龍 麗，邱曉燕，胡 琳，何耀瑩，戴 云

(1. 云南民族大學 民族藥資源化學國家民委-教育部重點實驗室, 云南 昆明 650500； 2. 云南省標準化研究院，云南 昆明 650228；3.昆明振華制藥廠有限公司，云南 昆明 650034)

密花豆屬(SpatholobusHassk)植物是木質攀援藤本植物蝶形花科下的一個屬，全世界約有40種,主要分布于熱帶地區(qū).我國有該屬植物10種和1變種,其主要分布在云南省.目前在臨床上廣泛使用的中藥雞血藤為密花豆屬植物密花豆(SpatholobussuberectusDunn)的干燥藤莖，有活血化瘀、通絡活筋的功效，常用來治療月經(jīng)不調、血虛萎黃、風濕痹痛等癥[1].止血藤是一種傣族傳統(tǒng)民族藥, 特產于西雙版納勐養(yǎng),是密花豆屬單耳密花豆(S.uniaurit-usWei)種的干燥藤莖,在民間常被作為雞血藤使用.傣語稱之為“嘿亮浪”,其性辛、微甘,平,歸肝、腎經(jīng)，有補水補血、活血止血、除風止痛的功效[2].止血藤與正品雞血藤同屬密花豆屬，至今未見對其化學成分研究的報道.為進一步開發(fā)利用該種植物，本論文對止血藤的化學成分進行了研究,分離得到8個化合物，分別鑒定為β-谷甾醇(β-sitosterol) (1)、豆甾醇(stiqmssterol) (2)、豆甾-4-烯-3-酮(stigmast-4-en-3-one)(3)、3-羥基-豆甾-5-烯-7-酮(3-hydroxystigmast-5-en-7-one)(4)、白樺脂酸(betulinic acid)(5)、大黃素(Emodin)(6)、大黃素甲醚(Physcion)(7)、羽扇豆酮(Lupeone)(8).所有化合物均為首次從該植物中分離得到.

1 實驗部分

1.1 儀器與材料

YRT-3型熔點測定儀(溫度未校正); Bruker DRX-500型核磁共振儀(瑞士布魯克公司生產),TMS為內標; VGZAB-ZF 質譜儀;高效制備液相色譜儀(LC 3000型);GL-21M高速冷凍離心機(湘儀實驗室儀器有限公司).

柱色譜硅膠(200～300目)和 GF254高效薄層色譜板均為青島海洋化工廠生產;Pharmadex LH-20(安瑪西亞生物技術公司生產);大孔吸附樹脂D101(40～60目)為滄州寶恩吸附材料有限公司生產;反相RP-18材料,提取溶劑為工業(yè)乙醇,其余試劑為分析純.

1.2 樣品的來源

止血藤莖采自云南西雙版納勐養(yǎng),經(jīng)云南民族大學胡琳副教授鑒定為止血藤,標本保存于云南民族大學化學與生物技術學院標本室.

1.3 樣品的提取與分離

將干燥的止血藤粗粉9 kg,經(jīng)粉碎后用95%乙醇冷浸提取2次,每次48 L,每次7天,然后將藥渣壓榨,再將浸出液和榨出液合并,減壓濃縮,得紅色浸膏1.5 kg,在浸膏中加入適量水使其溶解,用高速冷凍離心機離心,得到不溶物和上清液兩部分.不溶物分別用氯仿與甲醇溶解，得到氯仿溶解部分和甲醇溶解部分.上清液上大孔樹脂依次用30%乙醇、45%乙醇和95%的乙醇、丙酮進行梯度洗脫,分別得到浸膏576、256、27.6、2.0 g.

氯仿溶解部分用硅膠柱色譜分離,用V(石油醚)∶V(乙酸乙酯)=(1∶0～0∶1)梯度沖洗,得到6個組分(Fr.1～Fr.6).組分Fr.3～Fr.5反復經(jīng)硅膠柱層析,用V(石油醚)∶V(乙酸乙酯)=(60∶1～0∶1)為洗脫劑,經(jīng)Pharmadex LH-20凝膠柱色譜,重結晶等方法,得到化合物1,2,5.組分Fr.6經(jīng)硅膠柱層析,以V(氯仿)∶V(甲醇)=(30∶1～0∶1)為洗脫劑反復進行硅膠、Pharmadex LH-20凝膠柱色譜V(氯仿)∶V(甲醇)=1∶1,分別得到化合物4和3.

上清液中30%乙醇部分：取上清液部分,經(jīng)大孔吸附樹脂D101(40～60目),用V(水)∶V(乙醇)=(1∶0～0∶1)進行梯度洗脫,最后用丙酮沖洗.得到5個部分.組分Fr.2經(jīng)聚酰胺柱層析,以V(水)∶V(甲醇)=(1∶0～0∶1)為洗脫劑進行梯度洗脫,得到3個組分,組分Fr.2.1經(jīng)過Pharmadex LH-20柱,半制備液相得到化合物7.組分Fr.3經(jīng)過反復半制備液相V(水)∶V(甲醇)=(1∶0～0∶1)為洗脫劑以及Pharmadex LH-20凝膠層析柱,得到化合物5,6.

2 化合物的結構鑒定

化合物1：白色針狀晶體(氯仿),硫酸顯色為紫紅色;ESI-MS給出準分子離子m/z：414[M]+,m.p.139～141 ℃.結合譜圖推測分子式為C29H50O.在1H NMR (500 MHz，CDCl3)低場區(qū)觀察到一個烯氫質子信號5.34和一個連在氧C上的質子信號3.50(1H,m，H-3),結合C譜推測該化合物為甾醇類.它的1H NMR和13C NMR的數(shù)據(jù)與文獻[3]報道的β-谷甾醇的數(shù)據(jù)基本一致，鑒定為β-谷甾醇.

化合物2：白色針狀晶體(氯仿),硫酸顯色為紫紅色;m.p.162～164,ESI-MS給出準分子離子峰m/z：414[M+H]+.與β-谷甾醇比較,13C NMR譜中δC-22和δC-23分別向138.3和129.1的低場移動,推測在22和23位上形成了雙鍵.該化合物的1H NMR和13C NMR數(shù)據(jù)與文獻[4]報道的數(shù)據(jù)基本一致，鑒定為豆甾醇.

化合物3：白色晶體(氯仿),ESI-MSm/z:435 [M+Na]+;1H NMR(500 MHz,CDCl3)δ:5.65(1H,s,H-4),1.19(3H,s,H-19),0.94(3H,d,J=6.5 Hz,H-21),0.85(3H,t,J=6.5 Hz,H-29),0.80(3H,d,J=6.5 Hz,H-27),0.79(3H,d,J=6.5 Hz,H-26),0.65(3H,s,H-18),13C NMR(101 MHz,CDCl3)δ:35.6(C-1),33.9(C-2),199.7(C-3),123.6(C-4),171.8(C-5),32.9(C-6),31.9(C-7),35.5(C-8),53.7(C-9),38.5(C-10),20.9(C-11),39.5(C-12),42.3(C-13),55.8(C-14),24.1(C-15),28.3(C-16),55.9(C-17),11.9(C-18),17.3(C-19),36.0(C-20),18.6(C-21),33.9(C-22),26.1(C-23),45.7(C-24),29.1(C-25),19.7(C-26),18.9(C-27),22.9(C-28),11.9(C-29).以上數(shù)據(jù)與文獻[5]報道的豆甾-4-烯-3-酮數(shù)據(jù)基本一致，鑒定為豆甾-4-烯-3-酮(stigmast-4-en-3-one).

化合物4：白色晶體(氯仿),ESI-MSm/z：451[M+Na]+；1H NMR (500 MHz,CDCl3)δ:5.69(1H,s,H-6),3.67(1H,m,H-3),1.19(3H,s,H-19),0.93(3H,d,J=6.5 Hz,H-21),0.85(3H,d,J=6.5 Hz，H-27),0.82(3H,d,J=6.5 Hz,H-26),0.79(3H,t,J=6.6 Hz,H-29),0.69(3H,s,H-18).13C NMR(101 MHz,CDCl3)δ:36.2(C-1),31.0(C-2),70.4(C-3),41.7(C-4),165.3(C-5),126.0(C-6),202.5(C-7),45.3(C-8),49.8(C-9),38.6(C-9),38.6(C-10),21.1(C-11),36.2(C-12),43.1(C-13),49.8(C-14),28.5(C-15),29.0(C-16),54.6(C-17),11.9(C-18),17.2(C-19),36.0(C-20),18.9(C-21),33.9(C-22),26.2(C-23),45.7(C-24),31.0(C-25),19.7(C-26),18.8(C-27),22.9(C-28),11.9(C-29).以上數(shù)據(jù)與文獻[6]報道的3-羥基-豆甾-5-烯-7-酮數(shù)據(jù)基本一致，鑒定為3-羥基-豆甾-5-烯-7-酮(3-hydroxystigmast-5-en-7-one).

化合物5：白色針尖(氯仿), ESI-MSm/z：456[M]+；1H NMR(500 MHz,CDCl3)δ:4.73,4.60(1H.s,29-CH2);3.17(1H,m,H-3),1.68,0.97,0.94,0.93,0.84,0.75(各3H,s,6xCH3).13C NMR(101 MHz,CDCl3)δ:38.7(C-1),27.7(C-2),78.7(C-3),38.6(C-4),55.2(C-5),18.1(C-6),32.1(C-7),46.8(C-8),50.4(C-9),37.0(C-10),20.8(C-11),26.9(C-12),38.1(C-13),48.6(C-14),29.5(C-15),32.8(C-16),56.1(C-17),49.2(C-18),48.9(C-19),150.6(C-20),29.7(C-21),37.5(C-22),28.3(C-23),15.7(C-24),15.2(C-25),15.9(C-26),14.5(C-27),179.0(C-28),109.3(C-29),19.4 (C-30).以上數(shù)據(jù)與文獻[7]報道的數(shù)據(jù)基本一致，鑒定為白樺脂酸(betulinic acid).

化合物6：橙黃色晶體(吡啶);EI-MSm/z：293[M+Na]+；1H NMR(500 MHz,DMSO)δ:12.09(1H,s),11.99(1H,s),11.36(1H，s), 7.43(1H,s),7.12(1H，s),7.07(1H,d,J=2.4 Hz)，6.56(1H，d，J=2.4 Hz),2.38(3H，s，CH3),13C NMR(126 MHz,DMSO)δ:190.1(C-9),181.5(C-10),166.4(C-3),164.5(C-1),161.6(C-8),149.2(C-6),135.4(C-10a),133.0(C-4a)、124.3(C-7),120.9(C-5),114.0(C-8a),109.6(C-9a),108.7(C-4),108.0(C-2),22.0(6-CH3).以上數(shù)據(jù)與文獻[8]報道的數(shù)據(jù)基本一致，鑒定為大黃素(Emodin).

化合物7：黃色晶體(氯仿)，EI-MSm/z：284[M]+；1H NMR(500 MHz,CDCl3)δ:12.31(1H,s,OH-8),12.10(1H,s,OH-1),7.63(1H,s,H-4),7.36(1H,d,J=2.5 Hz，H-5),7.07(1H,brs,H-2),6.68(1H,d,J=2.5 Hz，H-7),3.95(3H,s,OCH3),2.45(3H,s,CH3);13C NMR(126 MHz,CDCl3)δ:190.6(C-9),182.0(C-10),166.8(C-1),166.0(C-8),163.6(C-3),149.3(C-6),135.4(C-4a),133.4(C-10a),124.5(C-7),122.0(C-5),114.0(C-9a),110.8(C-8a)，108.5(C-2),106.8(C-4),56.3(OCH3),22.3(CH3).以上數(shù)據(jù)與文獻[9]報道的數(shù)據(jù)基本一致，鑒定為大黃素甲醚(Physcion).

化合物8：白色晶體(氯仿),EI-MSm/z：447[M+Na]+;1H NMR(500 MHz,CDCl3)δ:4.69(1H,d,J=2.3 Hz,H-29b),4.57(1H,d,J=2.3 Hz，H-29a),1.68(3H,s,H-30),1.08(6H,s,H-23,26),1.04(3H,s,H-24),0.96(3H,s,H-27),1.03(3H,s,H-24),0.94(3H,s,H-27),0.94(3H,s,H-25),0.80(3H,s,H-28);13C NMR(125 MHz,CDCl3)δ:39.7(C-1),34.2(C-1),218.2 (C-3),47.3(C-4),55.0(C-5),19.8(C-6),33.7(C-7),40.9(C-8),49.9(C-9),37.0(C-10),21.6(C-11),25.3(C-12),35.3(C-13),42.9(C-14),27.5(C-15),35.6(C-16),43.1(C-17),48.4(C-18),48.0(C-19),150.8(C-20),30.0(C-21),40.7(C-22),26.8(C-23),21.1(C-24), 15.9(C-25),15.8(C-26),14.6(C-27),18.0(C-28),109.4 (C-29),19.2(C-30).以上數(shù)據(jù)與文獻[10]報道的數(shù)據(jù)基本一致，鑒定為羽扇豆酮(Lupeone).

3 結語

本文運用現(xiàn)代分離分析技術研究了止血藤的化學成分,從其乙醇提取物中分離并鑒定出8個化合物,其中包括3種化學成分類型，有4個甾醇類、2個蒽醌類和2個三萜類,且所有化合物均為首次從該植物中分離得到.

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