銀柴胡中α-菠甾醇和豆甾-7-烯醇含量測(cè)定的方法學(xué)研究

張玉璽，馬紅軍，張立虹

（1. 銀川能源學(xué)院 石油化工系， 寧夏 銀川 750105； 2. 銀川能源學(xué)院 生物工程系， 寧夏 銀川 750105; 3. 寧夏固原市回民中學(xué)，寧夏 固原 756000）

銀柴胡中α-菠甾醇和豆甾-7-烯醇含量測(cè)定的方法學(xué)研究

張玉璽1，馬紅軍2，張立虹3

（1. 銀川能源學(xué)院 石油化工系， 寧夏 銀川 750105； 2. 銀川能源學(xué)院 生物工程系， 寧夏 銀川 750105; 3. 寧夏固原市回民中學(xué)，寧夏 固原 756000）

建立銀柴胡中α-菠甾醇和豆甾-7-烯醇含量測(cè)定的方法。采用薄層掃描法，以525 nm為測(cè)定波長，700 nm為參比波長，α-菠甾醇（α-spinasterol）和豆甾-7-烯醇（stigmast-7-enol）的混合物（1：3）為對(duì)照品，測(cè)定銀柴胡中α-菠甾醇和豆甾-7-烯醇的含量。α-菠甾醇和豆甾-7-烯醇含量在21.46～107.30 μg/ μL 范圍內(nèi)呈良好的線性關(guān)系（r=0.991 1），平均回收率為99.5% (RSD=4.8%)。結(jié)論 該方法簡單、省時(shí)、損失小，可用于測(cè)定銀柴胡中α-菠甾醇和豆甾-7-烯醇的含量。

銀柴胡； α-菠甾醇和豆甾-7-烯醇；含量測(cè)定；方法學(xué)

銀柴胡為石竹科植物Stellaria dichotoma L. var. lanceolata Bge.的干燥根，已有近400年的用藥歷史，具有清虛熱、 除疳熱之功能[1]，其化學(xué)成分主要有甾醇類、環(huán)肽類、黃酮類和揮發(fā)性成分，但甾醇類為主要成分且其為除虛熱的主要活性物質(zhì)[2,3]。銀柴胡中α-菠甾醇和豆甾-7-烯醇含量測(cè)定方法雖已有報(bào)道[4,5]，但此方法較為繁瑣，萃取過程損失較大，筆者在前人研究的基礎(chǔ)上，進(jìn)行了測(cè)定方法的改進(jìn)和完善，改進(jìn)后的測(cè)定方法簡單，快速，損失小。

1 實(shí)驗(yàn)部分

1.1 儀器

梅特勒AE-240型電子分析天平，島津CS-9 301型雙波長飛點(diǎn)薄層掃描儀，硅膠G板購自北京化工廠。

1.2 試藥

α-菠甾醇（α-spinasterol）和豆甾-7-烯醇（stigmast-7-enol）的混合物（1∶3）對(duì)照品（自制，并經(jīng)波譜分析鑒定結(jié)構(gòu)，HPLC歸一化法檢測(cè)純度為99.0%）；銀柴胡樣品采于寧夏各地，經(jīng)鑒定為銀柴胡Stellaria dichotoma L. var. lanceolata Bge.；氯仿、甲醇、乙醚、乙酸乙酯、苯、硫酸、乙醇均為分析純。

1.3 試驗(yàn)方法

1.3.1 對(duì)照品溶液的制備

精密稱取α-菠甾醇和豆甾-7-烯醇的混合對(duì)照品適量，加氯仿制成約1μg/μL的溶液，即得。

1.3.2 供試品溶液的制備

取銀柴胡細(xì)粉約2.5 g，精密稱定，置50 mL具塞三角瓶中，精密加氯仿25 mL，超聲處理20 min，濾過，用氯仿洗滌濾紙及殘?jiān)?，合并氯仿液，回收蒸干，殘?jiān)眉状既芙獠⒍ㄈ葜? mL的容量瓶中，搖勻，即得。

1.3.3 薄層條件

以硅膠G板（100 mm×200 mm）為吸附劑，以甲苯：乙酸乙酯（80：20）為展開劑，以10%的硫酸乙醇溶液為顯色劑，顯色條件為105 ℃加熱5 min。

1.3.4 掃描條件

測(cè)定波長λs=525 nm，參比波長λr=700 nm，掃描速度為20 mm/min，反射法鋸齒掃描，光路狹縫1.25 mm×1.25 mm，線性參數(shù)SX=3。

1.3.5 測(cè)定方法

照薄層色譜法試驗(yàn)[6]，精密吸取對(duì)照品溶液2 μL和8μL與供試品溶液10μL分別點(diǎn)于同一硅膠G板上，以甲苯：乙酸乙酯（80：20）為展開劑，展開后取出，晾干，噴以10%的硫酸乙醇溶液，在105 ℃加熱5 min使斑點(diǎn)顯色清晰，取出，在薄層板上覆蓋同樣大小的玻璃板，固定周圍，依法進(jìn)行掃描，測(cè)定波長λs=525 nm，參比波長λr=700 nm，測(cè)定供試品與對(duì)照品吸收度積分值，按外標(biāo)兩點(diǎn)法計(jì)算，即得。

2 實(shí)驗(yàn)結(jié)果

2.1 標(biāo)準(zhǔn)曲線

精密吸取對(duì)照品溶液（1.073μg/μL）2，4，6，8，10 μL分別點(diǎn)于同一硅膠G板上，按上述方法展開，顯色，掃描測(cè)定。計(jì)算，得回歸方程Y=2.76036 + 0.0012X (r =0.9911)，α-菠甾醇和豆甾-7-烯醇在2.146～10.730μg/μL范圍內(nèi)成良好的線性關(guān)系。

2.2 精密度實(shí)驗(yàn)

取同一對(duì)照品溶液 5μL，點(diǎn)于不同的硅膠 G板上，依法展開，掃描測(cè)定，共6份，RSD＝2.3%，說明精密度良好。

2.3 穩(wěn)定性試驗(yàn)

取對(duì)照品溶液與供試品溶液各5 μL分別點(diǎn)于同一硅膠G板上，展開，每隔30 min掃描測(cè)定1次，結(jié)果對(duì)照品溶液與樣品溶液隨放置時(shí)間的延長，測(cè)定數(shù)值變小，但變化趨勢(shì)一致，見圖 1，所以規(guī)定顯色完畢后立即測(cè)定。

2.4 薄層回收率

精密吸取已知含量（0.433 48μg/μL）的供試品溶液5μL、供試品溶液5μL+對(duì)照品溶液2μL、供試品溶液5μL+對(duì)照品溶液3μL、供試品溶液5 μL+對(duì)照品溶液4μL各2份，及對(duì)照品溶液2μL和8μL點(diǎn)于同一硅膠G板上，按上述方法展開、掃描測(cè)定，平均回收率為99.5%，n=6，RSD=4.8%，結(jié)果見表1。

圖1 穩(wěn)定性趨勢(shì)圖Fig.1 Stability trends

表1 薄層回收率Table 1 TLC recovery

2.5 樣品的測(cè)定

利用本文建立的方法對(duì)寧夏不同產(chǎn)地種植的 3年生銀柴胡樣品中α-菠甾醇和豆甾-7-烯醇的含量進(jìn)行測(cè)定，見表 2，結(jié)果顯示寧夏不同產(chǎn)區(qū)銀柴胡中α-菠甾醇和豆甾-7-烯醇的含量變化不大。

表2 含量測(cè)定結(jié)果Table 2 Determination results

3 討 論

圖2 薄層色譜掃描圖Fig.2 TLC scan

文獻(xiàn)[4,5]對(duì)α-菠甾醇和豆甾-7-烯醇的測(cè)定雖也采用了雙波長薄層掃描法，但其在溶媒的選擇上都用的是甲醇，樣品前處理方法中都含有乙醚萃取，筆者在實(shí)驗(yàn)中改用氯仿做溶媒，且省去了乙醚萃取過程。

通過方法的改進(jìn)，α-菠甾醇和豆甾-7-烯醇含量提高了近一倍，結(jié)果見表 3，可見改進(jìn)的方法減少了萃取過程的損失，雖然薄層板上顯示雜質(zhì)較多（圖2），但不干擾主成分斑點(diǎn)，增加了提取率。

Study on Determination Methods of α- spinach sterols and bean-7-ol in Silver Bupleurum

ZHANG Yu-xi1, MA Hong-jun2, ZHANG Li-hong3
（1. Institute of Petrochemical Technology, Yinchuan Energy College, Ningxia Yinchuan 750105, China; 2. Department of Bioengineering, Yinchuan Energy College, Ningxia Yinchuan 750105, China; 3. Ningxia Guyuan Huimin Middle School, Ningxia Guyuan 75600, China）

A method to determine α- spinach sterols and bean-7-ol contents in silver Bupleurum was established. TLC scanning method was used to determine α- spinach sterols and bean-7-ol contents in silver Bupleurum by using 525 nm as determining wavelength and 700 nm as reference wavelength, the mixture of α- spinasterol (α-spinasterol) and bean-7-ol (stigmast-7-enol) (1: 3) as reference sample. The results show that, α- spinach sterols and bean-7-ol content in 21.46～107.30 μg/μL show a good linear relationship (r = 0.991 1), the average recovery is 99.5% (RSD = 4.8%). The method is simple, time-saving, small loss, and can be used to determine the content of α- spinach sterols and beans-7-enol in silver Bupleurum.

Silver bupleurum; α- spinach sterols and bean-7-ol; Determination; Methodology

O 657

A

1671-0460（2014）11-2474-03

2014-09-17

張玉璽（1977-），女，寧夏銀川人，講師，2002年畢業(yè)于寧夏大學(xué)化學(xué)工程與工藝專業(yè)，研究方向：化學(xué)工程與工藝。E-mail：zyx771120@163.com。