KLF16在肺腺癌中表達(dá)的臨床意義及機(jī)制*

黃志宏， 駱文志， 蔡興東

(暨南大學(xué)附屬第一醫(yī)院呼吸內(nèi)科，廣東 廣州 510632)

KLF16在肺腺癌中表達(dá)的臨床意義及機(jī)制*

黃志宏， 駱文志， 蔡興東△

(暨南大學(xué)附屬第一醫(yī)院呼吸內(nèi)科，廣東 廣州 510632)

目的探討Krüppel樣轉(zhuǎn)錄因子16(Krüppel-like transcription factor 16，KLF16)蛋白表達(dá)在肺腺癌患者中的臨床意義及機(jī)制，為探索肺腺癌患者預(yù)后生物標(biāo)志物提供理論依據(jù)。方法收集我院50例肺腺癌患者的腫瘤組織標(biāo)本，對(duì)其進(jìn)行4～6年臨床隨訪，免疫組織化學(xué)染色分析患者病理標(biāo)本中KLF16蛋白的表達(dá)，探索KLF16蛋白表達(dá)與肺腺癌患者預(yù)后的關(guān)系及其意義。通過(guò)上調(diào)肺腺癌細(xì)胞中KLF16蛋白的表達(dá)，流式細(xì)胞術(shù)檢測(cè)KLF16蛋白對(duì)肺腺癌細(xì)胞周期和凋亡的影響，證實(shí)KLF16蛋白在肺腺癌中表達(dá)的作用。結(jié)果50例肺腺癌患者中，KLF16蛋白低表達(dá)或不表達(dá)者29例，占58%(29/50)，在肺腺癌細(xì)胞中，KLF16表達(dá)明顯低于其在正常支氣管上皮細(xì)胞中的表達(dá)。KLF16蛋白低表達(dá)的肺腺癌患者，其5年生存率明顯低于高表達(dá)KLF16的患者(P<0.01)，而且KLF16蛋白低表達(dá)是肺腺癌患者預(yù)后不良的重要預(yù)測(cè)指標(biāo)。上調(diào)肺腺癌細(xì)胞中KLF16蛋白的表達(dá)可誘導(dǎo)肺腺癌細(xì)胞周期S期阻滯。結(jié)論KLF16在肺腺癌中是一個(gè)重要的抑癌蛋白，可作為肺腺癌患者重要的預(yù)測(cè)預(yù)后的分子標(biāo)志物。

肺腫瘤; Krüppel樣轉(zhuǎn)錄因子16; 腫瘤標(biāo)志物

肺癌是當(dāng)前全世界范圍內(nèi)導(dǎo)致癌性死亡的首要原因，而且其發(fā)病率仍處于上升趨勢(shì)[1-2]。在常見(jiàn)的非小細(xì)胞肺癌的病理類型中，肺腺癌的發(fā)病率明顯增加。目前肺癌的5年生存率在5%～14%之間，發(fā)展中國(guó)家5年生存率明顯低于發(fā)達(dá)國(guó)家[3]。大多數(shù)肺癌患者在確診時(shí)已處于中晚期，失去了手術(shù)根治的機(jī)會(huì)，并最終導(dǎo)致死亡。其主要原因是肺癌細(xì)胞的惡性增殖、侵襲和早期轉(zhuǎn)移。肺癌的發(fā)病機(jī)制復(fù)雜，涉及遺傳和環(huán)境因素等的復(fù)雜作用，具體機(jī)制仍不明確。

轉(zhuǎn)錄因子是一類具有重要轉(zhuǎn)錄調(diào)控功能的DNA結(jié)合蛋白，通過(guò)激活或抑制靶基因的轉(zhuǎn)錄來(lái)調(diào)控基因的時(shí)相性及特異性表達(dá)，因而在細(xì)胞生長(zhǎng)、分化、凋亡等生理過(guò)程的調(diào)節(jié)中扮演重要的角色。Krüppel樣轉(zhuǎn)錄因子(Krüppel-like transcription factors, KLFs) 是Sp1/Krüppel 樣轉(zhuǎn)錄因子(Sp1-like and Krüppel-like transcription factors, Sp1/KLFs) 家族中的一個(gè)亞家族，通過(guò)與富含GC序列(包括GC盒和GT盒即CACCC盒)的多個(gè)基因的啟動(dòng)子區(qū)結(jié)合而發(fā)揮調(diào)節(jié)作用。目前在人類中發(fā)現(xiàn)17種KLFs，每一種KLF的N端含有獨(dú)特的抑制或啟動(dòng)區(qū)，因而生理功能各異，并且各個(gè)KLF在組織中分布和mRNA翻譯后調(diào)控也不相同[4]。KLFs可調(diào)控血細(xì)胞生成[5]、血管形成[6]、淋巴細(xì)胞生長(zhǎng)[7]、腫瘤形成[8-9]和誘導(dǎo)性多能干細(xì)胞形成等[10]，因而在機(jī)體的各種病理和生理過(guò)程中發(fā)揮重要作用。

2002年Kaczynski等[11]鑒定了一個(gè)新的基礎(chǔ)轉(zhuǎn)錄元件結(jié)合蛋白B4(basic transcription element-bin-ding protein 4，BTEB4)，BTEB4是一種新的廣泛表達(dá)的Sp1樣蛋白家族成員，后被命名為KLF16。研究顯示，KLF16能夠抑制胰腺癌細(xì)胞增殖，并通過(guò)Kirsten鼠肉瘤病毒癌基因同系物基因(v-Ki-ras2 Kirsten rat sarcoma viral oncogene homolog,KRAS)抑制胰腺癌細(xì)胞轉(zhuǎn)化[12]。KLF16增加腫瘤細(xì)胞的凋亡率，并能通過(guò)調(diào)控細(xì)胞周期蛋白A 進(jìn)而促使細(xì)胞周期停滯于S期，進(jìn)而導(dǎo)致胰腺癌細(xì)胞增殖抑制。然而在人肺腺癌中，KLF16表達(dá)狀況及其臨床意義如何，尚無(wú)文獻(xiàn)報(bào)道。因此，本文旨在分析KLF16在人肺腺癌中表達(dá)狀況、與患者臨床特征包括預(yù)后的關(guān)系，為探索KLF16能否作為肺腺癌預(yù)后判斷的分子標(biāo)志物提供科學(xué)依據(jù)。

材 料 和 方 法

1患者資料、病理標(biāo)本收集和隨訪

收集暨南大學(xué)附屬第一醫(yī)院自2007年1月～2009年12月經(jīng)病理確診為肺腺癌患者50例，對(duì)其進(jìn)行4～6年的隨訪。免疫組化分析患者確診時(shí)石蠟包埋的病理切片，統(tǒng)計(jì)患者肺腺癌中KLF16蛋白表達(dá)與臨床病理特征的關(guān)系。肺癌患者的病理分期及TNM分期參考第7版國(guó)際肺癌研究協(xié)會(huì)(International Association for the Study of Lung Cancer,IASLC)的分期標(biāo)準(zhǔn)[13]。肺腺癌患者的臨床病理特征總結(jié)如表1。

表150例肺腺癌患者臨床病理特征

Table 1. Clinicopathologic characteristics of 50 cases of patients with lung adenocarcinoma

Characteristicsn(%)Age(year) ≤6529(58.0) >6521(42.0)Gender Male30(60.0) Female20(40.0)Differentiation Poor20(40.0) Moderate22(44.0) Well8(16.0)Pathologicalstage ⅠA8(16.0) ⅠB14(28.0) IIA2(4.0) IIB4(8.0) IIIA6(12.0) IIIB8(16.0) Ⅳ8(16.0)Tclassification T112(24.0) T221(42.0) T37(14.0) T410(20.0)Nclassification N026(52.0) N110(20.0) N210(20.0) N34(8.0)Mclassification M040(80.0) M110(20.0)Smoking Yes28(56.0) No22(44.0)KLF16expression Negative5(10.0) Positive45(90.0) Lowexpression24(53.3) Highexpression21(46.7)Vitalstatus(asfollowup) Death29(58.0) Alive21(42.0)

2免疫組織化學(xué)染色和分析

采用鏈霉菌抗生物素蛋白-過(guò)氧化物酶連接(streptavidin-peroxidase conjugate，SP) 法進(jìn)行免疫組織化學(xué)染色，分析肺腺癌患者石蠟包埋組織中KLF16蛋白的表達(dá)。兔抗人KLF16多克隆抗體購(gòu)自Sigma，配制1∶200抗體工作濃度，具體步驟按SP及DAB顯色試劑盒(中杉金橋)說(shuō)明書進(jìn)行。病理切片經(jīng)染色后由2位病理科醫(yī)師分析，KLF16在肺腺癌切片中的表達(dá)強(qiáng)度參考文獻(xiàn)[14-15]評(píng)分如下：染色強(qiáng)度評(píng)分：0分(無(wú)染色)，1分(輕度染色：淺黃色)，2分(中度染色：黃棕色)，3分(重度染色：棕色)；染色陽(yáng)性細(xì)胞數(shù)評(píng)分：0分(無(wú)染色陽(yáng)性細(xì)胞)，1分(<10%陽(yáng)性細(xì)胞)，2分(10～50%陽(yáng)性細(xì)胞)，3分(>50%陽(yáng)性細(xì)胞)。KLF16蛋白表達(dá)強(qiáng)度以染色指數(shù)=染色陽(yáng)性細(xì)胞數(shù)×染色強(qiáng)度來(lái)評(píng)價(jià)，共記為0、1、2、3、4、6和9分。表達(dá)高低的最佳截?cái)嘀祷趌og-rank檢驗(yàn)分析肺腺癌患者病理組織中KLF16蛋白表達(dá)與患者預(yù)后關(guān)系來(lái)界定。其中染色指數(shù)≤4為低表達(dá)，>4為高表達(dá)。

3細(xì)胞培養(yǎng)、質(zhì)粒轉(zhuǎn)染及Westernblotting檢測(cè)

人肺腺癌細(xì)胞A549、SPC-A1及正常對(duì)照細(xì)胞株16HBE均購(gòu)自中國(guó)科學(xué)院上海細(xì)胞庫(kù)。細(xì)胞株培養(yǎng)用含有10%胎牛血清(Gibco-BRL)、1×105U/L青霉素及100 mg/L鏈霉素的Dulbecco’s modified Eagle’s medium(DMEM,Gibco-BRL)完全培養(yǎng)基，并置于37 ℃、5% CO2的培養(yǎng)箱中培養(yǎng)。包含重組人全長(zhǎng)KLF16(NM_031918)cDNA的質(zhì)粒pcDNA3.1(+)-KLF16及對(duì)照空質(zhì)粒pcDNA3.1(+)均購(gòu)自GeneCopoeia。A549及SPC-A1細(xì)胞分別通過(guò)Formentas 轉(zhuǎn)染試劑進(jìn)行轉(zhuǎn)染，轉(zhuǎn)染72 h后提取細(xì)胞總蛋白，Western blotting 檢測(cè)轉(zhuǎn)染后KLF16蛋白表達(dá)變化以證明是否上調(diào)了KLF16蛋白表達(dá)。肺腺癌細(xì)胞A549、SPC-A1及其分別轉(zhuǎn)染空質(zhì)粒pcDNA3.1(+)、過(guò)表達(dá)質(zhì)粒pcDNA3.1(+)-KLF16后的總蛋白提取按KeyGene蛋白提取試劑盒提供說(shuō)明書進(jìn)行操作。SDS-PAGE(12%)分離蛋白后轉(zhuǎn)印于PVDF膜上(Milipore)。以5%的脫脂牛奶封閉后，按目的(KLF16)和內(nèi)參照(GAPDH)蛋白的分子量剪開(kāi)PVDF膜，在4 ℃冰箱中分別孵育兔抗-KLF6抗體(1∶200, Sigma)和兔抗-GAPDH抗體(1∶2 500，北京博奧森)過(guò)夜，然后以含0.1% 吐溫20的PBS(PBST)洗膜3～5次，每次5 min。繼之用HRP交聯(lián)的鼠抗兔II抗(1∶3 000，北京博奧森)室溫孵育1 h，PBST洗膜3～5次后以ECL發(fā)光液(康為世紀(jì))進(jìn)行顯色，待顯色后壓上膠片進(jìn)行曝光顯影，3～5 min后清洗膠片，晾干后成像保存并分析。

4流式細(xì)胞術(shù)檢測(cè)

肺腺癌細(xì)胞株A549和SPC-A1分別轉(zhuǎn)染pcDNA3.1(+)-KLF16和對(duì)照質(zhì)粒pcDNA3.1(+)空質(zhì)粒72 h，胰酶消化并收集所有細(xì)胞，1 000 r/min離心2 min，PBS重懸后離心棄上清，70%乙醇固定，4 ℃過(guò)夜。次日取上述細(xì)胞，1 000 r/min離心3 min，吸棄上清，加入PBS重懸，離心后棄PBS，每EP管留細(xì)胞約2×105個(gè)。加入100 mL RNase A，37 ℃水浴30 min。再加入400 μL PI 染色液混勻，4 ℃避光保存30 min。用流式細(xì)胞儀(FACSCalibur，BD)檢測(cè)，記錄激發(fā)波長(zhǎng)為488 nm處得紅色熒光，分析不同組間細(xì)胞周期分布的差異。

5統(tǒng)計(jì)學(xué)處理

以SPSS 16.0軟件分析， Kaplan-Meier和 log-rank 檢驗(yàn)分析KLF16蛋白不同表達(dá)組肺腺癌患者總體生存率的差異，Cox回歸模型單因素和多因素分析肺腺癌患者不良預(yù)后的危險(xiǎn)因素。計(jì)量資料以均數(shù)±標(biāo)準(zhǔn)差(mean±SD)表示。以P<0.05為差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義。

結(jié) 果

1KLF16在肺腺癌患者腫瘤組織及人肺腺癌細(xì)胞中的表達(dá)

免疫組化顯示，在50例肺腺癌患者病理組織切片中，高表達(dá)KLF13蛋白的有21例，占42.0%(21/50)，而KLF13蛋白低表達(dá)或不表達(dá)者29例，占58%(29/50)。KLF16主要定位表達(dá)于肺腺癌細(xì)胞胞漿中，見(jiàn)圖1A；Western blotting分析顯示，KLF16蛋白(23 kD)在正常對(duì)照細(xì)胞16HBE中表達(dá)較高，而在肺腺癌細(xì)胞A549和SPC-A1中表達(dá)下調(diào)，見(jiàn)圖1B。

Figure 1. Expression of KLF16 protein in human lung adenocarcinoma tissues (A, immunohistochemical staining, ×400) and lung adenocarcinoma cells (B, Western blotting). a: negative staining; b: moderate staining; c: strong staining. KLF16 protein was mainly located in the cytoplasm of tumor cells, and its expression in human lung adenocarcinoma cell lines A549 and SPC-A1 was lower than that in human bronchial epithelial cell line 16HBE.

圖1KLF16在不同肺腺癌患者腫瘤組織和人肺腺癌細(xì)胞中的表達(dá)

2肺腺癌組織中KLF16低表達(dá)與肺腺癌患者不良預(yù)后相關(guān)

根據(jù)免疫組化分析KLF13蛋白表達(dá)與肺腺癌患者5年總體生存時(shí)間的關(guān)系，log-rank檢驗(yàn)結(jié)果顯示，KLF16蛋白高表達(dá)組與低表達(dá)組比較，肺腺癌患者5年生存率存在明顯差異(P<0.01)。Kaplan-Meier 分析結(jié)果表明，KLF16高表達(dá)患者5年累計(jì)生存率為81%(95%CI: 0.695～0.923)，低表達(dá)KLF16患者 5年累計(jì)生存率為39.6(95%CI：0.371～0.651)，見(jiàn)圖2。

Figure 2. The correlation between KLF16 protein expression in tumor tissues and the overall survival time of 50 cases of the patients with lung adenocarcinoma.The patients with none or low KLF16 expression in their tumor tissues had a poor prognosis.

圖250例肺腺癌患者腫瘤組織中KLF16蛋白表達(dá)與患者總體生存時(shí)間的關(guān)系

3KLF16蛋白低表達(dá)是肺腺癌患者預(yù)后不良的重要預(yù)測(cè)因素

用單因素和多因素Cox回歸分析來(lái)研究患者腫瘤組織中KLF16蛋白表達(dá)水平和其它臨床指標(biāo)，包括病理分期、腫瘤分化程度、腫瘤原發(fā)灶(tumor,T)、區(qū)域淋巴結(jié)(node,N)、遠(yuǎn)處轉(zhuǎn)移(metastases,M)、腫瘤TNM分期等對(duì)患者預(yù)后的影響，進(jìn)而分析KLF16蛋白表達(dá)在肺腺癌患者預(yù)后中的權(quán)重。如表2所示，單因素Cox回歸分析結(jié)果顯示，影響患者預(yù)后的有意義變量分別是KLF16蛋白表達(dá)水平、腫瘤分化程度、臨床病理分期和腫瘤TNM分期(P<0.05)。多因素Cox回歸分析結(jié)果顯示，KLF16蛋白表達(dá)水平和M分期是影響患者生存時(shí)間的獨(dú)立預(yù)測(cè)因素。KLF16低表達(dá)患者的死亡風(fēng)險(xiǎn)比KLF16高表達(dá)患者增加了8.354倍(95% CI: 2.457～15.714)。而發(fā)生遠(yuǎn)處轉(zhuǎn)移的肺腺癌患者，其死亡風(fēng)險(xiǎn)相對(duì)于未發(fā)生轉(zhuǎn)移的肺腺癌患者增加了4.359倍(95% CI: 1.017～7.324)。上述結(jié)果表明，KLF16蛋白表達(dá)水平可能是影響肺腺癌患者預(yù)后的重要預(yù)測(cè)指標(biāo)。

4上調(diào)肺腺癌細(xì)胞中KLF16蛋白表達(dá)可誘導(dǎo)細(xì)胞周期S期阻滯

為了證實(shí)KLF16在肺腺癌中的作用，我們通過(guò)質(zhì)粒轉(zhuǎn)染技術(shù)使肺腺癌細(xì)胞中過(guò)表達(dá)KLF16蛋白，進(jìn)而用流式細(xì)胞術(shù)分析KLF16對(duì)肺腺癌細(xì)胞周期和凋亡的影響，結(jié)果表明，KLF16誘導(dǎo)細(xì)胞周期S期阻滯，見(jiàn)圖3，而對(duì)細(xì)胞凋亡無(wú)明顯影響(資料未顯示)。這就證明，KLF16蛋白通過(guò)影響肺腺癌細(xì)胞周期，進(jìn)而抑制細(xì)胞增殖，使得高表達(dá)KLF16的肺腺癌患者預(yù)后優(yōu)于其低表達(dá)的患者。

討 論

KLFs家族成員參與腫瘤細(xì)胞的增殖、侵襲和轉(zhuǎn)移的過(guò)程，是一種重要的腫瘤細(xì)胞調(diào)控因子[16-17]。KLFs蛋白與靶基因啟動(dòng)子區(qū)和/或相關(guān)調(diào)控蛋白相互結(jié)合，作為轉(zhuǎn)錄抑制或啟動(dòng)因子，或作為調(diào)控蛋白共激活和/或共抑制因子發(fā)揮作用[18-20]。此外，KLFs家族蛋白在不同的細(xì)胞類型、不同組織中表達(dá)不同，且功能各異[5,9]。因此，研究不同類型腫瘤組織中KLFs蛋白的具體功能，對(duì)于腫瘤個(gè)體化治療及預(yù)后分析具有重要提示作用。

我們的研究結(jié)果顯示，KLF16在肺腺癌中以低表達(dá)為多。低表達(dá)KLF16的患者，其5年累計(jì)生存率為39.6%，而高表達(dá)KLF16蛋白的肺腺癌患者，其5年累計(jì)生存率達(dá)81%，具有明顯統(tǒng)計(jì)學(xué)意義。這就表明，在肺腺癌中，KLF16作為抑癌基因發(fā)揮作用。為了探討KLF16蛋白表達(dá)在肺腺癌患者預(yù)后中的預(yù)測(cè)作用，Cox單因素與多因素回歸分析KLF16蛋白表達(dá)、腫瘤分化程度、腫瘤TNM分期等對(duì)患者預(yù)后的預(yù)測(cè)作用，結(jié)果發(fā)現(xiàn)，KLF16蛋白表達(dá)高低和腫瘤患者是否發(fā)生遠(yuǎn)處轉(zhuǎn)移是影響肺腺癌患者預(yù)后的重要因素。這提示在肺腺癌患者中，KLF16作為抑癌基因，其表達(dá)高低對(duì)患者預(yù)后具有特殊預(yù)測(cè)作用，具有重要臨床參考價(jià)值。

Martin等[12]研究顯示，在胰腺癌細(xì)胞中，KLF16抑制KRAS介導(dǎo)的腫瘤細(xì)胞生長(zhǎng)與轉(zhuǎn)化，誘導(dǎo)胰腺癌細(xì)胞凋亡及細(xì)胞周期S期阻滯。進(jìn)一步研究發(fā)現(xiàn)，KLF16至少部分是通過(guò)結(jié)合在細(xì)胞周期蛋白A啟動(dòng)子區(qū)，抑制了細(xì)胞周期蛋白A的表達(dá)，進(jìn)而誘導(dǎo)細(xì)胞周期S期阻滯。由于KLFs蛋白家族具有組織表達(dá)的特異性，我們?cè)诜蜗侔┘?xì)胞中上調(diào)KLF16蛋白的表達(dá)并進(jìn)行流式細(xì)胞術(shù)分析細(xì)胞周期的變化，結(jié)果顯示，相對(duì)于轉(zhuǎn)染空載體組，上調(diào)肺腺癌中KLF16蛋白表達(dá)后，其細(xì)胞周期S期明顯增加，結(jié)果與Martin等研究一致。這就進(jìn)一步證實(shí)了KLF16在肺腺癌患者預(yù)后預(yù)測(cè)中的臨床價(jià)值。

表2Cox回歸模型單因素和多因素分析肺腺癌患者不良預(yù)后的危險(xiǎn)因素

Table 1. Univariate and multivariate Cox regression analyses of the risk factors of the poor prognosis in the patients with lung adenocarcinoma

UnivariateanalysisMultivariateanalysis VariablenSEP VariableHR(95%CI)PKLF16expressionKLF16expression Noneorlow290.560<0.01 Noneorlow8.354(2.457～15.714)<0.01 High21 High1.000Differentiation None/poor200.352<0.05NA Moderate/well30Pathologicalstage I～I(xiàn)I280.401<0.05NA III～I(xiàn)V22Tstage T1～2330.328<0.05NA T3～417Nstage N0260.395<0.05NA N1～324MstageMstage M0400.421<0.01 M01.000<0.05 M110 M14.359(1.017～7.324)

NA: the data were not available.

Figure 3. Overexpression of KLF16 protein induced S-phase arrest in human lung adenocarcinoma cell lines A549 and SPC-A1. A: Western blotting analysis showed that the expression of KLF16 protein in A549 and SPC-A1 cells transfected with pcDNA3.1(+)-KLF16 plasmid was significantly higher than that in the cells transfected with empty vector, indicating that KLF16 protein was up-regulated in lung adenocarcinoma cells; B and C: flow cytometry plot of cell cycle analysis of A549 and SPC-A1 cells transfected with pcDNA3.1(+)-KLF16 plasmid or empty vector; D: cell cycle distribution of A549 and SPC-A1 cells after KLF16 protein was up-regulated. Mean±SD.n=3.*P<0.05vspcDNA3.1(+).

圖3KLF16過(guò)表達(dá)誘導(dǎo)人肺腺癌細(xì)胞S期阻滯

總之，我們的研究結(jié)果提示，在肺腺癌患者中，KLF16蛋白以低表達(dá)為主，低表達(dá)KLF16蛋白的肺腺癌患者預(yù)后不良，5年死亡率明顯增加。而且， KLF16蛋白低表達(dá)是肺腺癌患者預(yù)后不良的重要危險(xiǎn)因素。因此，我們建議在對(duì)肺腺癌患者的腫瘤標(biāo)本進(jìn)行確診分析時(shí)，可以引入KLF16蛋白的檢測(cè)，從而能對(duì)肺腺癌患者的預(yù)后判斷有重要的提示作用。

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ClinicalsignificanceofKLF16expressioninpatientswithlungadenocarcinoma

HUANG Zhi-hong, LUO Wen-zhi, CAI Xing-dong

(DepartmentofRespiratoryMedicine,theFirstAffiliatedHospitalofJinanUniversity,Guangzhou510632,China.E-mail:cxd19790920@sina.com)

AIM: To investigate the clinical significance of Krüppel-like transcription factor 16 (KLF16) protein expression in the patients with lung adenocarcinoma for exploring the prognostic biomarkers for lung cancer.METHODSThe tumor tissue samples from 50 cases of lung adenocarcinoma were collected from our hospital, and 4～6 years of follow-up of the patients was obtained. The protein expression of KLF16 in the specimens was assayed by immunohistochemical staining. The correlation between KLF16 protein expression and prognosis of the patients with lung adenocarcinoma was also analyzed. The KLF16 protein was up-regulated in lung adenocarcinoma cells A549 and SPC-A1 by transfection with pcDNA3.1(+)-KLF16 plasmid, and the cell cycle and apoptosis of the A549 cells and SPC-A1 cells were determined by flow cytometry after transfection.RESULTSTwenty-nine cases of the lung adenocarcinoma patients showed low or no KLF16 protein expression in the total 50 cases (58%, 29/50). Furthermore, the KLF16 expression in the lung adenocarcinoma cells was significantly lower than that in normal bronchial epithelial cells. The 5-year survival rate of the lung adenocarcinoma patients with low expression of KLF16 protein was significantly lower than that of the patients with high expression of KLF16 protein (P<0.01), and low expression of KLF16 protein was an important predictor of poor prognosis for the patients with lung adenocarcinoma. Up-regulation of KLF16 protein expression in lung adenocarcinoma cells induced the cell cycle arrest in S phase.CONCLUSIONKLF16 is an important tumor suppressor in lung adenocarcinoma, and it can be used as an important molecular marker for predicting the prognosis of the patients with lung adenocarcinoma.

Lung neoplasms; Krüppel-like transcription factor 16; Tumor markers

R363

A

10.3969/j.issn.1000- 4718.2013.11.011

1000- 4718(2013)11- 1978- 06

2013- 08- 21

2013- 10- 10

暨南大學(xué)培育基金資助項(xiàng)目(No. 21613312)

△通訊作者 Tel: 020-38688629; E-mail: cxd19790920@sina.com