針灸預(yù)處理誘導(dǎo)腦缺血耐受機(jī)制的實(shí)驗(yàn)研究進(jìn)展

鄭仕平，韓 為

（1.安徽中醫(yī)藥大學(xué)研究生部，安徽合肥 230038；2.安徽中醫(yī)藥大學(xué)附屬針灸醫(yī)院，安徽合肥 230061）

針灸預(yù)處理誘導(dǎo)腦缺血耐受機(jī)制的實(shí)驗(yàn)研究進(jìn)展

鄭仕平1，韓 為2

（1.安徽中醫(yī)藥大學(xué)研究生部，安徽合肥 230038；2.安徽中醫(yī)藥大學(xué)附屬針灸醫(yī)院，安徽合肥 230061）

針灸預(yù)處理；腦缺血耐受；凋亡蛋白；腦代謝；皮質(zhì)酮；信號(hào)轉(zhuǎn)導(dǎo)；血管生成；炎性因子

腦缺血預(yù)處理是指在嚴(yán)重缺血之前給予的各種保護(hù)性干預(yù)措施。腦缺血耐受是指經(jīng)缺血預(yù)處理的腦組織對(duì)隨后嚴(yán)重缺血抵抗力明顯增強(qiáng)的現(xiàn)象?！搬槾填A(yù)處理”是黑龍江中醫(yī)藥大學(xué)孫忠人等［1］于2004年提出的，認(rèn)為提前給予每日1次共7d的針刺處理使腦細(xì)胞在隨后的持續(xù)性缺血中產(chǎn)生很強(qiáng)的抵抗力，從而得到保護(hù)，這一現(xiàn)象稱為“針刺預(yù)處理”。艾灸預(yù)處理，即“逆灸”，屬于逆針灸的一部分，是以“治未病”為主要理論基礎(chǔ)的防病保健方法。它是通過艾灸激發(fā)經(jīng)絡(luò)之氣，提高機(jī)體抗病能力，從而達(dá)到防止疾病的發(fā)生、減輕隨后疾病的損害和保健延年的目的。

臨床觀察和實(shí)驗(yàn)研究均證實(shí)，針灸對(duì)腦缺血損傷有顯著的保護(hù)作用，這一點(diǎn)已被國(guó)際公認(rèn)和廣泛采用。且與其他預(yù)處理方法相比，針灸預(yù)處理具有簡(jiǎn)單易行、安全可靠、患者易接受的特點(diǎn)。國(guó)內(nèi)外開展針灸預(yù)處理誘導(dǎo)腦缺血耐受機(jī)制的實(shí)驗(yàn)研究逐漸增多，現(xiàn)就近幾年的研究概況綜述如下。

1 調(diào)控抗凋亡蛋白，減輕腦細(xì)胞凋亡

孫忠人等［2－3］研究發(fā)現(xiàn)，針刺預(yù)處理可能通過上調(diào)FBJ骨肉瘤原癌基因（FBJ osteosarcoma oncogene，c－Fos）、B細(xì)胞淋巴瘤－2（B cell lymphoma 2，Bcl－2）蛋白表達(dá)而減輕嚴(yán)重缺血后細(xì)胞凋亡，啟動(dòng)機(jī)體內(nèi)源性神經(jīng)保護(hù)機(jī)制，促成腦缺血耐受的產(chǎn)生，提高機(jī)體自身內(nèi)在抗病與應(yīng)變能力，而不造成組織器官的損傷或機(jī)體功能代謝障礙等不良反應(yīng)。韓雪梅等［4－5］發(fā)現(xiàn)，針刺預(yù)處理后低氧誘導(dǎo)因子－1α（hypoxia inducible factor－1α，HIF－1α）、促紅細(xì)胞生成素（erythropoietin，EPO）蛋白及其mRNA在缺血周邊區(qū)表達(dá)增強(qiáng)，HIF－1α的表達(dá)上調(diào)可能是針刺預(yù)處理的腦保護(hù)機(jī)制之一。EPO參與針刺預(yù)處理的腦保護(hù)機(jī)制，其保護(hù)作用可能通過神經(jīng)營(yíng)養(yǎng)和血管生成雙重作用完成。田代實(shí)等［6］發(fā)現(xiàn)，針刺預(yù)處理可以減輕大鼠局灶性腦缺血再灌注損傷，可能通過促進(jìn)Bcl－2蛋白的表達(dá)，減少神經(jīng)細(xì)胞的凋亡來實(shí)現(xiàn)的。趙宇輝等［7］研究艾灸預(yù)處理對(duì)全腦缺血大鼠大腦皮質(zhì)Bcl－2和Bcl－2相關(guān)X蛋白（Bcl－associated X protein，Bax）的影響，發(fā)現(xiàn)艾灸預(yù)處理能通過上調(diào)抗細(xì)胞凋亡Bcl－2蛋白表達(dá)而抑制缺血腦組織神經(jīng)細(xì)胞凋亡；艾灸可以作為一種腦缺血預(yù)處理手段，對(duì)全腦缺血大鼠大腦皮質(zhì)神經(jīng)細(xì)胞具有保護(hù)作用；誘導(dǎo)腦缺血耐受，減輕缺血后神經(jīng)細(xì)胞損傷。

2 改善腦代謝，保護(hù)腦神經(jīng)

唐偉等［8－10］通過針刺足三里、曲池、百會(huì)預(yù)處理腦缺血再灌注大鼠，發(fā)現(xiàn)在大鼠大腦皮質(zhì)中，海馬CA1區(qū)存活的錐體細(xì)胞明顯增多，同時(shí)腦組織腺苷含量明顯增高，說明針刺預(yù)處理可明顯減輕腦缺血對(duì)大鼠大腦皮質(zhì)、海馬CA1區(qū)神經(jīng)細(xì)胞的損傷并增強(qiáng)內(nèi)源性腦組織腺苷含量。預(yù)先針刺對(duì)缺血性卒中發(fā)揮一定的神經(jīng)保護(hù)作用，增強(qiáng)內(nèi)源性腦組織腺苷含量很可能是針刺預(yù)處理的腦保護(hù)作用機(jī)制之一。研究還發(fā)現(xiàn)，針刺預(yù)處理組腦缺血后72h微血管損傷明顯減輕。說明針刺預(yù)處理在保護(hù)神經(jīng)細(xì)胞的同時(shí)，也對(duì)微血管產(chǎn)生保護(hù)作用，這既減輕了血管源性腦水腫，減小組織壓迫，也限制了血管中一些有害成分透過血管，從而減輕腦實(shí)質(zhì)細(xì)胞的損害。路志紅等［11］研究發(fā)現(xiàn)，電針刺激預(yù)處理組小鼠神經(jīng)功能評(píng)分顯著優(yōu)于對(duì)照組（P＜0.05），電針刺激預(yù)處理組小鼠海馬CA1區(qū)壞死神經(jīng)細(xì)胞數(shù)量明顯少于對(duì)照組（P＜0.05），具有顯著腦保護(hù)作用。說明電針刺激預(yù)處理對(duì)C57BL6小鼠前腦缺血再灌注損傷具有保護(hù)作用。楊靜等［12］發(fā)現(xiàn)δ受體拮抗劑納曲吲哚1mg／kg能夠阻斷重復(fù)電針刺激大鼠百會(huì)穴誘導(dǎo)的腦缺血耐受效應(yīng)，說明δ受體參與重復(fù)電針刺激大鼠百會(huì)穴誘導(dǎo)的腦缺血耐受機(jī)制。

3 調(diào)控血清皮質(zhì)酮含量

李軍巖等［13］通過針刺預(yù)處理腦缺血再灌注模型大鼠腎俞、百會(huì)穴，觀察不同時(shí)間段血清皮質(zhì)酮水平，發(fā)現(xiàn)腎俞、百會(huì)穴針刺預(yù)處理可顯著降低腦缺血再灌注大鼠血清皮質(zhì)酮含量，尤其是在腦缺血再灌注早期（6h左右），穴位針刺預(yù)處理對(duì)腦缺血再灌注大鼠血清皮質(zhì)酮的分泌具有明顯的調(diào)控作用。針刺預(yù)處理抗腦缺血再灌注損傷作用可能是通過抑制缺血時(shí)皮質(zhì)酮過度分泌，調(diào)整下丘腦－垂體－腎上腺皮質(zhì)軸功能所致。

4 調(diào)整神經(jīng)細(xì)胞內(nèi)信號(hào)轉(zhuǎn)導(dǎo)

王振宇等［14］通過實(shí)驗(yàn)研究發(fā)現(xiàn)，缺血再灌注24h后，電針預(yù)處理治療組能明顯縮小腦梗死體積，減少腦缺血大鼠磷酸化信號(hào)轉(zhuǎn)導(dǎo)和轉(zhuǎn)錄激活因子3（phosphorylated signal transducers and activators of transcription 3，pSTAT3）蛋白的表達(dá)。電針預(yù)處理能顯著下調(diào)大鼠腦缺血再灌注損傷后大鼠pSTAT3的表達(dá)水平，明顯縮小腦梗死體積，對(duì)腦缺血再灌注損傷后神經(jīng)細(xì)胞的保護(hù)有重要意義。何二濤等［15］發(fā)現(xiàn)，電針預(yù)處理使大鼠神經(jīng)行為學(xué)評(píng)分增高，腦梗死體積比降低（P＜0.05）；可上調(diào)蛋白激酶B（protein kinase B，Akt）磷酸化水平（P＜0.05）。實(shí)驗(yàn)提示電針預(yù)處理增加Akt（Ser473）磷酸化水平，在缺血再灌注早期上調(diào)磷脂酰肌醇3激酶／蛋白激酶B（phosphatidylinositol－3－kinase／protein kinase B，PI3K／Akt）通路可能是誘導(dǎo)大鼠腦缺血耐受的主要機(jī)制。

5 改善突觸超微結(jié)構(gòu)，促進(jìn)神經(jīng)功能恢復(fù)

聶煌等［16］通過電針預(yù)處理線栓法復(fù)制的大腦中動(dòng)脈阻塞模型大鼠，并觀察缺血1周后對(duì)缺血區(qū)皮質(zhì)神經(jīng)細(xì)胞突觸超微結(jié)構(gòu)、突觸素p38、神經(jīng)生長(zhǎng)因子（nerve growth factor，NGF）的影響。發(fā)現(xiàn)缺血24h和1周時(shí)，相同時(shí)間點(diǎn)電針組神經(jīng)功能評(píng)分高于缺血對(duì)照組（P＜0.05）；缺血1周時(shí)，電針組突觸的面數(shù)密度、突觸連接帶面密度、突觸體密度、突觸后致密物質(zhì)、突觸間隙寬度均高于缺血對(duì)照組；突觸界面曲率兩組間無(wú)顯著差異；電針組NGF的免疫陽(yáng)性細(xì)胞數(shù)高于缺血對(duì)照組。結(jié)果說明電針預(yù)處理可改善大鼠腦缺血1周后突觸超微結(jié)構(gòu)，NGF表達(dá)增加可能促進(jìn)了神經(jīng)細(xì)胞的突觸可塑性，對(duì)于促進(jìn)缺血后神經(jīng)功能恢復(fù)具有重要作用。

6 促進(jìn)血管生成，改善血液供應(yīng)

張彤等［17］通過電針預(yù)處理腦缺血再灌注模型大鼠曲池和后三里穴，觀察發(fā)現(xiàn)處理過的腦缺血再灌注損傷大鼠較未經(jīng)過預(yù)處理的大鼠骨髓和外周血中內(nèi)皮祖細(xì)胞（endothelial progenitor cells，EPCs）和血管內(nèi)皮生長(zhǎng)因子（vascular endothelial growth factor，VEGF）的含量增加；隨著電針預(yù)處理后時(shí)間的延長(zhǎng)，EPCs和VEGF的含量增加越多。電針預(yù)處理可以通過提高腦缺血再灌注損傷大鼠骨髓和外周血中VEGF的濃度，VEGF作用于EPCs的表面受體VEGFR2，從而加速EPCs的動(dòng)員和遷移入血，提高骨髓和外周血中EPCs百分比、VEGF濃度。EPCs、VEGF數(shù)量的增加對(duì)缺血組織的血管新生起到重要作用。

7 下調(diào)炎性因子，抑制炎性反應(yīng)

金深輝等［18］觀察發(fā)現(xiàn)，電針預(yù)處理腦缺血再灌注模型大鼠，可以下調(diào)皮質(zhì)、紋狀體炎性因子白介素1β（interleukin 1β，IL－1β）的表達(dá)，可能緩解腦缺血再灌注損傷。王軍等［19］通過測(cè)定血漿內(nèi)皮素（endothelin，ET）、IL－1β、白介素6（interleukin 6，IL－6）和腫瘤壞死因子α（tumor necrosis factor alpha，TNF－α）含量，發(fā)現(xiàn)循經(jīng)取穴電針能顯著降低大鼠腦缺血和再灌注血漿IL－1β、IL－6和TNF－α含量，與模型組、穴位對(duì)照組或非穴位對(duì)照組比較，差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義。實(shí)驗(yàn)提示腦缺血再灌注急性期可導(dǎo)致血漿IL－1β、IL－6和TNF－α含量升高，電針治療腦缺血再灌注損傷的機(jī)制之一與降低炎性細(xì)胞因子含量及阻斷炎癥級(jí)聯(lián)反應(yīng)有關(guān)。

8 拮抗氧自由基，減輕組織損傷

華金雙等［20－22］發(fā)現(xiàn)，艾灸預(yù)處理可通過增加超氧化物歧化酶（super oxide dismutase，SOD）活性、誘導(dǎo)腦缺血大鼠海馬CA1區(qū)熱休克70kDa蛋白（heat shock 70kDa protein，HSP70）及其mRNA的表達(dá)而保護(hù)缺血、低氧腦組織。其預(yù)防性腦保護(hù)作用可通過促進(jìn)HSP70蛋白及HSP70mRNA表達(dá)高峰提前而實(shí)現(xiàn)。艾灸預(yù)處理能夠較早地抑制腦水腫的進(jìn)程，對(duì)早期阻斷缺血性級(jí)聯(lián)反應(yīng)、減輕神經(jīng)細(xì)胞損害具有重要作用。孫忠人等［23］艾灸百會(huì)、大椎、后三里，觀察艾灸預(yù)處理對(duì)全腦缺血再灌注模型大鼠一氧化氮合酶活性的影響。腦缺血組、缺血預(yù)處理組、艾灸預(yù)處理組的誘導(dǎo)型一氧化氮合酶（inducible nitric oxide synthase，iNOS）和神經(jīng)細(xì)胞型一氧化氮合酶（neuronal nitric oxide synthase，nNOS）活性隨著缺血再灌注時(shí)間的延長(zhǎng)而逐漸增加，在24、48、72h這3個(gè)時(shí)點(diǎn)與正常組、假手術(shù)組比較，差異均具有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P＜0.01）；在腦缺血再灌注48、72h兩個(gè)時(shí)點(diǎn)，與腦缺血組相比，艾灸預(yù)處理組、缺血預(yù)處理組iNOS和nNOS活性均顯著降低（P＜0.01），但二者比較，差異無(wú)統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P＞0.05）。艾灸預(yù)處理具有同缺血預(yù)處理相當(dāng)?shù)膶?duì)腦缺血再灌注大鼠iNOS和nNOS活性的抑制能力，提示艾灸預(yù)處理可作為誘導(dǎo)腦缺血耐受的有效手段。

綜上所述，針灸可能是通過調(diào)控抗凋亡蛋白、血清皮質(zhì)酮含量和細(xì)胞內(nèi)信號(hào)轉(zhuǎn)導(dǎo)，改善腦代謝、突觸超微結(jié)構(gòu)和血液供應(yīng)，抑制炎性反應(yīng)，拮抗氧自由基等來促進(jìn)缺血性腦卒中后腦功能的恢復(fù)，誘導(dǎo)缺血耐受時(shí)機(jī)體的多種內(nèi)源性保護(hù)機(jī)制。針灸有望成為一種安全有效、能夠直接用于臨床的預(yù)處理手段，通過“治未病”的方式，預(yù)防缺血性腦血管疾病的發(fā)生，減輕缺血性腦損傷。但是目前的研究還有許多不足：①對(duì)于針刺預(yù)處理的研究還只停留在實(shí)驗(yàn)研究階段；②針刺選穴、針刺手法以及針刺介入的時(shí)機(jī)等缺少統(tǒng)一的標(biāo)準(zhǔn)；③針刺刺激手法比較單一，多采用電針刺激；④各種機(jī)制之間關(guān)系的研究較少。因此，今后應(yīng)該盡快在成熟的實(shí)驗(yàn)研究基礎(chǔ)上，制定統(tǒng)一、規(guī)范化的操作標(biāo)準(zhǔn)，積極開展針刺預(yù)處理的臨床研究。

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R743.3

A

10.3969／j.issn.2095－7246.2014.01.032

2013－05－13）

鄭仕平（1986－），男，碩士研究生