謝寧 王玉平 王楓 顏耀東 王成傳

(1.空軍航空醫(yī)學研究所附屬醫(yī)院，100089；2.空軍后勤部衛(wèi)生部，100720；3.空軍總醫(yī)院，100142；4.沈陽軍區(qū)興城療養(yǎng)院，100125)

決明消障丸是由石決明、牡丹皮、密蒙花、羚羊粉、黃精等16味藥組成，具有滋陰填精，養(yǎng)肝明目，退翳消障之功效。臨床上能消除眼球沉淀物，改善視力，主治早期老年性白內(nèi)障等[1]。原質(zhì)量標準中未制定含量測定項目，為控制產(chǎn)品質(zhì)量，本研究選用高效液相色譜(HPLC)法測定主藥牡丹皮中丹皮酚的含量，方法簡便、準確、重現(xiàn)性好[2-3]?，F(xiàn)報告如下。

1 材料與方法

1.1 材料

1.1.1 儀器 島津LG-10ATVP高效液相色譜儀，SPD-10AVP紫外檢測器，SIL10A自動進樣器；CR5A數(shù)據(jù)處理機。

1.1.2 試劑 丹皮酚對照品 (中國藥品生物制品檢定所，批號110736-200322)。決明消障丸 (本院生產(chǎn)制劑，批號20051021)，所用試劑均為色譜或分析純。

1.2 方法

1.2.1 色譜條件 色譜柱：Diamonsil C18(4.6 nm×250 nm，5μm)；流動相：甲醇∶水(65∶35)；檢測波長：274 nm；流速：1.0 mL/min；進樣量：20μL，理論板數(shù)按丹皮酚峰計算＞5 000。

1.2.2 溶液的制備 精密稱取干燥至恒重的丹皮酚對照品適量，于50 mL量瓶中加60%甲醇制成0.02 mg/mL的溶液，即得對照品溶液。取決明消障丸，剪碎，精密稱取約0.5 g至具塞錐形瓶中，精密加入60%甲醇50 mL，密塞，稱重，超聲處理45 min，放冷，再精密稱重，用50%甲醇補足減失重量，搖勻，濾過，取續(xù)濾液，作為供試品溶液。

1.2.3 干擾試驗 分別精密吸取丹皮酚對照品溶液和供試品溶液及缺牡丹皮的陰性對照樣品溶液各20μL，注入液相色譜儀中[4]。

1.2.4 線性考查 精密吸取丹皮酚對照品溶液2，5，10，15，20μL注入液相色譜儀，以進樣量(μL)為橫坐標，峰面積積分值為縱坐標繪制標準曲線[5]。

1.2.5 精密度重復性試驗 精密吸取同一對照品溶液20μL，重復樣5次，測定樣品含量，考查重現(xiàn)性[6]。

1.2.6 加樣回收率試驗 取已知含量樣品6份，分別精密加入丹皮酚對照樣品10μL計算回收率[7]。

2 結果

2.1 干擾試驗(圖1) 測定結果為陰性對照液與丹皮酚對照液相同保留時間處未顯色譜峰，故認為陰性干擾。

圖1 對照品(A)、陰性對照(B)、供試品(C)溶液的HPLC色譜圖

2.2 線性關系 丹皮酚的回歸方程Y＝54 479.60X＋20 887.92，r＝0.999 6。由此確定丹皮酚線性范圍為0.040 5～0.040 52μg。

2.3 精密度試驗 相對標準偏差(RSD)＝0.54%，表明精密度較好。

2.4 重復性試驗RSD＝2.62%，表明該方法重現(xiàn)性良好[8]。

2.5 穩(wěn)定性試驗 在0～24 h內(nèi)丹皮酚對照品和供試品的RSD分別為2.42%和2.49%，表明在此時間范圍內(nèi)對照品溶液和供試品溶液具有良好的穩(wěn)定性。

2.6 加樣回收率試驗 丹皮酚平均率為99.25%，RSD＝0.62%。

2.7 樣品測定 取3批樣品以外標法計算樣品中丹皮酚含量，批號為051207.060314.060401的樣品中丹皮酚含量分別為0.623 5，0.598 2，0.654 7 mg/g。

3 討論

試驗結果表明，在含量測定供試品溶液制備中，根據(jù)丹皮酚的溶解性，考察了40%，60%，80%甲醇分別超聲提取15，30，45 min的提取效率，并與60%甲醇回流提取法相比較，結果超聲提取法與回流提取法的提取效率相近，故選擇超聲提取，操作簡便易行[9-10]。

通過試驗發(fā)現(xiàn)，以選擇甲醇∶水(65∶35)作為流動相，分離效果較好，丹皮酚峰與其他峰達到了良好的分離度(R＞1.5)，故采用此色譜條件進行含量測定。研究表明，采用HPLC法作為決明消障丸質(zhì)量標準檢測方法，測定決明消障丸中丹皮酚的含量，能夠更有效控制該制劑的質(zhì)量。

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