于小靜

高效液相色譜-二極管陣列檢測(cè)法同時(shí)測(cè)定香丹注射液中7種丹參酚酸類(lèi)成分

于小靜

目的對(duì)高效液相色譜-二極管陣列檢測(cè)法同時(shí)測(cè)定香丹注射液中 7種丹參酚酸類(lèi)成分的效果進(jìn)行分析探討。方法色譜柱為T(mén)hermoODS2柱，流動(dòng)相為乙腈（A）0.05%磷酸（B），流速為1.0ml/min，波長(zhǎng)為280nm。結(jié)果經(jīng)統(tǒng)計(jì)發(fā)現(xiàn)，香丹注射液中丹參素、咖啡酸、原兒茶醛、迷迭香酸、丹參酚酸B、丹參酚酸A、紫草酸在試驗(yàn)范圍內(nèi)存在良好的線性關(guān)系，r均＞0.9991，精密度均＜1%，在48h內(nèi)存在良好的穩(wěn)定性，回收率均在98%～103%。結(jié)論經(jīng)高效液相色譜-二極管陣列檢測(cè)法對(duì)香丹注射液中丹參酚酸類(lèi)成分進(jìn)行檢測(cè)的結(jié)果準(zhǔn)確可靠，值得關(guān)注。

高效液相色譜-二極管陣列檢測(cè)法；香丹注射液；丹參酚酸；含量測(cè)定

本次研究出于對(duì)香丹注射液中7種丹參酚酸類(lèi)成分含量測(cè)定方法進(jìn)行分析探討為目的，采取高效液相色譜-二極管陣列檢測(cè)法對(duì)丹參素、咖啡酸、原兒茶醛、迷迭香酸、丹參酚酸B、丹參酚酸A、紫草酸在香丹注射液中的含量展開(kāi)了同時(shí)測(cè)定，現(xiàn)報(bào)告如下。

1 儀器與試劑

1.1 實(shí)驗(yàn)儀器所用儀器包括 BD-25十萬(wàn)分之一電子天平、Waters效液相色譜儀，包括在線真空脫氣機(jī)、Waters600 四元泵、Waters 2996二極管陣列檢測(cè)器（DAD）以及Empower2色譜工作站。

1.2 實(shí)驗(yàn)試劑實(shí)驗(yàn)中所需對(duì)照品試劑包括丹參素、原兒茶醛、咖啡酸、迷迭香酸、丹參酚酸A、丹參酚酸 B、紫草酸。香丹注射液，乙腈為色譜純，水為雙蒸水，其余所用試劑均為分析純。

2 方法與結(jié)果

2.1 色譜條件所用色譜柱為T(mén)hermo ODS2，規(guī)格為4.6mm×250mm，5μm，所用流動(dòng)相為乙腈（A）-0.05%磷酸水（B）。梯度洗脫條件包括起始流動(dòng)相配比為 13%A～87%B；15min時(shí)流動(dòng)相配比為23%A～77%B；30min時(shí)流動(dòng)相配比為 25%A～75%B；35min時(shí)流動(dòng)相配比為 60%A～40%B。流速為1.0ml/min，溫度為室溫（25℃），進(jìn)樣量為20μl，波長(zhǎng)為280nm[1]。

2.2 溶液制備

2.2.1 對(duì)照品溶液制備 精密稱定對(duì)照品丹參素10.00mg、咖啡酸1.35mg、原兒茶醛13.80mg、丹參酚酸 A 6.30mg、丹參酚酸 B 13.00mg、迷迭香酸5.00mg及紫草酸5.50mg，將其分別放置于5ml的棕色容量瓶中，經(jīng)濃度為 70%的甲醇溶解，并定容至刻度，作為單一成分對(duì)照品備用；精密吸取個(gè)對(duì)照品溶液適量，放置于10ml的棕色容量瓶中，經(jīng)70%的甲醇溶解后定容，搖勻后制成混合對(duì)照品備用。

2.2.2 供試品溶液制備 精密吸取香丹注射液1ml，將其放置于10ml的容量瓶中，經(jīng)70%的甲醇稀釋至刻度，而后經(jīng) 0.22μm的微孔濾膜濾過(guò)，制成供試品溶液備用[2]。

2.3 線性關(guān)系考察制備系列濃度的混合對(duì)照品溶液，將其按照2.1所示色譜條件一次進(jìn)樣檢測(cè)，將對(duì)照品溶液的濃度作為橫坐標(biāo)，峰面積作為縱坐標(biāo)，繪制線性曲線。結(jié)果得到7種有效成分的線性回歸方程分別為：Y丹參素=1E＋07X＋1229.12，線性范圍200.10～2.03，r=0.9994；Y原兒茶醛=1E＋08X＋5825.31，線性范圍127.92～1.28，r=0.9992；Y咖啡酸=7E＋07X－269.01，線性范圍27.12～0.28，r=0.9994；Y迷迭香酸=4E＋07X＋3950.21，線性范圍100.91～1.03，r=0.9997；Y紫草酸=2E＋07X＋2248.79，線性范圍 111.09～1.12，r=0.9999；Y丹參酚酸B=2E＋07X＋10312.52，線性范圍261.19～2.28，r=0.9999；Y丹參酚酸A=5E＋07X＋4158.12，線性范圍125.89～1.28，r=0.9998。

2.4 精密度考察以2.1所示色譜條件，將對(duì)照品溶液連續(xù)進(jìn)樣5次，記錄各有效成分的峰面積，并計(jì)算RSD值。結(jié)果發(fā)現(xiàn)7種有效成分的RSD值均＜1%，證實(shí)該儀器的精密度良好。

2.5 重現(xiàn)性考察精密量取5份1ml的香丹注射液溶液，按照2.2條件制成供試品溶液，分別進(jìn)樣測(cè)定，計(jì)算各成分峰面積的RSD值。結(jié)果發(fā)現(xiàn)各成分峰面積RSD值均＜1%，證實(shí)該方法具有良好的重現(xiàn)性。

2.6 穩(wěn)定性考察精密量取 1ml香丹注射液，經(jīng)2.2條件制成供試品溶液，分別在0、6、12、24、36、48h時(shí)進(jìn)樣檢測(cè)，計(jì)算各成分峰面積的RSD值，結(jié)果發(fā)現(xiàn)各成分峰面積的RSD值在0.91%～1.38%，證實(shí)樣品在48h內(nèi)具有良好的穩(wěn)定性。

2.7 加樣回收實(shí)驗(yàn)精密量取已知含量的香丹注射液1ml，共3份，精密加入適量的對(duì)照品，以2.2所示條件制成供試品溶液，進(jìn)樣測(cè)定，計(jì)算回收率。經(jīng)統(tǒng)計(jì)發(fā)現(xiàn)丹參素、咖啡酸、原兒茶醛、迷迭香酸、丹參酚酸 B、紫草酸、丹參酚酸 A 的平均回收率分別為100.7%、99.8%、100.7%、101.3%、101.9%、98.0%、103.1%。

2.8 樣品含量測(cè)定取 3個(gè)批次的香丹注射液，精密量取1ml，按照2.2所示條件制成供試品，以2.1色譜條件進(jìn)行檢測(cè)，依照標(biāo)準(zhǔn)曲線計(jì)算樣品中各成分的含量。結(jié)果發(fā)現(xiàn)3個(gè)批次樣品中丹參素、原兒茶醛、咖啡酸、迷迭香酸、紫草酸、丹參酚酸B、丹參酚酸 A的平均含量分別為 2.231mg/ml、0.517mg/ml、0.011mg/ml、0.109mg/ml、0.089mg/ml、0.162mg/ml、0.253mg/ml。

3 討論

本次實(shí)驗(yàn)證實(shí)，經(jīng)高效液相色譜-二極管陣列檢測(cè)法同時(shí)測(cè)定香丹注射液中7種丹參酚酸類(lèi)成分含量，結(jié)果準(zhǔn)確可靠，精密度、重現(xiàn)性良好，值得關(guān)注并推廣，為今后的藥學(xué)研究工作提供可靠的參考依據(jù)。

[1] 仇錦春,廖清船,張永,等.香丹注射液對(duì)急性血瘀模型大鼠血液流變性及血小板聚集的影響[J].中國(guó)實(shí)驗(yàn)方劑學(xué)雜志,2011,17 (4):137-139.

[2] 李斐,孟運(yùn)蓮.香丹注射液對(duì)大鼠腦缺血再灌注損傷的保護(hù)作用[J].中國(guó)現(xiàn)代藥物應(yīng)用,2010,4(1):25-27.

R927.2

A

1673-5846(2014)01-0047-02

吉林省集安益盛藥業(yè)，吉林通化 134200