八珍益母片中芍藥苷的含量測定

全維明 董禮

八珍益母片由益母草、黨參、熟地黃、當(dāng)歸、白芍、茯苓、白術(shù)(麩炒)、川芎、甘草9味藥材組成，有補虛益氣，養(yǎng)血調(diào)經(jīng)的功效，用于婦女氣血兩虧，體虛乏力，月經(jīng)不調(diào)［1］。八珍益母片收載于衛(wèi)生部藥品標(biāo)準(zhǔn)中藥成方制劑第六冊，標(biāo)準(zhǔn)中未收載含量測定方法。《中國藥典》2010年版一部收載了HPLC法測定八珍益母丸［2］和八珍益母膠囊［2］中芍藥苷的含量。本文對主藥白芍中芍藥苷的含量測定方法進行研究，建立了HPLC法測定芍藥苷含量的方法，本方法簡便、準(zhǔn)確，重復(fù)性好，適合八珍益母片中芍藥苷的定量分析。

1 儀器和試藥

Agilent 1100高效液相色譜儀，賽多利斯BD-125電子天平，色譜柱 Agilent 20RBAX SB-C18(250 mm×4.6 mm，5μm)、Phenomenex 00G-4252-E0 C18(250 mm × 4.6 mm，5μm)、Waters Symmetry ShieldTM RP18(250 mm ×4.6 mm，5μm);芍藥苷對照品購自中國藥品生物制品檢定所(批號:110736-200934);乙腈為色譜純，乙醇、磷酸為分析純;八珍益母片由雅安三九藥業(yè)有限公司研制，批號:100401，100402，100403。

2 溶液的制備

2.1 對照品溶液 稱取芍藥苷對照品13.05 mg，置于25 ml容量瓶中，加稀乙醇溶解并稀釋至刻度，即得每1 ml含芍藥苷0.522 mg的對照品溶液。

2.2 供試品溶液和陰性對照溶液 取本品10片，精密稱定，研細，精密稱取1.0 g粉末置于25 ml容量瓶中，加稀乙醇適量，超聲40 min溶解后，加稀乙醇至刻度，濾過，作為供試品溶液。另取缺白芍藥材的陰性對照樣品10片，同法制成陰性對照溶液。

3 色譜條件

色譜柱 Agilent 20RBAX SB-C18(250 mm×4.6 mm，5μm)，流動相為乙腈-0.1%磷酸溶液(17∶83)，檢測波長:230nm，流速:1.0 ml/min，進樣量:10 μl，柱溫 35℃。取對照品溶液1 ml加稀乙醇至10 ml，在本文色譜條件下，理論塔板數(shù)大于8000，芍藥苷對照品和供試品、陰性樣品的色譜圖見圖1。

圖1 高效液相色譜圖

4 方法學(xué)考察

4.1 線性關(guān)系考察 精密量取對照品溶液0.2，0.5，1，2，4 ml，用稀乙醇定溶到5 ml，按本文色譜條件各進樣10μL，以峰面積值Y為縱坐標(biāo)，進樣量X為橫坐標(biāo)繪制標(biāo)準(zhǔn)曲線，得回歸方程:Y=10.4X-115.8 r=0.9999

結(jié)果表明芍藥苷進樣量在0.2088～4.176μg范圍內(nèi)線性關(guān)系良好。

4.2 精密度試驗 取供試品溶液，在本文色譜條件下重復(fù)進樣6次，記錄峰面積，結(jié)果RSD為0.6%(n=6)。

4.3 穩(wěn)定性考察 取供試品溶液，在0，4，8，12，16，24 h進行測定，計算RSD為0.73%。表明供試品溶液在24 h內(nèi)穩(wěn)定。

4.4 重復(fù)性試驗 分別平行配制同一批樣品(批號100401)的供試品溶液6份，在本文色譜條件下進樣，測定，芍藥苷含量平均值為0.535 mg/片，RSD為1.2%。結(jié)果重復(fù)性良好。

4.5 加樣回收率試驗 精密稱取已經(jīng)測知含量的八珍益母片(芍藥苷含量為0.535 mg/片)細粉0.5 g，加入芍藥苷對照品，稀乙醇溶解，進樣10 μl。結(jié)果加樣回收率在97.7% ～99.7%之間，平均加樣回收率為98.7%(n=6)。

4.6 樣品測定 取三批樣品，按“2.2”項下方法制備供試品溶液和“3”項下色譜條件測定峰面積，按外標(biāo)法計算芍藥苷的含量，結(jié)果見表1。

表1 樣品測定結(jié)果(n=4)

4.7 耐用性驗證 用phenomenex 00G-4252-E0 C18(250 mm×4.6 mm，5μm)、Agilent 20RBAX SB-C18(250 mm × 4.6 mm，5μm)、Waters Symmetry ShieldTM RP18(250 mm ×4.6 mm，5μm)3根不同廠家的色譜柱，分別按照上述色譜條件測定芍藥苷的含量，RSD為0.9%。

5 結(jié)論

八珍益母片為非處方藥，以芍藥苷的含量作為指標(biāo)，可有效地控制其產(chǎn)品質(zhì)量。本方法簡便、準(zhǔn)確，重復(fù)性好，可用于八珍益母片中芍藥苷的含量測定。

［1］ Drug Specification Promulgated by the Ministry of Public Health，P R China(衛(wèi)生部藥品標(biāo)準(zhǔn)).WS3-B-1076-92

［2］ 國家藥典委員會.中國藥典(一部)，北京，中國醫(yī)藥科技出版社，2010:435，436.