周玉梅 ，周 艦，張景宇(武漢市第三醫(yī)院，武漢 430060)

注射用尖吻蝮蛇血凝酶為國家Ⅰ類新藥，是從尖吻蝮蛇蛇毒中提取的一種凝血酶。臨床前研究證實該酶能縮短全血凝固時間和小鼠剪尾出血時間，不能激活ⅩⅢ因子，具有較好的止血作用，而且不影響血液中的凝血酶原和血小板數量，在正常血管內沒有血小板凝聚作用，無血栓形成危險［1-3］。前期臨床實驗研究表明，該藥血漿半衰期約為2．5 h，且無代謝物，其對切口出血有良好的止血效果，能明顯縮短手術切口止血時間，適于圍術期用藥。本研究旨在觀察泌尿外科手術患者中2 種劑量尖吻蝮蛇血凝酶的止血作用，并和空白對照進行比較，同時觀察尖吻蝮蛇血凝酶對凝血功能的影響，現報告如下。

1 資料與方法

1.1 一般資料

資料來源于我院泌尿科2010 年8 月—2012 年5 月收治的前列腺增生患者147 例(均行恥骨上經膀胱前列腺摘除術)，年齡為56～79 歲;膀胱腫瘤患者33 例(均行膀胱部分切除)，年齡為50～77 歲，共計180 例。經倫理委員會批準，患者及家屬簽署知情同意書。將108 例患者按照可比性的原則分為A、B、C 3 組進行研究。

1.2 方法

注射用尖吻蝮蛇血凝酶(批準文號:H20080633，北京康辰藥業(yè)有限公司生產):每支含1 單位凍干粉(1 U/支，批號為010910。使用前用2 ml 注射用水溶解后，于術前15 min肘靜脈緩慢注射。A 組給予3 支，B 組給予2 支，C 組給于安慰劑。

1.3 療效判斷標準

止血成功:(1)患者術后脈搏正常，血壓穩(wěn)定，紅細胞計數及血紅蛋白在正常值范圍內;(2)留置尿管沖洗液(0．9%氯化鈉注射液)顏色轉淡，尿管通暢無阻塞;(3)導尿管內無血塊排出。

1.4 血凝指標的檢測

采用貝克曼庫爾特公司的ACL-7000 型儀器進行檢測。所有研究對象采血后放入枸櫞酸鈉抗凝管中，靜置30 min 后離心進行檢測。各指標的參考值范圍:凝血酶原時間(PT)為11．8～15．1 s，活化部分凝血活酶時 間(APTT)為24．9～42．8 s，纖維蛋白原定量(FIB)為2～4 g/L，凝血酶時間(TT)為12～18．6 s，D-二聚體(DD)為0～500 ng/ml。

1.5 統(tǒng)計學處理

采用SPSS 13．0 統(tǒng)計軟件包進行統(tǒng)計分析，計量資料用均數±標準差(ˉx±s)表示，組間比較使用ANOVA 方差分析，計數資料的結果采用卡方(χ2)檢驗。以P＜0．05 為有顯著性差異，P＜0．01 為有極顯著性差異。

2 結果

2.1 3 組患者一般情況比較

3 組患者在年齡、體質量指數(BMI)、膀胱手術、前列腺手術、切口長度及切口深度之間的差異無統(tǒng)計學意義(P＞0．05)，3 組之間具有可比性，見表1。

表1 3 組患者一般情況比較(ˉx±s)Tab 1 Comparison of general data among three groups(ˉx±s)

2.2 治療前后3 組患者血凝指標比較

治療后3 組患者的血凝指標皆在正常參考范圍，3 組之間具有可比性(P＞0．05);A、B 組患者的PT、APTT、TT、FIB 以及DD 比較，t值分別為1．21、1．01、1．64、1．33、1．62，差異無統(tǒng)計學意義(P＞0．05);但A、B 組與C 組比較，差異具有統(tǒng)計學意義(P＜0．05)，見表2。因此，尖吻蝮蛇血凝酶不僅凝血作用顯著，而且還能保持在血凝指標接近正常的范圍，但是不同劑量的尖吻蝮蛇血凝酶之間的效果并沒有顯著差異(P＞0．05)。

2.3 3 組患者術后止血療效比較

A 組和B 組患者的止血時間、切口出血時間以及凝血異常比較，差異無統(tǒng)計學意義(P＞0．05);但A、B 組與C 組之間的差異均具有統(tǒng)計學意義(P＜0．05)，見表3。因此，尖吻蝮蛇血凝酶的止血作用相對于對照組而言比較顯著，但不同劑量的尖吻蝮蛇血凝酶之間的效果并沒有顯著差異(P＞0．05)。

表2 治療前后3 組患者血凝指標比較(ˉx±s)Tab 2 Blood clotting indexes in three groups before and after treatment(ˉx±s)

表3 3 組患者術后止血療效比較Tab 3 Comparison of postoperative hemostatic efficacy among three groups

3 討論

尖吻蝮蛇血凝酶是從尖吻蝮蛇蛇毒中分離得到的一種高活性血凝酶［4］，分子量為29．3～29．5 kD，等電點為5．5。該酶由α、β 兩個亞基構成，亞基鏈間由7 個二硫鍵連接，其中α 亞基具有SEQ ID No．1 所示的氨基酸序列，β 亞基具有SEQ ID No．2 所示的氨基酸序列［5-6］。尖吻蝮蛇血凝酶為絲氨酸蛋白酶，能夠水解人纖維蛋白原α 鏈［7］，該酶的純化方法為通過預處理去除不溶物，再通過兩次陰離子交換柱層析，收集活性洗脫峰，經透析、超濾濃縮及脫鹽后即得高純度蛇毒血凝酶，其比活力不低于180 U/mg 蛋白，HPLC 分析純度可達95%以上，以蛇毒原料重量計純化收得率為0．7%～0．8%［8-9］。尖吻蝮蛇血凝酶使纖維蛋白原α 亞基裂解出A 肽后，產生纖維蛋白單體(αBβγ)2，并聚合成纖維蛋白多聚體，同時由于尖吻蝮蛇血凝酶不誘導血凝酶ⅩⅢ因子的釋放，在無ⅩⅢ因子作用時形成的纖維蛋白多聚體可溶解，不引起血栓形成，是一安全有效的新型止血藥［10］。

泌尿外科中前列腺和膀胱手術都是出血較多的手術，因此有必要進行止血［11］。我們對尖吻蝮蛇在泌尿外科手術中止血的研究結果表明:(1)尖吻蝮蛇血凝酶不僅凝血作用顯著，而且還能保持血凝指標接近正常的范圍;但不同劑量的尖吻蝮蛇血凝酶之間的效果并沒有顯著性差異(P＞0．05)。(2)尖吻蝮蛇血凝酶的止血作用相對于對照組而言比較顯著，但增加藥物劑量并沒有增加止血效果，但這一結果的均值不一定能準確代表臨床意義。本研究所有患者未發(fā)現任何全身及局部不良事件，可見尖吻蝮蛇血凝酶安全性較好。綜上，我們認為，尖吻蝮蛇在泌尿外科手術中止血具有良好的應用價值，一般情況下，使用2 U 即可達到良好的效果。因此，尖吻蝮蛇血凝酶用于泌尿外科圍術期止血，療效確切、安全、可靠，值得推廣應用［12］。

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［2］ 白雪，杜峻峰，苑樹俊，等．手術后應用尖吻蝮蛇血凝酶止血的安全性評價［J］．中國臨床藥理學雜志，2011，27(4):19-22．

［3］ 歐光武，李威．尖吻蝮蛇類凝血酶的研究現狀［J］．中國醫(yī)藥導報，2010，7(12):15-17．

［4］ 唐松山，唐治華，李紅枝，等．尖吻蝮蛇蛇毒類凝血酶Agacutin 的亞基的拆分和氨基酸殘基測序［J］．廣東藥學院學報，2009，2(4):67-71．

［5］ Jin Y，Lu QM，Wei JF，et al．Purification and characterization of jerdofibrase，a serine protease from the venom of Trimeresurus jerdonii snake［J］．Toxicon，2001，39(8):1203-1210．

［6］ 沈文彧，邸偉慶，劉宏大，等．一種類凝血酶制劑的人體藥動學研究［J］．中國醫(yī)藥導報，2011，8(10):65-67，76．

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［8］ 王睿，方翼，裴斐，等．靜脈注射尖吻蝮蛇血凝酶Ⅰ期臨床耐受性研究［J］．中國藥學雜志，2005，40(2):131-133，154．

［9］ 楊填，許建衡，謝舜峰，等．尖吻蝮蛇凝血酶對胸部手術切口止血有效性及凝血安全性的臨床研究［J］．汕頭大學醫(yī)學院學報，2007，20(2):97-99．

［10］ 王睿，方翼，裴斐，等．單劑靜注尖吻蝮蛇血凝酶在中國健康志愿者的藥代動力學［J］．中國臨床藥理學雜志，2006，22(6):422-425．

［11］ 林奕心，余曉東，和七一，等．蛇毒類凝血酶研究進展［J］．重慶師范大學學報： 自然科學版，2009，26(2):33-38，145．

［12］ 夏樾，楊嗣星，錢輝軍，等．尖吻蝮蛇血凝酶在后腹腔鏡手術圍手術期應用的有效性與安全性評價［J］．醫(yī)藥導報，2012，31(10):1321-1324．