吳曉青， 胡昌江 ， 趙 玲， 耿媛媛， 潘 新， 胡 麟

(成都中醫(yī)藥大學(xué)藥學(xué)院，四川 成都611137)

炮制是我國(guó)的一項(xiàng)傳統(tǒng)制藥技術(shù)，是中醫(yī)藥的精華和特色，而中醫(yī)在遣藥組方時(shí)又非常講究“藥之生熟”、“生熟異用”。目前中藥炮制機(jī)理研究多停步在單味中藥炮制前后藥效差異，而對(duì)中藥炮制前后配伍或復(fù)方中藥物炮制作用的研究較少［1-5］。本研究在進(jìn)行生、熟大黃瀉下效應(yīng)差異研究的基礎(chǔ)上，將生、熟大黃分別納入復(fù)方大承氣湯中進(jìn)行配伍作用研究，旨在探討大承氣湯中大黃生、熟異用時(shí)瀉下效應(yīng)差異，以期為臨床正確區(qū)別使用生、熟大黃提供科學(xué)依據(jù)。

1 材料

1.1 藥物 大黃藥材購(gòu)自四川成都新荷花大黃種植基地，經(jīng)本校盧先明教授鑒定為蓼科植物藥用大黃Rheum officinale Baill. 的干燥根莖。生大黃炮制方法:刮去外皮，切厚片或塊，低溫烘干。熟大黃炮制方法:取生大黃片或塊適量，用黃酒拌勻，悶1.5 h 至酒被吸盡，置高壓滅菌鍋內(nèi)蒸制6 h，取出，干燥。每100 kg 大黃片或塊，用黃酒30 kg。生大黃、熟大黃過8 號(hào)篩(臨用前用溫水配制成所需濃度)。

大承氣湯A 制備:取枳實(shí)15 g，厚樸72 g，加入7 200 mL 水浸泡20 min，武火煎沸，文火維持30 min，過濾。藥渣加溫水576 mL，武火煎沸，文火維持20 min，過濾。濾液下芒硝24 g，微沸后過濾，濃縮，加入生大黃粉末，放冷后定容至60 mL，作為復(fù)方A 原藥液，冷藏備用。

大承氣湯B 制備:將復(fù)方A 中生大黃粉末換成等量熟大黃粉末，余操作同復(fù)方A。

1.2 試劑與儀器 附子、干姜、肉桂、吳茱萸、胡椒等比組合作為造模中藥。干姜、肉桂、吳茱萸、胡椒先提取揮發(fā)油。附子加8 倍量水先煎30 min 后加入提取揮發(fā)油后的藥渣同煎30 min，濾取藥液，如此3 次。合并3 次煎液，旋轉(zhuǎn)蒸發(fā)儀70 ℃減壓濃縮至2 g 生藥/mL。將所提取揮發(fā)油以吐溫-80 溶解后加入藥液混勻，冰箱冷凍保存?zhèn)溆?。鹽酸洛哌丁胺膠囊 (西安楊森制藥有限公司，生產(chǎn)批號(hào)12924813)。通便靈膠囊(濟(jì)南利蒙制藥有限公司，生產(chǎn)批號(hào)12090202)。

1.3 動(dòng)物 昆明種清潔級(jí)小鼠，體質(zhì)量18 ～22 g，雄性。購(gòu)自四川簡(jiǎn)陽(yáng)達(dá)碩實(shí)驗(yàn)動(dòng)物中心，動(dòng)物生產(chǎn)許可證號(hào):SCXK (川)2008-24。

2 方法

2.1 造模與給藥方案及動(dòng)物處理 KM 小鼠連續(xù)測(cè)2 d 體溫后綜合考慮體質(zhì)量和體溫的因素隨機(jī)分成空白組和模型組(8 組)，空白組20 只，模型組160 只，采用熱性中藥結(jié)合腸蠕動(dòng)抑制劑灌胃給藥造模［6］，將鹽酸洛哌丁胺超聲混懸于藥液(0.1 mg/mL)，水浴加熱至40 ℃，給藥時(shí)注意不斷攪拌搖勻，給藥劑量為0.2 mL/10 g (40 g 生藥/kg，4 mg 鹽酸洛哌丁胺/kg)，每天1 次。對(duì)照組給予等體積生理鹽水。給藥期間注意觀察動(dòng)物一般狀況，每3 天稱一次體質(zhì)量，測(cè)一次飲水量，連續(xù)給藥15 d。造模結(jié)束后，模型組各組隨機(jī)抽取4 只同空白組做排便實(shí)驗(yàn)并測(cè)24 h 飲水量以確認(rèn)造模成功與否。然后模型小鼠按體質(zhì)量情況分成模型組、大承氣湯A 高、中、低劑量組，大承氣湯B 高、中、低劑量組，陽(yáng)性組，每組20 只。模型組、陽(yáng)性組及大承氣湯A、大承氣湯B 各組上午給造模藥物，對(duì)照組給予等體積生理鹽水。下午大承氣湯A、大承氣湯B 各組、陽(yáng)性組給實(shí)驗(yàn)藥物，模型組和空白組給予等體積生理鹽水，連續(xù)給藥5 d。

2.2 小鼠排便試驗(yàn) 造模后，空白組和模型組灌胃給予含2%墨汁的生理鹽水，各給藥組則灌胃給予用藥液配成的含2%墨汁的混懸液。給藥后觀察記錄每只小鼠首次排出黑糞的時(shí)間，及3 h、6 h 內(nèi)小鼠排出黑糞的總數(shù)。

2.3 小鼠瀉下試驗(yàn) 全部動(dòng)物禁食不禁水12 h，末次給藥后，進(jìn)行瀉下試驗(yàn)。把小鼠(15 只)分置于鋪有濾紙的鐘罩內(nèi)進(jìn)行觀察，按糞便性狀分為固體便、半固體便、水便。分別觀察各小鼠首次排便時(shí)間，3 h 內(nèi)固體便、半固體便、水便的數(shù)目。計(jì)算瀉下指數(shù)(EI，Evacuation Index)。當(dāng)給藥組EI 與模型組比較有顯著差異(P ＜0.05)，表明藥物有瀉下作用［7］。

EI=1 ×固體便數(shù)目+2 ×半固體便數(shù)目+3 ×水便的數(shù)目

2.4 小鼠腸推進(jìn)試驗(yàn) 采用炭末推進(jìn)法［8］，小鼠禁食24 h，不禁水，按劑量給藥30 min 后，灌胃給予0.5%的炭末和10%的阿拉伯凝膠(0.2 mL/只)作指示劑，10 min后脫頸椎處死，開腹，取出小腸，按常規(guī)方法測(cè)量和計(jì)算炭末推進(jìn)率。

3 結(jié)果

3.1 造模結(jié)果 模型組個(gè)別動(dòng)物于造模的第3 天出現(xiàn)排便粒數(shù)減少，煩燥不安，灌胃時(shí)掙扎較對(duì)照組明顯，小便色黃，排便粒數(shù)減少，飲水量明顯增加，體質(zhì)量明顯減輕，攝食量明顯減少。造模結(jié)束后，模型組首粒排便時(shí)間及飲水量高于空白對(duì)照組，3 h、6 h 排便粒數(shù)及糞便含水率均顯著低于空白對(duì)照組，結(jié)果如表1、表2 所示。根據(jù)中醫(yī)熱結(jié)便秘的病因病機(jī)及癥候特征，綜合分析以上結(jié)果可認(rèn)為造模成功。

表1 空白組、模型組小鼠排便情況(±s)

表1 空白組、模型組小鼠排便情況(±s)

注:與空白組比較，△△P ＜0.01

組別 首粒排便時(shí)間/min 3 h 排便粒數(shù) 6 h 排便粒數(shù) 含水率/%空白組 128.22±8.76 9.17±2.47 11.67±2.75 48.72±2.83模型組 271.68±13.56△△2.50±0.66△△ 4.63±1.37△△15.92±5.44△

表2 空白組、模型組小鼠體質(zhì)量和飲水量的變化(±s)

表2 空白組、模型組小鼠體質(zhì)量和飲水量的變化(±s)

注:與空白組比較，△△P ＜0.01

組別 體質(zhì)量/g建模前 建模后飲水量/(mL·10g -1)23.64 ±0.89 32.25 ±3.48 1.81 ±0.12模型組 23.99 ±1.92 24.34 ±3.42△△ 4.93 ±0.21空白組△△

3.2 對(duì)小鼠熱結(jié)便秘模型的影響

3.2.1 排便試驗(yàn) 從表3 所示結(jié)果可以看出:與模型組相比，大承氣湯A、B 各劑量組和陽(yáng)性對(duì)照組的首粒排便時(shí)間明顯縮短(P ＜0.01)，大承氣湯A 各劑量組與等劑量的大承氣湯B 各劑量組比較，首粒排便時(shí)間明顯縮短(P ＜0.01);與模型組相比，大承氣湯A、B 各劑量組和陽(yáng)性對(duì)照組能明顯增加3 h 和6 h 排出黑便粒數(shù)(P ＜0.01)，大承氣湯A 各劑量組與等劑量的大承氣湯B 各劑量組比較無(wú)顯著性差異。

表3 大承氣湯對(duì)熱結(jié)便秘模型小鼠排便的影響(±s，n=20)

表3 大承氣湯對(duì)熱結(jié)便秘模型小鼠排便的影響(±s，n=20)

注:與空白組比較，△P ＜0.05，△△P ＜0.01;與模型組比較，＊＊P ＜0.01;與大承氣湯B 組比較，##P ＜0.01

組別 劑量/(g·kg -1) 首粒排便時(shí)間/min 3 h 排便粒數(shù) 6 h 排便粒數(shù)空白組125.42 ±8.93 9.78 ±3.12 10.75 ±3.17模型組 - 269.12 ±13.74△△ 2.35 ±0.58△△ 4.50 ±1.15△△大承氣湯A 32.68 118.13 ±2.34＊＊## 7.21 ±1.05＊＊ 9.50 ±2.33＊＊16.34 131.65 ±6.13＊＊## 4.21 ±0.65＊＊ 7.50 ±1.13＊＊8.17 144.98 ±4.91＊＊## 3.11 ±0.36＊＊ 5.15 ±0.85＊＊大承氣湯B 32.68 146.74 ±4.98＊＊ 7.01 ±1.03＊＊ 9.38 ±2.18＊＊16.34 165.23 ±7.25＊＊ 3.98 ±0.53＊＊ 7.41 ±1.03＊＊8.17 196.35 ±10.97＊＊ 3.05 ±0.34＊＊ 5.05 ±0.81＊＊通便靈膠囊 1.00 148.18 ±3.92＊＊ 3.21 ±0.55＊＊ 5.15 ±0.93-＊＊

3.2.2 腸推進(jìn)試驗(yàn) 與模型組相比，大承氣湯A、B 各劑量組和陽(yáng)性對(duì)照組均能明顯增加小腸推進(jìn)率(P ＜0.01)。大承氣湯A 各劑量組與等劑量的大承氣湯B 各劑量組比較無(wú)顯著性差異，B 略低于A，結(jié)果見表4。

3.3 對(duì)小鼠熱結(jié)便秘模型和正常小鼠瀉下指數(shù)比較 與空白組比較，正常小鼠和熱結(jié)便秘模型小鼠大承氣湯A 各劑量組和陽(yáng)性組EI 明顯增高，有顯著性差異 (P ＜0.01，P ＜0.05)，大承氣湯B 各劑量組有增高趨勢(shì)，但無(wú)顯著性差異;大承氣湯A 各劑量組與等劑量的大承氣湯B 各劑量組比較有顯著差異(P ＜0.01)，結(jié)果見表5。上述結(jié)果表明，大承氣湯B 中、低劑量組無(wú)瀉下作用，高劑量組有弱的瀉下趨勢(shì)，大承氣湯A 的瀉下作用強(qiáng)于大承氣湯B，大承氣湯中配伍生大黃才能產(chǎn)生明顯的瀉下作用。

4 討論

大承氣湯由大黃、厚樸、枳實(shí)和芒硝四味組成，大黃為方中君藥［9-15］，經(jīng)過炮制之后，其苦寒之性和瀉下作用隨之發(fā)生相應(yīng)改變，臨床常根據(jù)辨證施治的要求選用不同的炮制品，達(dá)到不同的治療效果?，F(xiàn)有的藥理模型多以西醫(yī)實(shí)驗(yàn)?zāi)Ｐ蜑橹鳎狈χ嗅t(yī)理論支撐，與中藥臨床用藥實(shí)際有一定差距。選擇適用于中藥本身研究的，并且符合中醫(yī)藥理論的、合理的、科學(xué)的藥理模型是評(píng)價(jià)炮制品療效的關(guān)鍵。因此，本實(shí)驗(yàn)將生、熟大黃分別納入復(fù)方大承氣湯中，采用熱結(jié)便秘模型進(jìn)行研究，研究結(jié)果表明，無(wú)論是對(duì)正常小鼠還是熱結(jié)便秘模型小鼠，排便試驗(yàn)和瀉下指數(shù)測(cè)定顯示，生大黃復(fù)方組的瀉下作用明顯強(qiáng)于熟大黃復(fù)方組。生大黃復(fù)方組有較強(qiáng)的增加腸蠕動(dòng)和促進(jìn)排便的效果，這一結(jié)果與臨床應(yīng)用大黃“生瀉熟緩”的理論相一致，生大黃以酒蒸法制成熟大黃配伍用于大承氣湯，其瀉下作用明顯減弱。

表4 大承氣湯對(duì)熱結(jié)便秘模型小鼠小腸推進(jìn)率的影響(±s，n=20)

表4 大承氣湯對(duì)熱結(jié)便秘模型小鼠小腸推進(jìn)率的影響(±s，n=20)

組別 劑 量/(g·kg -1)炭末推進(jìn)長(zhǎng)度/cm小腸總長(zhǎng)度/cm炭末推進(jìn)率/%- 30.21 ±2.97 38.32 ±2.32 78.79 ±4.39模型組 - 15.97 ±2.43 38.54 ±2.37 41.65 ±2.012)大承氣湯A 32.68 30.09 ±2.12 39.68 ±2.74 72.82 ±4.13 16.34 27.68 ±1.85 41.54 ±3.53 66.64 ±3.76 8.17 24.12 ±1.67 41.33 ±3.26 58.37. ±2.28大承氣湯B 32.68 26.89 ±1.52 38.58 ±2.26 69.72 ±4.15 16.34 26.25 ±1.43 41.24 ±3.62 63.65 ±2.74通便靈膠囊空白組8.17 1.00 23.50 ±1.02 23.95 ±1.57 42.37 ±3.85 41.83 ±3.38 55.47. ±2.36 57.26. ±2.17

表5 大承氣湯對(duì)正常小鼠和熱結(jié)便秘模型小鼠瀉下試驗(yàn)影響(±s，n=20)

表5 大承氣湯對(duì)正常小鼠和熱結(jié)便秘模型小鼠瀉下試驗(yàn)影響(±s，n=20)

注:與空白組比較，△P ＜0.05，△△P ＜0.01;與大承氣湯B 組比較，##P ＜0.01

組別 劑量/(g·kg -1)EI正常 模型空白組- 11.12 ±1.67 7.05 ±1.72大承氣湯A 32.68 23.52 ±3.05△△## 17.07 ±3.31△△##16.34 18.93 ±2.46△△## 13.73 ±2.12△△##8.17 16.31 ±2.36△△## 11.52 ±2.24△△##大承氣湯B 32.68 14.61 ±2.13 9.08 ±1.02 16.34 10.12 ±2.05 6.98 ±1.35 8.17 8.78 ±1.92 6.06 ±0.89通便靈膠囊 1.00 15.22 ±2.341) 9.52 ±2.381)

［1］ 閆美娟，隋 峰，李 燕. 大黃各炮制品瀉下作用的比較研究［J］. 中國(guó)實(shí)驗(yàn)方劑學(xué)雜志，2010，16 (13):170-171.

［2］ 李會(huì)芳，王伽伯，肖小河. 基于致瀉效價(jià)檢測(cè)的大黃不同炮制品的生物品質(zhì)研究［J］. 時(shí)珍國(guó)醫(yī)國(guó)藥，2012，23(5):1215-1216.

［3］ 羅霄山，孫冬梅，李蓓蓓. 掌葉大黃不同炮制品瀉下-止血作用的比較研究［J］. 中藥材，2008，31(2):199-201.

［4］ 李 傲，王家葵，孟憲麗. 掌葉大黃不同商品規(guī)格等級(jí)間瀉下作用及組分含量的相關(guān)性分析［J］. 中國(guó)藥房，2010，21(43):4036-4038.

［5］ 李 遠(yuǎn)，王伽伯，陳偉娜. 小鼠對(duì)大黃瀉下作用產(chǎn)生耐受性與腸道蒽醌變化關(guān)系的量-時(shí)-效關(guān)系研究［J］. 遼寧中醫(yī)藥雜志，2010，37(12):2444-2447.

［6］ 陳立軍，張廷模，彭 成. 大黃不同炮制品對(duì)熱結(jié)便秘模型大鼠結(jié)腸c-kitmRNA 表達(dá)的影響［J］. 中國(guó)藥理與臨床，2009，25(4):37-40.

［7］ Qin Y，Wang J B，Kong W J ，et al. The diarrhoeogenic and antidiarrhoeal bidirectional effects of rhubarb and its potential mechanism ［J］. J Ethnopharmacol， 2011， 133 (3 ):1096-1102.

［8］ 鐘華玉，張 勉，戴 岳. 大黃和生首烏鞣質(zhì)含量對(duì)小鼠小腸推進(jìn)的影響［J］. 時(shí)珍國(guó)醫(yī)國(guó)藥，2006，17(12):2478-2480.

［9］ 王新勝. 瀉下法與大黃的臨床應(yīng)用體會(huì)［J］. 中國(guó)中醫(yī)藥雜志，2011，12(3):70-72.

［10］ 謝 臻，王術(shù)玲，高 峰. 大承氣湯配伍變化的藥效物質(zhì)基礎(chǔ)研究［J］. 中藥新藥與臨床藥理，2011，22(1):57-60.

［11］ 韓 剛，肖 倩，索 偉. 大承氣湯中大黃酸在大鼠體內(nèi)的藥動(dòng)學(xué)研究［J］. 中國(guó)實(shí)驗(yàn)方劑學(xué)雜志，2011，17(18):137-140

［12］ 侯仙明，王亞利，劉彥卿. 大黃對(duì)實(shí)熱證模型大鼠肝基因表達(dá)譜的影響［J］. 遼寧中醫(yī)藥雜志，2010，16(13):170-171.

［13］ 謝明征，胡志祥，齊清會(huì). 大承氣湯對(duì)MODS 小鼠小腸肌層的保護(hù)作用［J］. 中國(guó)中西醫(yī)結(jié)合外科雜志，2012，18(4):365-369.

［14］ 閆美娟，隋 峰，李 燕. 大承氣湯的質(zhì)量控制研究［J］.中國(guó)新藥雜志，2012，21(22):2674-2678.

［15］ 張啟榮，朱克剛，彭吉霞. 大承氣湯對(duì)兔離體十二指腸平滑肌活動(dòng)的影響［J］. 中國(guó)中醫(yī)藥科技，2011，18(1):24-25.