王大為,張婷婷,劉鴻鋮,崔海月
(吉林農(nóng)業(yè)大學(xué)食品科學(xué)與工程學(xué)院,吉林 長(zhǎng)春 130118)
玉米蛋白粉(corn gluten meal,CGM)是玉米濕法生產(chǎn)淀粉的副產(chǎn)物[1]。玉米醇溶蛋白占玉米蛋白粉的65%,是玉米中主要貯藏蛋白[2],易溶于60%~95%乙醇[3-4]。玉米醇溶蛋白由大量的非極性氨基酸組成,因而玉米醇溶蛋白具有較強(qiáng)的疏水性。玉米醇溶蛋白分子間以疏水鍵、氫鍵和二硫鍵連接在一起,易于形成薄膜[5-6]。單一的玉米醇溶蛋白形成的薄膜,雖然具有透明度高、隔氧、防潮等優(yōu)點(diǎn)[7],但其機(jī)械性能較差,如脆性強(qiáng)、易斷裂,柔韌性差,不符合食品包裝需要,嚴(yán)重影響了其實(shí)際應(yīng)用價(jià)值[8]。為了改善玉米醇溶蛋白膜的機(jī)械性能,常采用增塑劑如多羥基化合物、糖類、脂肪酸等[9]。山梨醇具有親水性,其—OH可與玉米醇溶蛋白分子以氫鍵結(jié)合,提高膜的機(jī)械性能,山梨醇的吸濕性還使膜結(jié)合更多的水分子,提高膜的柔韌度[10]。半乳糖能使膜與水接觸角增大,增加膜表面張力,提高膜的機(jī)械性能[11]。油酸和玉米醇溶蛋白分子都是疏水性物質(zhì),制膜時(shí)油酸分子可介入到玉米醇溶蛋白分子之間,減弱玉米醇溶蛋白分子間的應(yīng)力而使膜變得柔韌[12]。3種增塑劑從不同的方面改善蛋白膜的機(jī)械性質(zhì)。本研究采用響應(yīng)面分析了復(fù)合增塑劑組成及用量對(duì)玉米醇溶蛋白膜拉伸強(qiáng)度的影響,并用掃描電鏡觀察蛋白膜的表面結(jié)構(gòu),確定最佳復(fù)合增塑劑用量,為玉米醇溶蛋白在可食性食品包裝材料方面的應(yīng)用提供參考。
玉米醇溶蛋白粉 實(shí)驗(yàn)室自制。
無(wú)水乙醇(分析純) 北京化工廠;半乳糖(食品級(jí))、山梨醇(食品級(jí)) 上海邁潮有限公司;油酸(分析純) 天津市光夏精細(xì)化工研究所。
JJ500型精密電子天平 美國(guó)雙杰兄弟(集團(tuán))有限公司;101A-2E型數(shù)顯式電熱鼓風(fēng)干燥箱 上海實(shí)驗(yàn)儀器廠有限公司;PHS-3BW型電腦數(shù)顯酸度計(jì) 上海理達(dá)儀器廠;SSX-550掃描電子顯微鏡 日本島津公司;TA-XT2i性物性儀 Stable Micro Systems;螺旋測(cè)微計(jì) 香港豐量國(guó)際集團(tuán)有限公司。
1.3.1 玉米醇溶蛋白膜制備及工藝流程
取玉米醇溶蛋白粉2.00g,用80%乙醇溶液配制成為10g/mL的玉米蛋白醇膜溶液,加入復(fù)合增化劑,調(diào)節(jié)膜液pH8后,60℃恒溫、300r/min條件磁力攪拌30min,脫氣消泡后,澆入聚丙烯盤上,于50℃干燥2h,起膜,置于室溫環(huán)境下(相對(duì)濕度50%)平衡48h后用于膜性機(jī)械能測(cè)試。
1.3.2 玉米醇溶蛋白膜機(jī)械性能測(cè)定[13]
1.3.2.1 拉伸強(qiáng)度(TS)
式中:TS為膜的拉伸強(qiáng)度/MPa;P為斷裂負(fù)荷/N;b為膜的寬度/mm;d為膜的厚度/mm。
1.3.2.2 斷裂伸長(zhǎng)率(E)
式中:E為膜的斷裂伸長(zhǎng)率/%;L1膜斷裂后的長(zhǎng)度/mm;L0膜斷裂前的長(zhǎng)度/mm。
1.3.3 復(fù)合增塑劑各組分用量對(duì)玉米蛋白膜機(jī)械性能影響的單因素試驗(yàn)
1.3.3.1 山梨醇用量對(duì)玉米醇溶蛋白膜拉伸強(qiáng)度的影響
玉米醇溶蛋白2.00g、半乳糖用量0.25g/g pro、油酸用量0.30g/g pro,考察山梨醇用量分別為0.10、0.15、0.20、0.25、0.30g/g pro時(shí),對(duì)玉米醇溶蛋白膜拉伸強(qiáng)度的影響。
1.3.3.2 半乳糖用量對(duì)玉米醇溶蛋白膜拉伸強(qiáng)度的影響
玉米醇溶蛋白2.00g、山梨醇用量0.20g/g pro、油酸用量0.30g/g pro,半乳糖用量分別為0.05、0.10、0.15、0.20、0.25g/g pro時(shí),對(duì)玉米醇溶蛋白膜拉伸強(qiáng)度的影響。
1.3.3.3 油酸用量對(duì)玉米醇溶蛋白膜拉伸強(qiáng)度的影響
玉米醇溶蛋白2.00g、山梨醇用量0.20g/g pro、半乳糖用量0.20g/g pro,油酸用量分別為0.10、0.20、0.30、0.40、0.50g/g pro時(shí),對(duì)玉米醇溶蛋白膜拉伸強(qiáng)度的影響。
1.3.4 增塑劑用量的Box-Behnken試驗(yàn)設(shè)計(jì)
在單因素試驗(yàn)的基礎(chǔ)上,根據(jù)Box-Behnken試驗(yàn)設(shè)計(jì)原理[14-15],設(shè)計(jì)3因素3水平響應(yīng)面試驗(yàn),選取山梨醇用量(A)、半乳糖用量(B)、油酸用量(C)為自變量,玉米醇溶蛋白膜拉伸強(qiáng)度為響應(yīng)值,試驗(yàn)因素水平見(jiàn)表1。
表 1 Box-Behnken試驗(yàn)設(shè)計(jì)因素水平及編碼Table 1 Coded values of Box-Behnken design
采用Design Expert 7.0.0軟件處理,并進(jìn)行顯著性分析。
利用濺射鍍膜法對(duì)含不同增塑劑組分的玉米醇溶蛋白膜表面進(jìn)行鍍金,然后置于掃描電子顯微鏡下觀察,工作條件為:加速電壓(AccV)為15kV,電子束(Probe)為4.0,放大倍數(shù)(Mag)為500倍和5000倍,工作距離(WD)為17mm和18mm,探頭(Det)為二次電子檢測(cè)器(SE)[16]。
2.1.1 山梨醇用量對(duì)玉米醇溶蛋白膜拉伸強(qiáng)度的影響
圖 1 山梨醇用量對(duì)玉米醇溶蛋白膜的拉伸強(qiáng)度的影響Fig.1 Effect of sorbitol concentration on the tensile strength of zein films
由圖1所示,隨著山梨醇用量增加,玉米醇溶蛋白膜拉伸強(qiáng)度有所增大,當(dāng)山梨醇用量大于0.20g/g pro時(shí),膜的拉伸強(qiáng)度呈下降趨勢(shì)。山梨醇的用量和玉米醇溶蛋白分子間作用力有關(guān),當(dāng)山梨醇用量較小時(shí),山梨醇和玉米醇溶蛋白分子以氫鍵結(jié)合,軟化膜的剛性結(jié)構(gòu)[17-18],增加柔韌性,提高膜的拉伸強(qiáng)度;當(dāng)山梨醇用量在0.20g/g pro時(shí),山梨醇與玉米醇溶蛋白充分結(jié)合,聯(lián)系密切,使膜的拉伸強(qiáng)度最大;當(dāng)山梨醇用量繼續(xù)增加,膜體系中—OH過(guò)多,結(jié)合水分子增加,阻礙玉米醇溶蛋白分子間結(jié)合,使膜的拉伸強(qiáng)度下降。
2.1.2 半乳糖用量對(duì)玉米醇溶蛋白膜拉伸強(qiáng)度的影響
圖 2 半乳糖用量對(duì)玉米醇溶蛋白膜的拉伸強(qiáng)度的影響Fig.2 Effect of galactose concentration on the tensile strength of zein films
由圖2所示,隨著半乳糖用量增大,玉米醇溶蛋白膜拉伸強(qiáng)度增加,半乳糖用量大于0.20g/g pro時(shí),膜的拉伸強(qiáng)度呈下降趨勢(shì)。半乳糖用量和玉米醇溶蛋膜表面張力有關(guān),當(dāng)半乳糖用量較小時(shí),能提高玉米醇溶蛋白膜與水分子的接觸角,使膜表面張力增大[11],并結(jié)合少量水分子,軟化膜的剛性,增加膜的柔韌性,提高膜的拉伸強(qiáng)度;當(dāng)半乳糖用量過(guò)大時(shí),玉米醇溶蛋白膜與水的接觸角過(guò)高,使膜表面張力過(guò)大,結(jié)合大量水分子,阻礙玉米醇溶蛋白分子間結(jié)合,玉米醇溶蛋白膜的拉伸強(qiáng)度減小。
2.1.3 油酸用量對(duì)玉米醇溶蛋白膜拉伸強(qiáng)度的影響
圖 3 油酸用量對(duì)玉米醇溶蛋白膜的拉伸強(qiáng)度的影響Fig.3 Effect of oleic acid concentration on the tensile strength of zein films
由圖3可知, 隨著油酸用量的增大,玉米醇溶蛋白膜的拉伸強(qiáng)度增加,當(dāng)油酸用量大于0.30g/g pro時(shí),膜拉伸強(qiáng)度開(kāi)始下降。當(dāng)油酸用量較小時(shí),油酸分子介入玉米醇溶蛋白分子間,增加玉米醇溶蛋白分子相對(duì)移動(dòng),減弱醇溶蛋白結(jié)晶趨勢(shì),增加膜的柔韌性[12,19],提高膜的拉伸強(qiáng)度;當(dāng)油酸用量過(guò)大時(shí),過(guò)量的油酸分散于玉米醇溶蛋白分子間,阻礙玉米醇溶蛋白分子間結(jié)合,使膜的拉伸強(qiáng)度減小。
2.2.1 響應(yīng)面法優(yōu)化試驗(yàn)結(jié)果
在單因素試驗(yàn)基礎(chǔ)上,選取山梨醇用量(A)、半乳糖用量(B)、油酸用量(C)為自變量,玉米醇溶蛋白膜拉伸強(qiáng)度為響應(yīng)值,根據(jù)三因素三水平的響應(yīng)面試驗(yàn)設(shè)計(jì),共建立17個(gè)試驗(yàn)點(diǎn),其中12個(gè)為析因點(diǎn)、5個(gè)為零點(diǎn),零點(diǎn)試驗(yàn)進(jìn)行5次。試驗(yàn)設(shè)計(jì)方案及結(jié)果見(jiàn)表2。
表 2 Box-Behnken試驗(yàn)設(shè)計(jì)與結(jié)果Table 2 Box-Behnken design and experimental results
2.2.2 回歸模型的建立與顯著性分析
利用Design Expert 7.0.0軟件對(duì)表2試驗(yàn)數(shù)據(jù)進(jìn)行二次多元回歸擬合分析,得到玉米醇溶蛋白膜的拉伸強(qiáng)度(Y)對(duì)山梨醇用量、半乳糖用量和油酸用量3個(gè)因素的二次多項(xiàng)式回歸模型為:Y=16.67-0.62A-1.11B+0.23C-0.13AB-0.84AC-0.61BC-1.58A2-1.01B2-1.64C2。二次多項(xiàng)式回歸模型分析結(jié)果見(jiàn)表3。
表 3 擬合二次多項(xiàng)式模型的方差分析Table 3 Analysis of variance (ANOVA) for the fitted quadratic polynomial model
從表3可知,模型的P值小于0.01,說(shuō)明Y與A、B和C的回歸方程的關(guān)系是極顯著的,所以模型極顯著,并與實(shí)際試驗(yàn)擬合較好。本試驗(yàn)中模型決定系數(shù)R2=0.9848,校正系數(shù)RAdj2=0.9652,說(shuō)明玉米醇溶蛋白膜拉伸強(qiáng)度的試驗(yàn)值與模型的回歸值有較好的一致性,即模型能夠解釋各因素與響應(yīng)值的變化關(guān)系。失擬項(xiàng)F=5.06,P=0.0757>0.05,不顯著,說(shuō)明該模型擬合程度較好,即回歸方程能充分反映實(shí)際情況。因此,可以用此模型來(lái)分析和預(yù)測(cè)復(fù)合增塑劑對(duì)玉米醇溶蛋白膜拉伸強(qiáng)度的影響。回歸方程各項(xiàng)的方差分析結(jié)果表明各因素對(duì)玉米醇溶蛋白膜的拉伸強(qiáng)度影響強(qiáng)弱順序?yàn)椋喊肴樘怯昧浚旧嚼娲加昧浚居退嵊昧?。其中,A、B、A2、B2、C2、AC、BC對(duì)玉米醇溶蛋白膜拉伸強(qiáng)度的影響極顯著。
2.2.3 響應(yīng)面分析結(jié)果
利用Design Expert 7.0.0軟件對(duì)表2試驗(yàn)數(shù)據(jù)進(jìn)行二次多元回歸擬合,得到的回歸方程的響應(yīng)面及其等高線圖如圖4所示。
圖 4 各因素交互作用對(duì)玉米醇溶蛋白膜拉伸強(qiáng)度影響的響應(yīng)面及等高線圖Fig.4 Response surface and contour plots showing the effect of pairwise interaction among different factors on zein films
圖4a所示,在響應(yīng)面圖中,當(dāng)油酸用量固定在零水平時(shí),隨著半乳糖用量的增多,蛋白膜拉伸強(qiáng)度呈現(xiàn)先上升后下降的趨勢(shì);隨著山梨醇用量的增加,膜拉伸強(qiáng)度變化也呈現(xiàn)先上升后下降的趨勢(shì)。在半乳糖用量0.15~0.18g/g pro、山梨醇用量0.18~0.20g/g pro時(shí),膜的拉伸強(qiáng)度出現(xiàn)最大值。等高線呈圓形,說(shuō)明山梨醇用量與半乳糖用量交互作用不顯著。圖4b所示,當(dāng)半乳糖用量固定在零水平時(shí),在油酸用量0.3~0.35g/g pro、山梨醇用量0.18~0.20g/g pro時(shí),膜拉伸強(qiáng)度出現(xiàn)最大值。等高線呈橢圓形,表明山梨醇用量與油酸用量交互作用顯著,而且山梨醇用量對(duì)膜拉伸強(qiáng)度的影響較油酸用量的影響明顯。圖4c所示,當(dāng)山梨醇用量固定在零水平時(shí),隨著半乳糖用量的增多,膜的拉伸強(qiáng)度呈現(xiàn)先上升后下降的趨勢(shì);隨著油酸用量的增加,膜的拉伸強(qiáng)度也呈現(xiàn)先上升后下降的趨勢(shì)。在半乳糖用量0.15~0.18g/g pro、油酸用量0.3~0.35g/g pro時(shí),膜的拉伸強(qiáng)度出現(xiàn)最大值。等高線呈橢圓形,說(shuō)明油酸用量與半乳糖用量交互作用顯著。
2.2.4 復(fù)合增塑劑優(yōu)化組合及驗(yàn)證
為進(jìn)一步確定最佳參數(shù),對(duì)擬合的回歸方程分別求一階偏導(dǎo)數(shù),得A=-0.103、B=-0.297、C=0.214,即最佳參數(shù)為:山梨醇用量0.19g/g pro、半乳糖用量0.17g/g pro、油酸用量0.32g/g pro,玉米醇溶蛋膜拉伸強(qiáng)度理論值為17.10MPa。實(shí)際測(cè)得玉米醇溶蛋膜拉伸強(qiáng)度為16.95MPa,比理論預(yù)測(cè)值低0.88%,該模型對(duì)實(shí)驗(yàn)結(jié)果具有較好的預(yù)測(cè)性。
表 4 不同玉米醇溶蛋白膜增塑劑配方和膜機(jī)械性能Table 4 Plasticizer fomulations and their influence on the mechanical properties of zein films
圖 5 玉米蛋白膜掃描電鏡圖Fig.5 SEM images of zein films
增塑劑與蛋白質(zhì)分子間作用力形式及強(qiáng)弱影響其成膜性及膜的致密性和均勻程度,而適當(dāng)致密、均勻的蛋白膜網(wǎng)狀結(jié)構(gòu)可改善蛋白膜的性能[20-21],高品質(zhì)膜表面光滑,較少有孔隙、凸起和縫隙[22]。由表4和掃描電鏡圖5可以看出不同增塑劑對(duì)蛋白膜表面結(jié)構(gòu)具有較大影響。樣品a為無(wú)添加增塑劑,采用玉米醇溶蛋白單一成分制備的玉米蛋白膜,在放大500倍時(shí),結(jié)構(gòu)非常緊密并表面光滑,沒(méi)有凸起和孔隙;放大5000倍時(shí),可以清晰觀察膜表面沒(méi)有任何凸起和孔隙,光滑、緊密,但膜剛性強(qiáng)、質(zhì)地較脆、易斷裂,拉伸強(qiáng)度僅為5.72MPa,無(wú)實(shí)際應(yīng)用意義。樣品b在放大500倍時(shí),膜表面較光滑,微觀結(jié)構(gòu)較為緊密,有少量凸起,沒(méi)有孔隙和縫隙;放大5000倍時(shí),雖然有少量孔隙,但均小于2μm,膜表面較光滑,拉伸強(qiáng)度為16.95MPa,約為單純玉米醇溶蛋白膜拉伸強(qiáng)度的3倍;斷裂伸長(zhǎng)率為2.68%,是單純玉米醇溶蛋白膜的1.6倍。樣品c在放大500倍時(shí),微觀結(jié)構(gòu)松散、表面粗糙,出現(xiàn)縫隙,縫隙大于20μm;放大5000倍時(shí),能清楚看到蛋白分子間出現(xiàn)較大縫隙;其主要原因是山梨醇用量過(guò)多,在成膜過(guò)程中玉米醇溶蛋白分子間吸收了大量的水分,在干燥過(guò)程中水分蒸發(fā),致使膜表面出現(xiàn)縫隙、拉伸強(qiáng)度較樣品b的1/3。較多使用油酸的樣品d在放大500倍時(shí),表面較為光滑,微觀結(jié)構(gòu)出多孔狀,孔隙小于20μm,放大5000倍時(shí),可以清楚看到膜表面孔隙大于2μm,孔隙邊緣較為光滑,表面有油酸析出,拉伸強(qiáng)度約為樣品b的1/2。半乳糖使用量較大的樣品e在放大500倍時(shí),微觀結(jié)構(gòu)呈多層片狀、表面粗糙,放大5000倍時(shí),表面結(jié)構(gòu)依然粗糙,出現(xiàn)孔隙,孔隙在2μm左右,拉伸強(qiáng)度較樣品樣品b大幅度降低。對(duì)照樣品f在放大500倍時(shí),膜表面光滑,并且微觀結(jié)構(gòu)緊密,有少量的凸起;放大5000倍時(shí),可以清楚看到凸起小于2μm;樣品b的拉伸強(qiáng)度及斷裂伸長(zhǎng)率皆為對(duì)照樣的1.2倍,即對(duì)照樣f的抗拉伸和抗斷裂能力均不及樣品b。Ghasemlou等[23]經(jīng)實(shí)驗(yàn)發(fā)現(xiàn),甘油能使膜表面更光滑,粗糙度降低,但山梨醇在改善膜的拉伸強(qiáng)度方面優(yōu)于甘油。Ghanbarzadeh等[24]曾在實(shí)驗(yàn)中,10%玉米醇溶蛋白液中分別加入甘油和橄欖油為0.3g/g和0.7g/g,250r/min攪拌30min,經(jīng)測(cè)量得拉伸強(qiáng)度和斷裂伸長(zhǎng)率如圖6、7所示。甘油玉米醇溶蛋白膜斷裂伸長(zhǎng)率與樣品b相接近,但樣品b拉伸強(qiáng)度比甘油玉米醇溶蛋白膜有顯著提高。橄欖油玉米醇溶蛋白膜斷裂伸長(zhǎng)率和拉伸強(qiáng)度均比樣品b明顯降低。
圖 6 幾種玉米醇溶蛋白膜的拉伸強(qiáng)度Fig.6 Tensile strength of films based on zein from different sources
圖 7 幾種玉米醇溶蛋白膜的斷裂伸長(zhǎng)率Fig.7 Elongation at break of films based on zein from different sources
3.1 采用響應(yīng)面法優(yōu)化復(fù)合增塑劑各組成成分配比,并考察其對(duì)玉米蛋白膜拉伸強(qiáng)度的影響,復(fù)合增塑劑最佳配比為山梨醇用量0.19g/g pro、半乳糖用量0.17g/g pro、油酸用量0.32g/g pro,以此制備的玉米蛋白膜拉伸強(qiáng)度為16.95MPa,斷裂伸長(zhǎng)率為2.68%。
3.2 采用山梨醇、半乳糖、油酸制備的復(fù)合增塑劑成膜性及制備的蛋白膜表面性能優(yōu)于采用甘油和油酸組成的增塑劑制備的蛋白膜,膜拉伸強(qiáng)度增大,抗斷裂能力增強(qiáng),膜表面結(jié)構(gòu)光滑,柔韌度較好,具有實(shí)際應(yīng)用價(jià)值。
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