hMSH2和FHIT在宮頸癌中的表達及其相互關(guān)系

天津市濱海新區(qū)大港醫(yī)院（300270）薛春芬

宮頸癌是女性常見的惡性腫瘤之一，該病的發(fā)生是個涉及多基因改變、多步驟的累積過程[1]，其分子機制至今仍未完全明確。hMSH2是MMR（mismatch repair）基因的一種，它的正常表達是維持MMR基因錯配修復功能的分子基礎。FHIT是目前公認的抑癌基因，其位點的異位和突變以及伴隨的蛋白表達缺失與人類多種腫瘤的發(fā)生、發(fā)展關(guān)系密切。本研究檢測了宮頸癌、CIN及正常宮頸組織中FHIT和hMSH2的表達，旨在探討兩者在宮頸癌發(fā)生、發(fā)展過程中可能起到的作用及其相關(guān)關(guān)系。

1 資料與方法

1.1 一般資料 收集我院存檔宮頸癌標本20例并采集2010年5月～2012年5月住院治療的15例宮頸癌和10例CIN患者病理標本，標本收集前病人均未經(jīng)放化療及免疫治療。所有患者均按宮頸癌HE病理切片診斷標準確診和FIGO分期標準分期?；颊吣挲g26～72歲，平均48.91歲。同時，選取2011年因子宮良性病變行子宮全切術(shù)的30例正常宮頸上皮和慢性宮頸炎組織作為對照。

1.2 方法 采用免疫組織化學鏈霉素抗生物素蛋白-過氧化物酶鏈接法（SP法）。兔抗人FHIT多克隆抗體購自北京中杉金橋生物技術(shù)公司，鼠抗人hMSH2單克隆抗體及SP試劑盒購自天津灝洋生物制品科技有限責任公司。所有標本均經(jīng)10%甲醛固定，石蠟包埋，3μm厚連續(xù)切片?？乖⒉ㄐ迯?，一抗FHIT工作濃度1∶600，hMSH2工作濃度1∶100，具體步驟按試劑盒說明書進行。

1.3 結(jié)果判定

1.3.1 FHIT蛋白評定標準 FHIT蛋白的染色定位于細胞漿。①按染色強度評分：無色或淺黃色為1分；棕黃色為2分；棕褐色為3分。②按陽性細胞數(shù)所占百分比評分：＜10%為1分；10%～50%為2分；＞50%為3分。將染色強度評分與所測得的陽性細胞百分數(shù)評分相乘所得的積作為其最后得分，進行統(tǒng)計學檢驗。1～3分為（-），4～9分為（+）。

1.3.2 hMSH2蛋白評定標準 hMSH2蛋白的染色定位于細胞核上。選取腫瘤細胞壞死較少的5個高倍鏡（×400）視野，計數(shù)500個以上的細胞，陽性細胞數(shù)大于總計數(shù)細胞的20%時記為（+）。

1.4 統(tǒng)計學處理 采用SPSS17.0軟件包對數(shù)據(jù)進行統(tǒng)計學處理。

2 結(jié)果

2.1 hMSH2在宮頸癌、CIN和正常宮頸組織中的表達 在正常宮頸組織中，hMSH2陽性表達9例，陽性表達率為30.0%；在CIN中，hMSH2陽性表達7例，陽性表達率為70.0%；在宮頸癌組織中，hMSH2陽性表達21例，陽性表達率為60.0%。CIN、宮頸癌和正常宮頸組織中，hMSH2陽性率依次降低，差異有顯著性（P＜0.05），后兩者相比差異亦有顯著性（P＜0.05），見附表1。

附表1 hMSH2在宮頸癌、CIN和正常宮頸組織中的表達

2.2 FHIT在宮頸癌、CIN和正常宮頸組織中的表達 在正常宮頸組織中，F(xiàn)HIT呈中度至強陽性表達，陽性表達率為100%；在CIN中，F(xiàn)HIT陽性表達率為60.0%；在宮頸癌組織中，F(xiàn)HIT（-）22例，（+）13例，陽性表達率為37.1%。在正常宮頸、CIN和宮頸癌組織中，F(xiàn)HIT陽性率依次降低，差異有顯著性（P＜0.05）；正常宮頸和宮頸癌組織比較，差異有顯著性（P＜0.05），見附表2。

附表2 FHIT在宮頸癌、CIN和正常宮頸組織中的表達

2.3 hMSH2蛋白表達與FHIT蛋白表達的關(guān)系在宮頸癌組織中，hMSH2蛋白表達與FHIT蛋白表達無相關(guān)性；在FHIT蛋白表達陽性組中，hMSH2蛋白陽性表達率為53.8%，而在FHIT蛋白表達陰性組中，hMSH2蛋白陽性表達率為63.6%，二者相比差異無顯著性（r s＝-0.097，P＞0.05），見附表3。

附表3 hMSH2蛋白表達與FHIT蛋白表達的關(guān)系

3 討論

MMR（mismatch repair）基因是生物進化過程中的保守基因，具有修復DNA堿基錯配、增強DNA復制準確性、維持基因組穩(wěn)定性、降低自發(fā)突變的功能。hMSH2是MMR基因的一種，它的正常表達是維持MMR基因錯配修復功能的分子基礎。本實驗結(jié)果顯示，hMSH2在CIN中表達最高，而在浸潤性宮頸癌及正常宮頸組織中表達依次降低。在CIN病變中，hMSH2的高表達可能的原因是，與正常宮頸鱗狀上皮細胞相比，CIN病變中異常的細胞增生增多[2]。當復制率增高時，微衛(wèi)星序列（microsatellite sequences，MS）的突變率就增高，微衛(wèi)星序列的突變有可能成為hMSH2基因的活性輸入信號。相反，當疾病由CIN發(fā)展到浸潤性宮頸癌的過程中，hMSH2蛋白表達降低，這很可能是因為機體細胞突變以及hMSH2基因表達的下調(diào)。這可在一定程度上反映宮頸癌的惡性程度。

FHIT是由Ohta等于1996年利用定位克隆技術(shù)和外顯子捕獲法發(fā)現(xiàn)的，定位于3p14.2區(qū)域，其位點的異位和突變以及伴隨的蛋白表達缺失與人類多種腫瘤的發(fā)生、發(fā)展關(guān)系密切，存在于多種與環(huán)境致癌因素密切相關(guān)的惡性腫瘤中[3]。本實驗結(jié)果顯示，F(xiàn)HIT蛋白在正常宮頸組中均有中至強陽性表達，其異常表達在CIN組中已經(jīng)存在，推測FHIT蛋白的表達缺失有可能是宮頸癌發(fā)生的相對早期的分子生物學事件。FHIT蛋白表達的缺失，有希望成為臨床預測宮頸癌前病變發(fā)展為浸潤性宮頸癌的有用的分子生物學標記物。

本研究雖然發(fā)現(xiàn)宮頸癌組中hMSH2蛋白的表達和FHIT蛋白的表達都存在較高的異常，但是并未發(fā)現(xiàn)兩者之間存在顯著的相關(guān)性（rs＝-0.097，P＞0.05）。說明FHIT和hMSH2在促進宮頸癌的發(fā)生發(fā)展中的作用可能是獨立的，故兩者之間的關(guān)系還有待進一步研究。