州、金華、衢州、湖州、紹興等5地市28家規(guī)模養(yǎng)豬場(chǎng)不同生長(zhǎng)階段的豬血清進(jìn)行豬瘟抗體水平檢測(cè)，以及時(shí)了解免疫效果,為豬瘟防控提供依據(jù)和參考。

1 材料與方法

1.1待測(cè)血清樣品 2010-2012年，每年4月、11月對(duì)浙江省杭州、金華、衢州、湖州、紹興等5地市28家規(guī)模豬場(chǎng)進(jìn)行抽樣普查。經(jīng)耳靜脈或前腔靜脈無(wú)菌采集血液樣品，自然凝固后低溫離心分離血清，置4℃冰箱，保存?zhèn)溆谩?/p>

其中60～65日齡仔豬血清1326頭份，90～95日齡生長(zhǎng)豬血清1326頭份，150～160日齡育肥豬血清1208份。

1.2檢測(cè)試劑 包被豬瘟病毒96孔板、10倍濃縮洗液、樣品稀釋液、酶標(biāo)抗豬瘟抗體、TMB底物、終止液、陽(yáng)性標(biāo)準(zhǔn)品、陰性標(biāo)準(zhǔn)品，均為美國(guó)IDEXX公司診斷試劑產(chǎn)品。全自動(dòng)酶標(biāo)儀為美國(guó)伯樂(lè)產(chǎn)品(BIO-RAD 550)，移液器為德國(guó)EPPENDORF產(chǎn)品。

1.3檢測(cè)方法 抗體檢測(cè)按照美國(guó)IDEXX公司《豬瘟抗體的阻斷診斷方法》進(jìn)行。結(jié)果計(jì)算用%IN判定，計(jì)算公式：%IN=[(陰性對(duì)照-樣品數(shù))/陰性對(duì)照] ×100。

陰性對(duì)照的平均OD450大于O.50，陽(yáng)性對(duì)照的阻斷率大于50%，檢測(cè)結(jié)果有效。如果被檢樣本的阻斷率大于或等于40%，該樣本可判為陽(yáng)性(有CSFV抗體存在)；如果被檢樣本的阻斷率小于或等于30%，該樣本可判為陰性(無(wú)抗CSFV抗體存在)；如果被檢樣本的阻斷率在30%～40%之間，該樣本可判為可疑?？梢蓸悠?周后再次進(jìn)行檢測(cè)。

2 試驗(yàn)結(jié)果

2.1檢測(cè)豬場(chǎng)及品種 本次檢測(cè)范圍包括浙江杭州、金華、衢州、湖州、紹興等5地市28家規(guī)模豬場(chǎng)，品種為外三元雜種商品豬。

2.2檢測(cè)結(jié)果

2.2.1不同地區(qū)規(guī)模豬場(chǎng)豬瘟抗體水平的檢測(cè)結(jié)果 詳見(jiàn)表1。

表1 不同地區(qū)規(guī)模豬場(chǎng)豬瘟抗體水平的檢測(cè)結(jié)果

由表1可見(jiàn)，浙江各地規(guī)模豬場(chǎng)豬瘟免疫狀態(tài)良好，抗體水平檢測(cè)合格率基本維持在75%以上。其中，較好的有金華、紹興、杭州等地，而衢州、湖州兩地相對(duì)較低。

通過(guò)Person Chi-Square檢驗(yàn)，χ2=21.572，P<0.05，可以認(rèn)為不同地區(qū)規(guī)模豬場(chǎng)豬瘟免疫統(tǒng)計(jì)學(xué)分析有顯著性差異。

2.2.2不同年份豬瘟抗體水平的檢測(cè)結(jié)果 詳見(jiàn)表2。

表2 不同年份規(guī)模豬場(chǎng)豬瘟抗體水平的檢測(cè)結(jié)果

由表2可見(jiàn)，近3年來(lái)，浙江地區(qū)規(guī)模豬場(chǎng)豬瘟抗體陽(yáng)性樣品率在76.16%～88.39%之間，抗體水平較為穩(wěn)定。

通過(guò)Person Chi-Square檢驗(yàn)，χ2=25.988，P<0.05，可以認(rèn)為不同年份的規(guī)模豬場(chǎng)豬瘟免疫統(tǒng)計(jì)學(xué)分析有顯著性差異。

2.2.3不同豬群豬瘟抗體水平的檢測(cè)結(jié)果 詳見(jiàn)表3。

表3 不同豬群豬瘟抗體水平的檢測(cè)結(jié)果

由表3可見(jiàn)，60～65日齡仔豬抗體陽(yáng)性率較低，僅76.09%，90～95日齡生長(zhǎng)豬抗體陽(yáng)性率達(dá)到80.84%，而150～160日齡生長(zhǎng)豬抗體陽(yáng)性率為84.77%。

通過(guò)Person Chi-Square檢驗(yàn)，χ2=9.464，P<0.05，可以認(rèn)為不同日齡的規(guī)模豬場(chǎng)豬瘟免疫統(tǒng)計(jì)學(xué)分析有顯著性差異。

3 小結(jié)與討論

3.1本次規(guī)模豬場(chǎng)豬瘟抗體檢測(cè)28家豬場(chǎng)，其中湖州4家，檢測(cè)血清521頭份；杭州6家，檢測(cè)血清835頭份；衢州4家，檢測(cè)血清526頭份；紹興6家，檢測(cè)血清862頭份；金華8家，檢測(cè)血清1116頭份。5個(gè)地區(qū)28家規(guī)模豬場(chǎng)，豬瘟抗體水平平均合格率80.44%。

檢測(cè)結(jié)果表明，5個(gè)地區(qū)28家規(guī)模豬場(chǎng)豬瘟免疫保護(hù)狀態(tài)尚可，豬群具有一定的群體免疫力，降低了規(guī)模豬場(chǎng)對(duì)豬瘟的易感性和傳染性。但在飼養(yǎng)環(huán)境條件不良、氣候改變、應(yīng)激等情況下，難以抵御強(qiáng)毒攻擊，仍存在著一定的安全隱患。

3.22010-2012年浙江省部分地區(qū)豬瘟抗體水平基本穩(wěn)定，陽(yáng)性率在76.16%～88.39%，說(shuō)明近年來(lái)該省大力推行豬瘟疫苗免費(fèi)接種，提高豬群群體免疫力，已經(jīng)取得一定成效。

雖然各規(guī)模豬場(chǎng)均十分重視和主動(dòng)實(shí)施豬瘟疫苗的免疫接種工作，但仍有部分生長(zhǎng)豬血清抗體水平達(dá)不到保護(hù)水平。推測(cè)其可能原因，一是抗體水平的高低與采樣時(shí)間有一定影響，由于60日齡左右仔豬的部分血樣是在豬瘟第二次免疫后較短時(shí)間內(nèi)采集，有可能檢測(cè)不出抗體或抗體水平較低有關(guān)。二是某些豬場(chǎng)普遍表現(xiàn)為低水平的抗體可能與豬場(chǎng)圓環(huán)病毒等疾病混合感染有關(guān)。三是可能與疫苗因素或疫苗接種技術(shù)有關(guān)，免疫程序不合理，往往可導(dǎo)致抗體水平較低。

3.360～65日齡仔豬抗體陽(yáng)性率相對(duì)較低，可能與二免接種時(shí)間及母源抗體抑制有關(guān)，但都高于農(nóng)業(yè)部要求的豬瘟免疫合格率70%以上。

檢測(cè)結(jié)果表明，這與其他有關(guān)規(guī)模化豬場(chǎng)進(jìn)行豬瘟免疫抗體檢測(cè)，保育豬的豬瘟抗體水平在各個(gè)豬群中最為薄弱的結(jié)論基本一致。

3.4規(guī)模化豬場(chǎng)應(yīng)定期開(kāi)展豬瘟免疫抗體水平檢測(cè)，及時(shí)掌握豬瘟群體免疫力，以有利于豬瘟預(yù)防和控制流行。

有報(bào)道規(guī)模豬場(chǎng)應(yīng)開(kāi)展種豬扁桃體中豬瘟病毒檢測(cè)，筆者建議豬場(chǎng)應(yīng)定期采血檢測(cè)豬瘟抗體，一般每年應(yīng)進(jìn)行3～4次，采樣比例為5%～10%。