牛德云，孟春楊，周 斌，楊玉春，胡秋芬，高雪梅

(云南民族大學(xué)民族藥資源化學(xué)國家民委-教育部重點實驗室，云南昆明650500)

玫瑰是薔薇科薔薇屬落葉叢生灌木，品種繁多，其花色、香、形俱美，有極高的經(jīng)濟價值［1-2］.玫瑰花藥用價值極高，歷代本草均有玫瑰花在藥用方面的記載;玫瑰花具有清除自由基、抗氧化、抗腫瘤、抗病毒、擴張血管、解毒、利膽等作用［3］.

在玫瑰花化學(xué)成分的研究方面，主要研究不同品種、產(chǎn)地和生長發(fā)育期玫瑰揮發(fā)油的產(chǎn)量和香氣成分變化，玫瑰提取物及單體化合物的結(jié)構(gòu)鑒定［4］.研究發(fā)現(xiàn)，玫瑰花提取物的主要成分有黃酮類、鞣質(zhì)類、萜類、酚類等多種活性成分［5］.牛淑敏等［6］從玫瑰花中分離鑒定出 3，5，7，3'，4'- 五羥基黃酮(槲皮素)和3，4，5-三羥基苯甲酸(沒食子酸)2種抗氧化活性成分，從玫瑰花中首次分離得到槲皮素，它們都具有抗溶血和抗過氧化活性.玫瑰花的精油對體外全血血小板聚集具有抑制作用［7-8］.王曉霞等［9］對云南食用玫瑰精油的化學(xué)成分進行分析，鑒定出了86種成分，其中部分成分對豐富卷煙產(chǎn)品的香氣降低刺激性和改善余味方面均具有一定的效果，從而明確其實用性.在綜合了解前人研究的基礎(chǔ)上，本研究對云南保山的玫瑰花進行研究，為玫瑰花化學(xué)成分的研究提供更多科學(xué)信息.

1 材料與方法

1.1 樣品來源

采自云南保山的玫瑰花花瓣，風(fēng)干后備用.

1.2 實驗儀器和試劑

MS和NMR由中國科學(xué)院昆明植物研究所代為測定.儀器為VGAUTO Spec-3000質(zhì)譜儀;Bruker AM-400和DRX-500核磁共振儀;JASCO DIP-370型數(shù)字式旋光儀;Bio-Rad FTS-135型紅外光譜儀;UV 210A型紫外光譜儀;安捷倫1100型高效液相色譜儀，色譜柱為Agilent公司的ZORBAX SB-C18(9.4 mm ×250 mm，5 μm)反相柱、博納艾杰爾科技公司的Venusil HILIC(10 mm×250 mm，5 μm)色譜柱;Buchi R-210型旋轉(zhuǎn)蒸發(fā)儀、V-700真空泵;EYELA CA-1111冷卻水循環(huán)裝置;流動相過濾裝置，0.45 μm 微孔過濾膜.

100～200目、200～300目硅膠和 GF254(100 mm×100 mm)硅膠板(青島海洋化工廠生產(chǎn));MCI-gel CHP-20P材料(日本三菱化學(xué)公司);Sephadex LH-20凝膠(pharmacia 17-0710-01);5%H2SO4乙醇溶液顯色劑.

1.3 提取和分離

5.0 kg保山玫瑰花干花，粉碎后用V(氯仿)∶V(甲醇)=(2∶1)溶液10 L室溫浸泡3～5天，超聲3次(每次30 min)，過濾，減壓蒸餾回收溶劑，再用回收溶劑反復(fù)常溫浸泡超聲提取5～6次，合并浸膏得到650 g.浸膏用980 g(100～200目)粗硅膠拌樣，烘干，用4.5 kg硅膠(100～200目)柱層析，V(氯仿)∶V(甲醇)=1∶0(Ⅰ)、20∶1(Ⅱ)、10∶1(Ⅲ)、5∶1(Ⅳ)、2∶1(Ⅴ)、0∶1(Ⅵ)作梯度洗脫劑洗脫，除去大量雜質(zhì)，將浸膏分成6個部分.經(jīng)TLC檢測，Ⅰ部分主要成分是揮發(fā)油和脂肪酸類物質(zhì);Ⅱ、Ⅲ、Ⅳ、Ⅴ有明顯的主斑點;Ⅵ部分沒有主斑點.粗略對比Ⅱ、Ⅲ、Ⅳ、Ⅴ部分，選定Ⅳ部分用制備和半制備型高效液相色譜進行分離.

2 結(jié)構(gòu)鑒定

化合物(1):黃色粉末;1H NMR(Pyridine，400 MHz)δ:3.58-3.70(6H，m，H-2″～ 6″)，4.20(1H，m，C6″-OH)，4.27(1H，m，C2″-OH)，4.37(1H，m，C3″-OH)，5.57(1H，d，J=7.5 Hz，H-1″)，5.68(1H，m，C4″-OH)，6.40(1H，dd，J=8.5，2.5 Hz，H-3'，5')，7.35(2H，dd，J=8.5，2.5 Hz，H-2'，6')，10.31(1H，s，C4'-OH)，12.94(1H，s，C5-OH).13C NMR(Pyridine，400 MHz)δ:163.67(C-2)，102.79(C-3)，181.63(C-4)，161.41(C-5)，98.77(C-6)，164.06(C-7)，93.88(C-8)，157.24(C-9)，103.66(C-10)，121.16(C-1')，128.33(C-2'，6')，115.88(C-3'，5')，161.07(C-4')，99.91(C-1″)，73.06(C-2″)，76.39(C-3″)，69.55(C-4″)，77.12(C-6″).以上數(shù)據(jù)與文獻［10］對照基本一致故，鑒定化合物(1)為Kaempferol-7-O-β -D-galactopyranoside.

化合物(2):黃色粉末;1H NMR(MeOD，400 MHz)δ:8.08(2H，d，J=8.0 Hz，H-2'，6')，6.89(2H，d，J=8.0 Hz，H-3'，5')，6.36(1H，s，H-8)，6.15(1H，s，H-6);13C NMR(CD3OD)δ:177.2(C-4)，166.8(C-7)，162.4(C-9)，160.5(C-4')，158.3(C-5)，147.8(C-2)，137.0(C-3)，130.6(C-2'，6')，123.8(C-1')，116.3(C-3'，5')，104.2(C-10)，99.6(C-6)，94.7(C-8).以上數(shù)據(jù)與文獻［11］對照基本一致故，鑒定化合物(2)為Kaempferol.

化合物(3):黃色粉末;1H NMR(CD3OD，400 MHz)δ:12.48(1H，s，5-OH)，7.73(1H，d，J=2.0 Hz，2'-H)，7.64(1H，dd，J=8.5，2.0 Hz，6'-H)，6.87(1H，d，J=8.5 Hz，5'-H)，6.38(1H，d，J=2.0 Hz，8-H)，6.17(1H，d，J=2.0 Hz，6-H);13C NMR(CD3OD，400 MHz)δ:177.3(C-4)，163.9(C-7)，160.7(C-9)，158.2(C-5)，148.8(C-4')，148.0(C-2)，146.2(C-3')，137.2(C-3)，124.1(C-1')，121.6(C-6')，116.2(C-5')，116.0(C-2')，104.5(C-10)，99，2(C-6)，94.4(C-8).以上數(shù)據(jù)與文獻［12］對照基本一致，故鑒定化合物(3)為Quercetin.

化合物(4):C16H14O7;黃褐色粉末;13C NMR(100 MHz，MeOD)δ:85.2(d，C-2)，73.6(d，C-3)，198.2(s，C-4)，164.4(s，C-5)，96.4(d，C-6)，169.3(s，C-7)，96.4(d，C-8)，165.3(q，C-9)，129.8(s，C-1')，112.3(d，C-2')，148.9(s，C-3')，148.3(s，C-4')，115.9(s，C-5')，122.2(d，C-6')，56.3(q，OMe).以上數(shù)據(jù)與文獻［13］對照基本一致，故鑒定化合物(4)為Taxifolin 4'-methyl ether.

化合物(5):C15H14O6;淡黃色固體;1H NMR(MeOH)δ:5.89(1H，d，J=1.4 Hz，H-6)，6.03(1H，d，J=1.5 Hz，H-8)，4.56(1H，d，J=7.5 Hz，H-2)，4.00(1H，m，H-3)，2.92(1H，dd，J=4.8，16 Hz，H-4)，2.54(1H，dd，J=7.0 ，16 Hz，H-4)，6.99(1H，d，J=1.5 Hz，H-2')，6.81(1H，d，J=6.5 Hz，H-5')，6.75(1H，d，J=1.5，6.5 Hz，H-6');13C NMR(MeOH)δ:82.7(d，C-2)，68.3(d，C-3)，28.8(t，C-4)，156.9(s，C-5)，96.1(d，C-6)，157.7(s，C-7)，95.4(d，C-8)，157.2(s，C-9)，100.6(s，C-10)，132.1(s，C-1')，115.2(d，C-2')，145.6(s，C-3')，145.7(s，C-4')，115.6(d，C-5')，120.0(d，C-6').Positive FAB MS:m/z 290［M］+.以上數(shù)據(jù)與文獻［14］對照基本一致，故鑒定化合物(5)為(-)-Epicatechin.

化合物(6):黃色粉末;1H NMR(CD3OD)δ:12.14(1H，s，C5-OH)，10.78(1H，s，C4'-OH)，9.58(1H，s，C7-OH)，7.30(2H，d，J 5'，6'=9.0 Hz，H-2'，6')，5.88(2H，d，J 2'，3'=9.0 Hz，H-3'，5')，5.87(2H，s，H-6，8)，5.43(2H，d，J 2，3=7.0 Hz，H-2)，3.40(1H，t，J 2，3=7.0 Hz，H-3);13C NMR(DMSO，400 MHz)δ:196.3(C-4)，166.6(C-7)，163.5(C-5)，162.9(C-9)，157.7(C-4')，128.8(C-1')，128.3(C-2'，6')，115.1(C-3'，5')，101.7(C-10)，95.8(C-6)，94.9(C-8)，78.4(C-3)，41.9(C-2).以上數(shù)據(jù)與文獻［15］對照基本一致，故鑒定化合物(6)為Dihydrogenistein.

3 結(jié)語

1)通過對云南保山玫瑰花花瓣中黃酮類化學(xué)成分進行研究，從中分離得到6種黃酮類化合物.經(jīng)過波譜方法的鑒定并結(jié)合有關(guān)文獻確定化合物結(jié)構(gòu)，分別鑒定為:Kaempferol-7-O-β-D-galactopyranoside(1)，Kaempferol(1)，Quercetin(3)，Taxifolin-4'-methyl ether(4)，(-)-Epicatechin(5)，Dihydrogenistein(6)，這些化合物均為首次從保山玫瑰花中分離得到，為進一步對云南玫瑰花資源的開發(fā)利用提供了理論依據(jù).

2)云南保山的玫瑰花中含有黃酮類物質(zhì)，但實驗過程中所選取的樣品為5 kg玫瑰花干花瓣，屬于小樣分離研究，在研究過程中出現(xiàn)化合物做譜分析時量不夠的情況，所以下一步研究工作將致力于玫瑰花瓣的大樣研究，同時對分離得出的結(jié)構(gòu)新穎的黃酮類物質(zhì)做藥理活泩.

［1］劉鐘棟.食品添加劑原理及應(yīng)用技術(shù)［M］.北京:中國輕工業(yè)出版社，2004.

［2］陳衛(wèi)平.月季花化學(xué)成分的研究［D］.石家莊:河北醫(yī)科大學(xué)，2010.

［3］李明，李艷芳，孫永超.中藥玫瑰花的研究進展［J］.衛(wèi)生職業(yè)教育雜志，2007，8(25):145-147.

［4］王多寧.玫瑰花的綜合利用及開發(fā)前景［J］.黑龍江農(nóng)業(yè)科學(xué)，2010，187(1):117-120.

［5］LIU Xin，YE Wen-cai，YU Biao，et al.Two new flavonol glycosides from Gymnema sylvestre and Euphorbia ebracteolata［J］.Carbohydrate Research，2004，339(4):891-895.

［6］牛淑敏，李巍.玫瑰花中兩種抗氧化成分的分離鑒定與活性測定［J］.南開大學(xué)學(xué)報:自然科學(xué)版，2006，39(1):90-94.

［7］厙文波，甘露，安曉晶，等.玫瑰精油抗血栓形成作用［J］.食品科學(xué)，2011，32(11):270-272.

［8］黃朝情，郭寶林，黃文華，等.北京妙峰山玫瑰精油化學(xué)成分的GC-MS分析［J］.北京農(nóng)學(xué)院學(xué)報，2011，26(1):46-50.

［9］王曉霞，魏杰，劉勁蕓，等.云南食用玫瑰精油化學(xué)成分的GC/MS分析及其應(yīng)用研究［J］.云南大學(xué)學(xué)報:自然科學(xué)版，2011，33(2):414-417.

［10］HAN Ying-mei，NISHIBE S，NOGUCHI Y，et al.Flavonol glycosides from the stems of Trigonella foenum-graecum［J］.Phytochemistry，2001，58(4):577-580.

［11］MURAKAMI N，MOSTAQUL H M，TAMURA S，et al.New anti-malarial flavonol glycoside from Hydrangeae Dulcis Folium［J］.Bioorganic＆ medicinal chemistry letters，2001，11(18):2445-2447.

［12］MASTUDA H，MORIKAWA T，UEDA K，et al.Structural requirements of flavonoids for inhibition of antigeninduced degranulation，TNF-α and IL-4 production from RBL-2H3 cells［J］.Bioorganic ＆ medicinal chemistry，2002，10(10):3123-3128.

［13］PONCE M A，SCERVINO J M，ERRA-BALSELLS R，et al.Flavonoids from shoots and roots of Trifolium repens(white clover)grown in presence or absence of the arbuscular mycorrhizal fungus Glomus intraradices［J］.Phytochemistry，2004，65(13):1925-1930.

［14］ZHANG Shi-xuan，MA Ji-gang，BAO Yong-ming，et al.Nitrogen-containing flavonoid analogues as CDK1/cyclin B inhibitors:Synthesis，SAR analysis，and biological activity［J］.Bioorganic ＆ Medicinal Chemistry，2008，16(15):7127-7132.

［15］HEINONEN S，W?H?L? K，ADLERCREUTZ H.Identification of Isoflavone Metabolites Dihydrodaidzein，Dihydrogenistein，6'-OH-O-dma，and cis-4-OH-equol in Human Urine by Gas Chromatography-Mass Spectroscopy Using Authentic Reference Compounds［J］.Analytical Biochemistry，1999，274(2):211-219.