黑莓的組培快繁技術(shù)研究

焦 宏

（遼寧省森林經(jīng)營研究所，遼寧 丹東 118002）

黑莓（Blackberries），屬薔薇科懸鉤子屬植物。漿果柔嫩多汁，色澤宜人，風(fēng)味獨(dú)特。其漿果含有20種氨基酸和多種維生素，總糖含量為3.98%，總酸為2.24%，VE 70～160μg／g，VC 22.1mg／100g，尤其特含有超氧化物歧化酶（SOD）含量1579～2151μg／g和硒（具防癌治癌作用）含量2.07μg／g均較高，在各種果類中罕見。由于黑莓的各種生理活性物含量高，所以具有促進(jìn)代謝、降壓降血脂、抗心率失常等作用。是目前風(fēng)靡世界的“第三代水果”，在國際市場上被譽(yù)為黃金水果。其漿果中所含的水楊酸，可作為發(fā)汗劑，是治療感冒、流感、咽喉炎的良好降熱食品。根浸酒可作為舒筋活血、消炎退腫的藥劑，莖葉煎水可洗痔瘡等。果實還富含揮發(fā)性的具防腐作用的抗生素物質(zhì)。黑樹莓漿果除供鮮食外，主要用來加工制成各種食品，如果汁、果凍、微發(fā)酵飲料、清涼飲料、糖漬果實、果醬、果酒及果汁糖漿等。我們用組織培養(yǎng)技術(shù)加快繁殖，為該品種的推廣提供一條有效、快捷的途徑。

1 試驗材料與方法

1.1 材料來源

試驗材料取自遼寧省森林經(jīng)營研究所苗圃基地，采集黑莓當(dāng)年生枝條，以幼嫩莖段為外植體。

1.2 試驗方法

試驗程序：外植體處理→接種→增殖培養(yǎng)→生根培養(yǎng)→移栽

外植體處理：切取3cm帶頂芽或腋芽的幼嫩莖段去葉片留葉柄，在流水狀態(tài)下沖洗60min→在無菌的條件下用75%酒精浸泡15s→再用0.1%HgCl2溶液消毒7～8min→無菌水沖洗4～5次→用濾紙吸去水分→將莖段切成1～2腋芽的小段。

培養(yǎng)基的制作。以MS為基本培養(yǎng)基，按激素6-BA、NAA、IBA、IAA、GA3含量的不同，誘導(dǎo)增殖培養(yǎng)基設(shè)7種處理（培養(yǎng)基1～7），生根培養(yǎng)基設(shè)3種處理（培養(yǎng)基8～10），培養(yǎng)基配方見表1。

表1 培養(yǎng)基配方 mg·L-1

表1中培養(yǎng)基蔗糖含量：分化和繼代培養(yǎng)基為30g／L，生根培養(yǎng)基為25g／L。瓊脂5.5g／L，pH5.6～5.8，所有培養(yǎng)基都經(jīng)過高壓蒸汽滅菌20min（120～125℃，115MPa）。

培養(yǎng)條件。培養(yǎng)溫度20～22℃，每天光照15h，光強(qiáng)度2000lx。

2 結(jié)果與分析

2.1 外植體誘導(dǎo)培養(yǎng)基

外植體培養(yǎng)15d左右，在1、2、3號培養(yǎng)基中均有腋芽萌動并逐漸伸長生長，20d左右4、5、6號培養(yǎng)基中腋芽基部開始逐漸膨大，形成愈傷組織，顏色深綠致密。50d左右在1、2號培養(yǎng)基中開始形成叢生芽，苗小但數(shù)量多，3號培養(yǎng)基苗數(shù)量比1、2號的數(shù)量要少，而4、5、、6培養(yǎng)基中苗最少。

綜上所述，用1、2號培養(yǎng)基進(jìn)行誘導(dǎo)培養(yǎng)較為理想，一般在2個周期40～50d即能誘導(dǎo)出叢生芽。

2.2 繼代培養(yǎng)

將較高的試管苗切成1cm左右莖段、大塊的叢生苗分成小塊，繼續(xù)轉(zhuǎn)入1、2號培養(yǎng)基中進(jìn)行繼代培養(yǎng)，增殖系數(shù)在6倍以上。

2.3 壯苗培養(yǎng)

將叢生小苗轉(zhuǎn)入7號培養(yǎng)基中，20～30d，小苗逐漸長高到2cm以上。

2.4 生根培養(yǎng)

在無菌狀態(tài)下，選擇2cm以上健壯小苗，轉(zhuǎn)入不同的生根培養(yǎng)基中進(jìn)行生根培養(yǎng)，結(jié)果見表2。

表2 試管苗在不同培養(yǎng)基生根情況

從表2中可以看出，在9號培養(yǎng)基中生根，所需天數(shù)最少，根條數(shù)最多，并且根系生長情況最好，所以9號培養(yǎng)基為最適生根培養(yǎng)基。

2.5 組培苗移栽

組培苗移栽是組培快繁的重要環(huán)節(jié)，從瓶里移到瓶外苗木生長情況發(fā)生了根本改變，因此要求精細(xì)作業(yè)。當(dāng)苗根長到1.5cm左右時，打開瓶蓋，取出小苗，洗凈培養(yǎng)基，用多菌靈500～800倍液浸泡30min左右，然后栽入用0.1%高錳酸鉀消毒過的苗床上。苗床基質(zhì)分4個處理，分別為沙∶土＝1∶1、沙∶蛭石＝1∶1、純沙、純蛭石。苗木移栽后，每天澆水1次，每周噴一次百菌清和營養(yǎng)液，蓋塑料拱棚，保溫保濕，7天后逐漸增加通風(fēng)量，并逐漸減少澆水，1個月后移植到營養(yǎng)缽或者直接移栽大田。試驗結(jié)果表明，以純沙為基質(zhì)最好，成活率95%以上。

3 結(jié)論

3.1 莖段、莖尖培養(yǎng)在1號培養(yǎng)基（MS＋BA0.1＋GA30.1＋I(xiàn)BA0.5＋I(xiàn)AA0.5）、2號培養(yǎng)基（MS＋BA0.1＋GA30.1＋I(xiàn)BA1）上誘導(dǎo)培養(yǎng)（40～50）d形成叢生芽，繼續(xù)轉(zhuǎn)入1、2號培養(yǎng)基中繼代培養(yǎng)，增殖系數(shù)在6倍以上。達(dá)到一定數(shù)量后轉(zhuǎn)入7號培養(yǎng)基（MS＋BA0.6＋GA30.5＋I(xiàn)BA0.25＋I(xiàn)AA0.25）壯苗培養(yǎng)20～30的，苗高長到2cm以上。

3.2 生根培養(yǎng)以9號培養(yǎng)基（1／2MS＋I(xiàn)BA0.1）最好，生根率達(dá)到98%以上且每株可生5～10條根。

3.3 移栽基質(zhì)以純沙為最好，成活率95%以上，并且成本最低，資源豐富。

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