李俊環(huán)，曲 波，閆超杰，付海濱

(1.沈陽出入境檢驗檢疫局，遼寧 沈陽 110016； 2.沈陽農(nóng)業(yè)大學(xué)生物科學(xué)技術(shù)學(xué)院，遼寧 沈陽 110161；3.錦州出入境檢驗檢疫局，遼寧 錦州 121013)

三裂葉豚草根際線蟲種類調(diào)查

李俊環(huán)1，曲 波2，閆超杰3，付海濱1

(1.沈陽出入境檢驗檢疫局，遼寧 沈陽 110016； 2.沈陽農(nóng)業(yè)大學(xué)生物科學(xué)技術(shù)學(xué)院，遼寧 沈陽 110161；3.錦州出入境檢驗檢疫局，遼寧 錦州 121013)

在遼寧境內(nèi)10個三裂葉豚草(Ambrosiatrifida)多發(fā)地進行調(diào)查，采集豚草根際土壤，淘洗-過篩-重糖離心法分離線蟲并鏡檢，分離出20個屬的線蟲，鑒定出7種：雙宮螺旋線蟲(Helicotylenchusdihystera)，鉤形矮化線蟲(Tylenchorhynchusaduncus)，小尾盾線蟲(Scutellonemabrachyurus)，喜悅平滑墊刃線蟲(Psilenchushilarulus)，畸形新頭葉環(huán)線蟲(Neolobocriconemaaberrans)，裂片真滑刃線蟲(Aphelenchussparsus)和小莖線蟲(Ditylenchusparvus)。同時，還分離到其他植物線蟲、捕食性線蟲、食細菌線蟲和食真菌線蟲。不同種類線蟲出現(xiàn)的頻率和數(shù)量差異較大。

三裂葉豚草；線蟲；遼寧

豚草(Ambrosia)原產(chǎn)于美國西南部和墨西哥北部的索諾蘭沙漠地區(qū)[1]，因其適應(yīng)性強、入侵風(fēng)險大，危害嚴重，所以被列為世界性惡性雜草。為消滅豚草，各國每年都投入大量資金進行防治，防治方法主要有人工拔除、化學(xué)除草、生物防治，雖取得一定成效，但始終不能完全根除[2]。遼寧省是豚草危害的重災(zāi)區(qū)，已報道的種類有普通豚草(A.artemisiifolia)和三裂葉豚草(A.trifida)[3]。

目前對豚草的研究主要集中在豚草的生物學(xué)特性、危害和防治等方面[1-4]。豚草根際線蟲的研究僅在豚草根際土壤動物的研究中略有涉及，研究表明豚草對線蟲有一定的抑制作用[5]。有關(guān)豚草根際線蟲具體種類及線蟲對豚草作用方面的研究鮮見報道，因此，本研究針對三裂葉豚草根際線蟲的種類、結(jié)構(gòu)組成及分布情況進行分析，以期為進一步明確不同線蟲種類與三裂葉豚草間相互作用，進而為防治豚草提供基礎(chǔ)資料。

1 材料與方法

1.1樣地選擇 2010年8月，在遼寧境內(nèi)沿沈大高速公路選取10個三裂葉豚草多發(fā)地采樣，在每個采樣點采集根系及根際土(表1)。

1.2樣品采集 選取三裂葉豚草，除去表面3～5 cm的表土、雜草，采集距離地表30 cm以內(nèi)的根系及根際土300 g左右，裝入塑料袋內(nèi)，標明采集日期、地點、土壤類型。

表1 采樣地信息 Table 1 Brief introduction of sampling sites

1.3線與蟲分離 利用淘洗-過篩-重糖離心法分離線蟲[6]，每份土樣充分混勻，放入燒杯，加適量清水，攪拌后靜置1 min。將上層懸浮液倒入套篩，套篩內(nèi)徑自上而下分別為830、150和38 μm。最后將38 μm篩子中的物體沖入離心管，2 000 r·min-1離心3 min。去掉上清液，加入適量蔗糖溶液(484 g蔗糖∶1 L蒸餾水)，攪拌后2000r·min-1離心3 min，取上清液倒入25 μm篩子中，淋洗篩子，收集含線蟲的淋洗液。在60 ℃的水浴鍋中加熱10 min。加入等量的2×TAF固定線蟲。

1.4線蟲鑒定 在體視顯微鏡下將線蟲挑到滴有固定液的玻片上，光學(xué)顯微鏡下進行線蟲種屬的鑒定。記錄各項測量值，同時根據(jù)參考文獻[7-11]進行線蟲種的鑒定。線蟲形態(tài)描述中采用的英文縮略語和符號意義如下，n：測量的線蟲條數(shù)；L：體長；a：體長/最大體寬；b：體長/食道長；b′：體長/頭端至食道腺末端的距離；c：體長/尾長；c′：尾長/肛門處蟲體直徑；V：頭端至陰門的距離×100/體長；St：口針長度；Tail：尾長；Pus1：后陰子宮囊長與陰門處體寬的比值； Pus2：后陰子宮囊長×100/肛陰距距離； R：體環(huán)數(shù)；Rst：唇盤與口針基球之間的體環(huán)數(shù)；Roes：唇盤與賁門瓣之間的體環(huán)數(shù)；Rex：唇盤與排泄孔后第1環(huán)之間的體環(huán)數(shù)；Rv：陰門與尾端之間的體環(huán)數(shù)；Ran：肛門與尾端之間的體環(huán)數(shù)；m：口針針錐部長/口針長；o：口針基球至背食道腺開口的距離/口針長；Spi：交合刺長度。

2 結(jié)果與分析

2.1線蟲鑒定

2.1.1雙宮螺旋線蟲(Helicotylenchusdihystera)

測量數(shù)據(jù)：

雌蟲(n=20)，L=728.6(697.4～798.4) μm;a=29.7(28.3～32.1);b=6.0(5.7～6.3);b′=4.8(4.7～4.9);c=37.1(27.6～48.8);c′=1.0(0.9～1.1);V=61.8(60.5～62.9);St=26.0(22.6～32.8)μm;m=52.8(51.1～54.0);o=43.2(40.2～46.2)。

形態(tài)特征：

雌蟲，溫和熱殺死后蟲體呈螺旋形；側(cè)區(qū)4條側(cè)線；唇區(qū)與蟲體連續(xù)不縊縮，有3～4條唇環(huán)；口針中等長度，口針基球后端圓形；中食道球卵圓形；半月體2個體環(huán)長，位于排泄孔前1～2個體環(huán)處；食道腺從腹面覆蓋腸；雙卵巢對伸，授精囊圓形，內(nèi)無精子；側(cè)尾腺孔小，孔狀，位于肛門前4～5個體環(huán)間；尾較短，腹面有7～10條環(huán)紋；尾向腹面彎曲，尾末端常有一個腹向鈍突起。

2.1.2鉤形矮化線蟲(Tylenchorhynchusaduncus)

測量數(shù)據(jù)：

雌蟲(n=5)，L=637.6(599.7～700.6) μm;a=24.3(22.3～26.0);b=5.6(5.2～6.0);c=16.1(15.5～16.8);c′=3.0(2.8～3.2);V=56.8(55.0～61.6);Tail=36.1(30.5～41.2) μm;St=18.9(17.8～19.8) μm。

形態(tài)特征：

雌蟲，經(jīng)溫和熱殺死后蟲體向腹面彎曲呈“C”形；體環(huán)明顯；側(cè)區(qū)有4條側(cè)線；唇區(qū)較圓，明顯縊縮，具4～5個唇環(huán)；口針強壯，口針基球圓形，向后傾斜；背食道腺開口到口針基球的距離2.1～2.6 μm；中食道球較大，卵圓形，食道瓣門明顯；食道腺長梨形，與腸平截；陰門通常在體中后部，雙卵巢對伸；尾圓錐形，向末端逐漸變細，尾末端無環(huán)紋；尾部有20～22個環(huán)紋。

2.1.3小尾盾線蟲(Scutellonemabrachyurus)

測量數(shù)據(jù)：

雌蟲(n=6)，L=841.9(710.7～948.5) μm;a=24.95(18.3～31.7);b=7.3(6.2～8.2);b′=5.8(5.4～7.4);c=54.7(44.8～67.9);c′=0.7(0.5～0.8);V=57.4(54.6～61.4);St=30.5(27.3～32.9) μm;Tail=16.2(12.5～20.3) μm。

形態(tài)特征：

雌蟲，溫和熱殺死后蟲體呈開放螺旋形或“6”字形，環(huán)紋清楚；唇區(qū)半球形，有4個明顯的唇環(huán)，縊縮明顯，頭骨化明顯；口針基球球形；背食道腺開口到口針基球的距離較短；食道腺從背面覆蓋腸的末端；陰門在蟲體中后部，陰門裂縫狀，明顯；雙卵巢，對生；側(cè)線4條；側(cè)區(qū)在側(cè)尾腺口處網(wǎng)格化；側(cè)尾腺口較大，盾片狀，位丁肛門后2～4體環(huán)處；尾短，圓柱形。

2.1.4喜悅平滑墊刃線蟲(Psilenchushilarulus)

測量數(shù)據(jù)：

雌蟲(n=15)，L=941.6(817.1～971.9) μm;a=42.9(36.7～47.7);b=6.3(5.8～7.7);c=7.1(5.7～7.6);c′=9.4(7.9～11.3);V=47.9(43.2～52.7);Tail=131.3(120.3～155.5) μm;St=13.8(11.5～14.2) μm。雄蟲(n=3)，L=834.2(766.1～891.0) μm;a=38.7(32.2～41.3);b=5.6(5.0～6.3);c=7.0(6.7～7.4);c′=8.7(7.0～10.1);Spi=21.3(20.5～21.5) μm;St=12.0(11.3～13.7) μm。

形態(tài)特征：

雌蟲,蟲體細長，體表環(huán)紋細密；唇區(qū)較高，光滑，前端平圓，不縊縮；口針纖細，錐部長約為口針長的一半，無口針基球；食道前體部長筒形，中食道球卵圓形，位于食道中部稍后方，瓣門明顯；后食道腺梨形，排泄孔位于食道腺前方，位置常有變化；陰門橫裂，雙卵巢對伸，授精囊長橢圓形；尾較長，末端膨大呈棍棒狀。雄蟲,蟲體前部形態(tài)與雌蟲相似。交合刺向腹面彎曲成弓形，引帶纖細，交合傘包到尾長的35%～37%。

2.1.5畸形頭葉環(huán)線蟲(Neolobocriconemaaberrans)

測量數(shù)據(jù)：

雌蟲(n=5)，L=363.2(359.5～455.1) μm;a=7.3(6.2～8.6);b=2.6(2.2～3.2);c=8.1(7.3～8.8);c′=1.0(0.8～1.3);V=83.0(81.2～84.3);R=37.6(37.0～40.0);Rst=7.0;Rex=12.6(12.0～13.0);Roes=13.2(13.0～14.0);Rv=3.2(3.0～4.0);Ran=2.4(2.0～3.0);St=71.9(67.5～75.1) μm;Tail=44.7(40.2～47.2) μm。

形態(tài)特征：

雌蟲，蟲體圓筒形略向腹面彎曲，頭尾兩端略尖，體環(huán)明顯后翻；體環(huán)數(shù)為37～40條，比較粗大，后翻明顯；頭環(huán)2條，光滑，第1頭環(huán)平，大如草帽，第2頭環(huán)收縮小于第1頭環(huán)，似頸；口針基球錨形，食道前體部與中食道球合并，中食道球發(fā)達，峽部粗而短，被神經(jīng)環(huán)圍繞，食道基球梨形；體環(huán)后緣鈍齒狀并有細小的棘片；陰門位于蟲體后部，單生殖腺前伸；尾末端鈍圓，棘片加長且聚集。

2.1.6裂片真滑刃線蟲(Aphelenchussparsus)

測量數(shù)據(jù)：

雌蟲(n=5)，L=709.2(656.3～773.0) μm;a=25.4(20.1～30.2);b=6.9(6.3～7.7);c=30.9(26.6～36.4);c′=1.6(1.3～1.9);V=76.9(74.9～78.9);Tail=24.9(21.0～27.5) μm;St=13.9(11.1～15.8) μm。

形態(tài)特征：

雌蟲，蟲體經(jīng)溫和熱殺死后較直；蟲體圓筒形，兩端稍變細，表皮環(huán)紋細；體中部側(cè)區(qū)具4～6條側(cè)線；唇區(qū)較低，不縊縮，前端平圓；口針長11.1～15.8 μm，無口針基球；食道前體部圓筒形，中食道球較大，呈卵圓形；食道腺呈長葉狀，從背側(cè)覆蓋腸；排泄孔位于中食道球后2/3～1個中食道球長度處；陰門位于蟲體后部，陰道壁較厚，稍向前傾斜，陰門唇突起；前生單卵巢，卵母細胞單行排，前伸；后陰子宮囊短；尾較短，呈圓筒形，末端圓。

2.1.7小莖線蟲(Ditylenchusparvus)

測量數(shù)據(jù)：

雌蟲(n=20)，L=672.4(641.9～712.7) μm;a=36.1(31.5～42.1);b=5.0(4.7～6.1);c=9.6(9.1～10.6);c′=6.6(4.7～8.1);V=74.4(71.5～76.1);Pus1=2.7(1.8～3.9);Pus2=35.7(28.1～43.0);Tail=60.4(58.2～61.6) μm;St=7.6(7.1～8.1) μm。雄蟲(n=1)，L=661.0 μm;a=40.2;b=5.7;c=9.9;c′=6.3;Spi=15.3 μm;St=7.6 μm。

形態(tài)特征：

雌蟲，溫和熱殺死后蟲體較直;唇區(qū)不縊縮，唇環(huán)不明顯；側(cè)區(qū)4條側(cè)線，側(cè)區(qū)約占體寬的1/3左右?？卺樺F部約是桿部長的1/2；中食道球呈細長的卵圓形，瓣門不明顯；半月體位于后食道腺前部位置；后食道腺與腸平截，不覆蓋腸；單卵巢前伸，授精囊發(fā)達，長圓形，內(nèi)常充滿圓形精子；后陰子宮囊較短，長度約為陰門處蟲體直徑的1.8～3.9倍；尾長是肛門處蟲體直徑的4.7～8.1倍，尾向末端逐漸變細，末端銳尖。雄蟲，蟲體前端形態(tài)與雌蟲相似；交合刺成對;交合傘包蓋尾端的21%;引帶長5 μm;尾向末端逐漸變細，末端銳尖。

2.2線蟲群體結(jié)構(gòu) 在不同的土壤樣品中均可分離到植物線蟲、捕食性線蟲、食真菌線蟲和食細菌線蟲(表2)。植物線蟲為螺旋線蟲屬、小環(huán)線蟲屬等；捕食性線蟲如長尾線蟲屬；食真菌線蟲包括滑刃線蟲屬、真滑刃線蟲屬；食細菌線蟲則為真頭葉線蟲屬、小桿線蟲屬等。不同種類的線蟲出現(xiàn)頻率和數(shù)量差異較大。螺旋線蟲出現(xiàn)頻率最高，為50%，分別在遼陽市、燈塔市、鞍山市、海城市和瓦房店有發(fā)現(xiàn)，而且在鞍山市和瓦房店土樣中數(shù)量較多。小桿線蟲出現(xiàn)頻率40%，遼陽市和燈塔市采樣點小桿線蟲數(shù)量相對較多。小環(huán)線蟲出現(xiàn)頻率30%，在每個采樣點小環(huán)線蟲數(shù)量均較少。矮化線蟲、盾狀線蟲、新頭葉環(huán)線蟲、劍針線蟲和擬長針線蟲出現(xiàn)頻率和數(shù)量均較少。鞍山市和瓦房店采樣到線蟲種類較多，分別有5種和6種。

3 討論

本研究對三裂葉豚草根際土壤中線蟲的種類進行初步調(diào)查，結(jié)果表明，遼寧部分地區(qū)分布的三裂葉豚草根際土壤線蟲的種類較為豐富，涉及植物線蟲、捕食性線蟲、食真菌線蟲和食細菌線蟲，共鑒定出20個屬的線蟲。植物線蟲為螺旋線蟲屬、小環(huán)線蟲屬等，捕食性線蟲如長尾線蟲屬，食真菌線蟲包括滑刃線蟲屬、真滑刃線蟲屬，食細菌線蟲則為真頭葉線蟲屬、小桿線蟲屬等。鑒定到種的有7種線蟲：雙宮螺旋線蟲、喜悅平滑墊刃線蟲、畸形新頭葉環(huán)線蟲、鉤形矮化線蟲、小尾盾線蟲、裂片真滑刃線蟲和小莖線蟲。

表2 三裂葉豚草根際線蟲群體結(jié)構(gòu)Table 2 Composition of soil nematodes community of Ambrosia trifida

注：1～10條標注“+”，10～100條標注“++”，100條以上標注“+++”。

Note:“+” mean number of soil nematodes are 1-10, and “++”10-100, and “+++” more than 100.

孫剛等[5]在吉林調(diào)查了不同的豚草和三裂葉豚草群落，分析豚草對土壤動物4個優(yōu)勢類群(線蟲類、彈尾類、甲螨類和線蚓類，鑒定到了綱、目水平)的作用，并從土壤動物個體數(shù)量和類群數(shù)變化的角度，指出豚草對于土壤線蟲類群抑制作用強，普通豚草大于三裂葉豚草。未發(fā)現(xiàn)關(guān)于豚草根際線蟲種類以及線蟲是否對豚草有抑制作用等相關(guān)研究。此次分離到的植物線蟲主要為根部外寄生線蟲。寄生在根部的線蟲可造成根系的衰弱、畸形或腐爛，致使植物地上部分的莖和葉發(fā)育不良甚至枯死[12]。這些植物線蟲能否同樣對三裂葉豚草的生長過程產(chǎn)生抑制作用，以及這種作用的大小及作用機制都有待明確。同時，因采樣地點、采樣量、寄主種類的限制，以及分離過程中未收集體長較大的種類，分離鑒定的線蟲種類有限，需要進一步研究。

[1] 曾珂,朱玉瓊,劉家熙.豚草屬植物研究進展[J].草業(yè)學(xué)報,2010,19(4):212-219.

[2] 金虹.豚草在我國的生物防治研究進展[J].草業(yè)與畜牧,2006(7):7-10.

[3] 王洪林,王芝恩,凌帥.淺析遼寧中東部地區(qū)豚草分布及防控策略[J].遼寧林業(yè)科技,2010,39(4):40-54.

[4] 郭瓊霞,黃可輝,劉景苗.豚草屬雜草的研究概況與分析[J].武夷科學(xué),2004,20:165-173.

[5] 孫剛,殷秀琴,祖元剛.豚草發(fā)生地土壤動物的初步研究[J].生態(tài)學(xué)報,2002,22(4):608-611.

[6] 劉維志.植物線蟲志[M].北京:中國農(nóng)業(yè)出版社,2004.

[7] 謝輝.植物線蟲分類學(xué)[M].第二版.北京:高等教育出版社,2005.

[8] 秦一統(tǒng).甘肅省嘉峪關(guān)市洋蔥土壤線蟲鑒定及種群變化規(guī)律的研究[D].蘭州：甘肅農(nóng)業(yè)大學(xué),2009.

[9] Deswal P，Bajaj H K．Species of criconematids (Nematoda：Criconematina) from Haryana，India[J]．Systematic Parasitology，1987，9：185-197．

[10] 馬秋娟.中國滑刃目線蟲主要屬種的分類研究[D].沈陽：沈陽農(nóng)業(yè)大學(xué),2000.

[11] Brzeski M W．Review of the genusDitylenchusFilipjev，1936(Nematoda：Anguinidae)[J]．Revue de Nématologie，1991，14：9-59．

[12] 段玉璽,吳剛.植物線蟲病害防治[M].北京:中國農(nóng)業(yè)科技出版社,2002.

InvestigationandidentificationofnematodesofAmbrosiatrifidaroot

LI Jun-huan1，QU Bo2，YAN Chao-jie3，F(xiàn)U Hai-bin1

(1.Shenyang Entry-Exit Inspection and Quarantine Bureau, Shenyang 1100162, China; 2.College of Biological Technology, Shenyang Agricultural University, Shenyang 110161, China; 3.Jinzhou Entry-Exit Inspection and Quarantine Bureau, Jinzhou 121013, China)

Seven nematodes species were investigated and identified fromAmbrosiatrifidaroot-soil samples which were collected from ten counties in Liaoning Province. They areHelicotylenchusdihystera,Tylenchorhynchusaduncus,Scutellonemabrachyurus,Psilenchushilarulus,Neolobocriconemaaberrans,Aphelenchussparsus,Ditylenchusparvus. Parasitic nematodes, predatory nematodes, bacterial-feeding nematodes and fungi-feeding nematodes from other plants were also studied. The frequency and the number of different types of nematodes species were quite different.

Ambrosiatrifida; nematodes; Liaoning

LI Jun-huan E-mail:wanltciq@sina.com

2011-12-02接受日期：2012-01-20

遼寧出入境檢驗檢疫局科研項目(LK13-2010)；國家科技重大專項(2012zx07202004-001)

李俊環(huán)(1977-)，女，山東德州人，農(nóng)藝師，碩士，主要從事植物檢疫及食品微生物檢測工作。E-mail:wanltciq@sina.com

S45

A

1001-0629(2013)01-0136-05