陳曉峰，張?jiān)伱?，汪明志?張家港市中醫(yī)醫(yī)院，江蘇張家港5600；.南京中醫(yī)藥大學(xué)藥學(xué)院，南京0046）

復(fù)方曲安奈德乳膏為張家港市中醫(yī)醫(yī)院自制制劑，由醋酸曲安奈德、鹽酸苯海拉明等制成。本品具有抗真菌感染作用，主要用于濕疹、神經(jīng)性皮炎、股癬、體癬等的治療。由于原制劑的質(zhì)量標(biāo)準(zhǔn)中無含量測定項(xiàng)，為了提高本品的質(zhì)量標(biāo)準(zhǔn)，保障用藥安全、有效，本文選擇其中的2種主要成分，建立了反相高效液相色譜（RP-HPLC）法同時(shí)測定其中醋酸曲安奈德和鹽酸苯海拉明含量的方法。結(jié)果表明，所建立的方法簡便、快速、準(zhǔn)確，可用于復(fù)方曲安奈德乳膏的質(zhì)量控制。

1 材料

2695HPLC儀、2998二極管陣列檢測器、Empower 2色譜工作站（美國Waters公司）；Aux220電子分析天平（日本島津公司）；HH-S21-4電熱恒溫水浴鍋（上海恒昌儀器廠）。

醋酸曲安奈德標(biāo)準(zhǔn)品（批號(hào)：100125-201105，供含量測定用，純度：97.8%）、鹽酸苯海拉明標(biāo)準(zhǔn)品（批號(hào)：100066-200807，供含量測定用，純度：99.9%）均來源于中國食品藥品檢定研究院；復(fù)方曲安奈德乳膏（張家港市中醫(yī)醫(yī)院，批號(hào)：110330、110811、100918，含醋酸曲安奈德 2.5 mg/g、鹽酸苯海拉明10.0 mg/g，規(guī)格：每盒20 g）；甲醇為色譜純。

2 方法與結(jié)果

2.1 色譜條件

色譜柱：SunFire C18（250 mm×4.6 mm，5 μm）；流動(dòng)相：甲醇-水（每1000 ml水加入三乙胺7 ml，磷酸調(diào)pH為7.2）（70∶30，V/V），流速：1.0 ml/min；檢測波長：230 nm；柱溫：30 ℃；進(jìn)樣量：10 μl。

取“2.2～2.4”項(xiàng)下3種溶液進(jìn)樣分析，色譜見圖1。

圖1 高效液相色譜圖Fig 1 HPLC chromatograms

由圖1可見，陰性對照溶液在與標(biāo)準(zhǔn)品溶液相應(yīng)的保留時(shí)間處無色譜峰，表明其他成分和基質(zhì)對目標(biāo)成分無干擾，該方法可行。

2.2 標(biāo)準(zhǔn)品溶液的制備

精密稱取醋酸曲安奈德標(biāo)準(zhǔn)品20.00 mg，置于25 ml量瓶內(nèi)，加甲醇完全溶解，并定容至刻度，精密量取5 ml，置于25 ml量瓶內(nèi)，加甲醇稀釋并定容至刻度，搖勻，得0.16 mg/ml的醋酸曲安奈德標(biāo)準(zhǔn)品溶液。精密稱取鹽酸苯海拉明標(biāo)準(zhǔn)品24.2 mg，置于25 ml量瓶內(nèi)，加甲醇完全溶解，并定容至刻度，得0.968 mg/ml的鹽酸苯海拉明標(biāo)準(zhǔn)品溶液。精密吸取等量0.16 mg/ml的醋酸曲安奈德和0.968 mg/ml的鹽酸苯海拉明標(biāo)準(zhǔn)品溶液混合得每1 ml含0.08 mg醋酸曲安奈德和0.484 mg鹽酸苯海拉明的混合標(biāo)準(zhǔn)品溶液。

2.3 供試品溶液的制備

取復(fù)方曲安奈德乳膏約1 g，精密稱定，置于錐形瓶內(nèi)，加甲醇30 ml，于80℃水浴中溶解，轉(zhuǎn)移至50 ml量瓶內(nèi)，放冷，用甲醇定容至刻度，置于冰浴中冷卻2 h，過濾；取濾液5 ml于10 ml量瓶內(nèi)，用甲醇定容至刻度，用0.45 μm微孔濾膜過濾，即得供試品溶液。

2.4 陰性對照溶液的制備

按本品制備工藝制備缺醋酸曲安奈德和鹽酸苯海拉明的輔料及其他成分，按“2.3”項(xiàng)下方法制備，得陰性對照溶液。

2.5 線性關(guān)系考察

分別精密吸取混合標(biāo)準(zhǔn)品溶液1、2、3、4、5、6 ml，置于10 ml量瓶中，用甲醇定容至刻度，得分別含醋酸曲安奈德0.008、0.016、0.024、0.032、0.040、0.048 mg/ml和鹽酸苯海拉明0.0484、0.0968、0.1452、0.1936、0.2420、0.2904 mg/ml的系列混合標(biāo)準(zhǔn)品溶液。分別精密吸取10 μl進(jìn)樣，按“2.1”項(xiàng)色譜條件測定，以峰面積積分值（y）為縱坐標(biāo)，進(jìn)樣質(zhì)量濃度（x）為橫坐標(biāo)繪制標(biāo)準(zhǔn)曲線，得醋酸曲安奈德回歸方程為y＝1395308.4x－10962.9（r＝0.9990），鹽酸苯海拉明回歸方程為y＝646959x－15489（r＝0.9999）。結(jié)果表明，醋酸曲安奈德和鹽酸苯海拉明檢測質(zhì)量濃度線性范圍分別為0.008～0.048、0.0484～0.2904 mg/ml。

2.6 精密度試驗(yàn)

吸取混合標(biāo)準(zhǔn)品溶液10 μl，連續(xù)進(jìn)樣6次，按“2.1”項(xiàng)色譜條件測定。結(jié)果，醋酸曲安奈德和鹽酸苯海拉明的RSD分別為0.7%、0.6%，表明方法精密度良好。

2.7 重復(fù)性試驗(yàn)

取同一批號(hào)（批號(hào)：110330）樣品6份，按“2.3”項(xiàng)下方法制備供試品溶液，按“2.1”項(xiàng)色譜條件測定。結(jié)果，醋酸曲安奈德和鹽酸苯海拉明含量的RSD分別為0.9%、0.5%，表明方法重復(fù)性好。

2.8 穩(wěn)定性試驗(yàn)

取同一批號(hào)供試品溶液，分別在0、2、4、8、12、24 h時(shí)進(jìn)樣，按“2.1”項(xiàng)色譜條件測定。結(jié)果，醋酸曲安奈德和鹽酸苯海拉明含量的RSD均為1.3%，表明醋酸曲安奈德和鹽酸苯海拉明在供試品溶液中24 h穩(wěn)定。

2.9 加樣回收率試驗(yàn)

取批號(hào)為110330（醋酸曲安奈德2.56 mg/g，鹽酸苯海拉明10.27 mg/g）的樣品0.5 g，精密稱定，分別按樣品量的80%、100%、120%加入標(biāo)準(zhǔn)品，各平行3份，按“2.3”項(xiàng)下方法制備供試品溶液，按“2.1”項(xiàng)色譜條件測定，計(jì)算回收率。結(jié)果，醋酸曲安奈德平均回收率為99.0%，RSD＝1.1%；鹽酸苯海拉明平均回收率為98.8%，RSD＝1.6%，詳見表1。

2.10 樣品含量測定

按“2.3”項(xiàng)下方法制備供試品溶液，按“2.1”項(xiàng)色譜條件測定3批樣品的含量。批號(hào)為100918、110330、110811的樣品中，醋酸曲安奈德的含量分別為2.55、2.56、2.68 mg/g（標(biāo)示量為2.5 mg/g），平均值為2.60 mg/g；鹽酸苯海拉明的含量分別為10.05、10.27、11.02 mg/g（標(biāo)示量為10.0 mg/g），平均值為10.45 mg/g。

表1 回收率試驗(yàn)結(jié)果（n＝9）Tab 1 Results of recovery tests（n＝9）

3 討論

根據(jù)文獻(xiàn)，測定醋酸曲安奈德和鹽酸苯海拉明分別采用的流動(dòng)相有甲醇-乙腈-0.15%醋酸銨（45∶35∶20，V/V/V）[1]，甲醇-水（三乙胺2 ml，加水至300 ml，磷酸調(diào)pH至7.6）（70∶30，V/V）[2]，0.5%三乙胺（用醋酸調(diào)pH＝3）-甲醇（50∶50，V/V）[3]，水-甲醇-四氫呋喃（60∶28∶12，V/V/V）[4]，甲醇-水-三乙胺（45∶56∶1，V/V/V）[5]，甲醇-水（75∶25，V/V）[6]等不同溶劑、不同比例的溶液。筆者通過比較不同流動(dòng)相的分離效果，最終選擇甲醇-水（每1000 ml加入三乙胺7 ml，磷酸調(diào)pH為7.2）（70∶30，V/V）為同時(shí)測定本制劑中醋酸曲安奈德和鹽酸苯海拉明含量的流動(dòng)相。結(jié)果表明陰性對照未見干擾，加樣回收率試驗(yàn)結(jié)果符合要求，且加入三乙胺和用磷酸調(diào)節(jié)pH后可以顯著改善色譜峰的峰形。

通過全波長掃描，醋酸曲安奈德在240 nm波長處吸光度最大，但是鹽酸苯海拉明吸光度較小；而當(dāng)選擇230 nm波長時(shí)，兩者均有較好的吸收，故選擇檢測波長為230 nm。

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