王士娜，王星，王翠芳

（沈陽(yáng)醫(yī)學(xué)院附屬中心醫(yī)院病理科，沈陽(yáng)110024）

甲狀腺微小乳頭狀癌的臨床病理特征及診斷標(biāo)志物的應(yīng)用

王士娜，王星，王翠芳

（沈陽(yáng)醫(yī)學(xué)院附屬中心醫(yī)院病理科，沈陽(yáng)110024）

Clinicalpathologic FeaturesofPapillary Thyroid Microcarcinoma and Application of Biomarkersin the Disease Diagnosis

應(yīng)用免疫組織化學(xué)方法檢測(cè)24例甲狀腺微小乳頭狀癌、30例甲狀腺良性病變中半乳糖凝集素3（Galectin-3）、細(xì)胞角蛋白19（CK19）、間皮細(xì)胞（MC）及甲狀腺過(guò)氧化物酶（TPO）的表達(dá)情況，探討甲狀腺微小乳頭狀癌的臨床病理特征。聯(lián)合應(yīng)用Galectin-3、CK19、MC及TPO對(duì)甲狀腺微小乳頭狀癌的診斷與鑒別診斷具有重要參考價(jià)值。

甲狀腺微小乳頭狀癌；半乳糖凝集素3；細(xì)胞角蛋白19；間皮細(xì)胞；甲狀腺過(guò)氧化物酶；免疫組織化學(xué)

甲狀腺乳頭狀癌是本世紀(jì)全球范圍內(nèi)發(fā)病率增長(zhǎng)最快的實(shí)體惡性腫瘤［1］，其發(fā)病率占甲狀腺癌的60%～70%，且大小變異很大，通常根據(jù)腫瘤的大小和浸潤(rùn)范圍可將甲狀腺乳頭狀癌分為隱性癌、甲狀腺內(nèi)及甲狀腺外3種類(lèi)型。其中隱性癌亦稱(chēng)甲狀腺微小乳頭狀癌或隱性硬化性癌，直徑小于1 cm，平均5～7 mm。常在因與甲狀腺乳頭狀癌無(wú)關(guān)的疾病而行甲狀腺手術(shù)切除的標(biāo)本中檢出［2］。近年來(lái)，甲狀腺微小乳頭狀癌的發(fā)病率有增高趨勢(shì)。但由于其表現(xiàn)形式多樣，除可表現(xiàn)為經(jīng)典甲狀腺乳頭狀癌的核特征以及乳頭狀生長(zhǎng)方式外，多數(shù)病例也可無(wú)典型甲狀腺乳頭狀癌的特征。因此對(duì)那些形態(tài)學(xué)特征不很典型的甲狀腺微小乳頭狀癌，在作出臨床病理診斷前需要借助一些輔助性手段進(jìn)行鑒別，以避免不必要的誤診。

本實(shí)驗(yàn)通過(guò)聯(lián)合檢測(cè)半乳糖凝集素3（Galectin-3）、細(xì)胞角蛋白19（cytokeratin 19，CK19）、間皮細(xì)胞（mesothelial cell，MC）及甲狀腺過(guò)氧化物酶（thyroid peroxidase，TPO）在甲狀腺微小乳頭狀癌及甲狀腺良性病變中的表達(dá)情況，分析其在甲狀腺微小乳頭狀癌鑒別診斷中的意義。

1 材料與方法

1.1 臨床病理資料

按照病理診斷標(biāo)準(zhǔn)選取本院2007至2013年診斷為甲狀腺微小乳頭狀癌的病理標(biāo)本24例，瘤組織直徑0.1～0.8 cm；其中男1例，女16例；年齡25～73歲，平均50歲。同時(shí)選取甲狀腺良性病變標(biāo)本30例，其中結(jié)節(jié)性甲狀腺腫25例，甲狀腺腺瘤5例。標(biāo)本均經(jīng)10%甲醛固定，石蠟包埋。連續(xù)切片，切片厚4～5 μm，常規(guī)HE染色。

1.2 免疫組織化學(xué)染色及結(jié)果判定

免疫組化采用SP法，按說(shuō)明書(shū)步驟進(jìn)行操作，所用Galectin-3、CK19、MC及TPO鼠抗人單克隆抗體、SP試劑盒及AEC顯色劑均購(gòu)自福州邁新生物技術(shù)有限公司，用診斷明確的甲狀腺乳頭狀癌作為陽(yáng)性對(duì)照，用PBS緩沖液代替一抗作為陰性對(duì)照。其中Galectin-3的陽(yáng)性部位為細(xì)胞質(zhì)或細(xì)胞核，CK19的陽(yáng)性部位主要為細(xì)胞膜及細(xì)胞質(zhì)，MC的陽(yáng)性部位為細(xì)胞膜，TPO的陽(yáng)性部位為細(xì)胞質(zhì)。結(jié)果判斷采用陽(yáng)性細(xì)胞半定量法［3］：先根據(jù)陽(yáng)性細(xì)胞個(gè)數(shù)占整個(gè)腫瘤細(xì)胞的百分率計(jì)分，＜5%為0分，5%～25%為1分，26%～50%為2分，51%～75%為3分，＞75%為4分；再根據(jù)陽(yáng)性細(xì)胞染色強(qiáng)度計(jì)分，不著色為0分，淡棕黃色為1分，棕黃色為2分，深黃色為3分；最后將兩者分?jǐn)?shù)相加，≤2分為陰性，＞2分為陽(yáng)性。

1.3 統(tǒng)計(jì)學(xué)分析

抗體診斷指標(biāo)按下列公式計(jì)算：敏感性（%）=真陽(yáng)性/（真陽(yáng)性+假陰性）×100，特異性（%）=真陰性/（真陰性+假陽(yáng)性）×100。數(shù)據(jù)處理采用SPSS 13.0統(tǒng)計(jì)分析軟件，甲狀腺微小乳頭狀癌與良性病變中各種分子標(biāo)志物表達(dá)陽(yáng)性率的比較采用χ2檢驗(yàn)，P＜0.05為差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義。

2 結(jié)果

2.1 甲狀腺微小乳頭狀癌的臨床及組織學(xué)特征

本研究選用的24例標(biāo)本均為結(jié)節(jié)性甲狀腺腫手術(shù)伴發(fā)病例，根據(jù)性別及年齡分布情況可以看出，本腫瘤好發(fā)于中老年女性。組織學(xué)上6例不具有甲狀腺乳頭狀癌的特征性核，而表現(xiàn)為增大的核，呈不規(guī)則腺樣或條索樣在纖維化或硬化性間質(zhì)內(nèi)浸潤(rùn)性生長(zhǎng)（如圖1A），其余18例則以乳頭狀或腺樣結(jié)構(gòu)生長(zhǎng)，伴有毛玻璃樣核、核溝或核內(nèi)包涵體形成，有或無(wú)間質(zhì)的硬化，但都存在間質(zhì)的纖維化改變（如圖1B）。

圖1 甲狀腺微小乳頭狀癌的形態(tài)學(xué)特點(diǎn)HE×200

2.2 Galectin-3、CK19、MC、TPO在甲狀腺微小乳頭狀癌中的表達(dá)情況

在本研究的甲狀腺病變中，甲狀腺微小乳頭狀癌與甲狀腺良性病變比較Galectin-3、CK19、MC和TPO表達(dá)的差異均有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（均P＜0.01）。見(jiàn)表1。

表1 Galectin?3、CK19、MC和TPO在甲狀腺微小乳頭狀癌與甲狀腺良性病變中的表達(dá)情況

2.2.1 Galectin-3的表達(dá)情況：Galectin-3在甲狀腺微小乳頭狀癌中多為彌漫性中重度強(qiáng)陽(yáng)性表達(dá)（++～+++，圖2A），僅少數(shù)病例有弱陽(yáng)性（+），3例為陰性表達(dá)（-）；在甲狀腺良性病變中幾乎都是陰性，僅1例呈輕微陽(yáng)性著色；Galectin-3診斷的敏感性為87.50%，特異性為96.67%。

2.2.2 CK19的表達(dá)情況：CK19在甲狀腺微小乳頭狀癌中有17例呈中重度強(qiáng)陽(yáng)性表達(dá)（圖2B），少數(shù)為弱陽(yáng)性，2例為陰性；在甲狀腺良性病變中，僅有2例呈弱陽(yáng)性而大多數(shù)呈陰性；CK19診斷的敏感性為91.67%，特異性為93.33%。

2.2.3 MC的表達(dá)情況：在甲狀腺微小乳頭狀癌中，MC為中重度強(qiáng)陽(yáng)性表達(dá)（圖2C），有7例為弱陽(yáng)性表達(dá)，少數(shù)呈陰性；而在甲狀腺良性病變中多為陰性或弱陽(yáng)性表達(dá)，僅2例呈中等強(qiáng)度表達(dá)；MC診斷的敏感性為79.17%，特異性為80.00%。

2.2.4 TPO的表達(dá)情況：在本研究的24例甲狀腺微小乳頭狀癌中，TPO均呈陰性（圖2D）；而在30例甲狀腺良性病變中呈中重度強(qiáng)陽(yáng)性表達(dá)；TPO診斷的敏感性及特異性均為100%。

2.3 甲狀腺病變中Galectin-3、CK19、MC的共同表達(dá)及伴T(mén)PO表達(dá)檢測(cè)

24例甲狀腺微小乳頭狀癌中有19例同時(shí)表達(dá)Galectin-3、CK19、MC，陽(yáng)性表達(dá)率為79.17%，而這19例中均未檢測(cè)到TPO的表達(dá)；在30例甲狀腺良性病變中，僅1例3種標(biāo)志物同時(shí)呈弱陽(yáng)性表達(dá)，24例均呈陰性表達(dá)，2組相比TPO與其他3種標(biāo)志物在甲狀腺良惡性病變中表達(dá)的差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（χ2=32.880，P＜0.05）。

3 討論

甲狀腺癌是最常見(jiàn)的內(nèi)分泌惡性腫瘤，其中甲狀腺乳頭狀癌是最常見(jiàn)的病理類(lèi)型［4］。近年來(lái)隨著健康體檢工作的廣泛開(kāi)展，作為甲狀腺乳頭狀癌常見(jiàn)亞型的甲狀腺微小乳頭狀癌的檢出率逐漸提高。在實(shí)際工作中，具有明顯或純?nèi)轭^狀結(jié)構(gòu)的微小癌較少見(jiàn)，有些即使具有典型癌性乳頭狀結(jié)構(gòu)的良性病變中，也易因缺乏典型的甲狀腺乳頭狀癌的核特征而出現(xiàn)鑒別的困擾。所以免疫組織化學(xué)方法對(duì)甲狀腺微小乳頭狀癌的鑒別診斷有很重要價(jià)值。

圖2 Galectin?3、CK19、MC、TPO在甲狀腺微小乳頭狀癌中的表達(dá)×100

Galectin-3是半乳糖凝集素家族β-半乳糖苷結(jié)合蛋白，參與細(xì)胞生長(zhǎng)和凋亡、細(xì)胞黏附、新生血管形成和腫瘤浸潤(rùn)與轉(zhuǎn)移等，并在腫瘤的發(fā)生、發(fā)展及轉(zhuǎn)移中起重要作用［5］。研究發(fā)現(xiàn)，Galectin-3在甲狀腺腫瘤的鑒別中具有很高診斷價(jià)值。陳云新等［6］的研究顯示，10例甲狀腺微小乳頭狀癌中9例Galectin-3呈中重度陽(yáng)性著色，在結(jié)節(jié)性甲狀腺腫中多為陰性或弱表達(dá)，我們的研究結(jié)果與陳云新等的結(jié)果基本一致。細(xì)胞角蛋白是細(xì)胞骨架中間絲的一種，是上皮細(xì)胞特征性的標(biāo)志物，目前已發(fā)現(xiàn)22種亞型，以CK1～CK22命名，且不同亞型的細(xì)胞角蛋白存在于不同類(lèi)型的細(xì)胞中。正常情況下CK19主要分布于腸、胰腺導(dǎo)管及膽管等的上皮細(xì)胞中，而越來(lái)越多的研究表明CK19在甲狀腺乳頭狀癌中呈彌漫一致的強(qiáng)陽(yáng)性表達(dá)，而在良性甲狀腺病變中表達(dá)弱或呈陰性［7］。陳云新等［6］的研究提示，10例甲狀腺微小乳頭狀癌CK19均呈中重度陽(yáng)性著色，在結(jié)節(jié)性甲狀腺腫中主要為輕度陽(yáng)性著色。本研究顯示，在甲狀腺微小乳頭狀癌中22例CK19為陽(yáng)性表達(dá)，且14例為彌漫陽(yáng)性表達(dá)，而在甲狀腺良性病變中28例為陰性表達(dá)，2例為弱陽(yáng)性表達(dá)，與陳云新等［6］的結(jié)果一致。MC為間皮細(xì)胞微絨毛表面特異性標(biāo)志物，在腫瘤血管的形成、腫瘤的生長(zhǎng)及轉(zhuǎn)移中發(fā)揮重要作用。Nechifor等［8］的研究則表明，在甲狀腺乳頭狀癌中MC的陽(yáng)性表達(dá)率為63.6%，部分良性濾泡性病變也有MC陽(yáng)性表達(dá)。本研究中甲狀腺微小乳頭狀癌MC的陽(yáng)性率為79.17%，甲狀腺良性病變中MC的陽(yáng)性率為22.58%，7例為陽(yáng)性表達(dá)，3例為中度陽(yáng)性，4例為弱陽(yáng)性，與已有報(bào)道接近。TPO是甲狀腺激素合成過(guò)程中的特異性酶，其存在于正常甲狀腺濾泡上皮細(xì)胞頂緣細(xì)胞膜表面，可以催化碘離子與甲狀腺球蛋白酪氨酸殘基的加成反應(yīng)，以此合成甲狀腺素或三碘甲狀腺原氨酸等甲狀腺激素。它反映了正常甲狀腺的功能，因此在甲狀腺惡性病變中不表達(dá)。楊清緒等［9］的研究顯示，TPO在良性甲狀腺病變中的表達(dá)率為100%，在甲狀腺癌中極少表達(dá)或小灶性表達(dá)，表達(dá)率為3.2%，而其中的甲狀腺乳頭狀癌均呈陰性表達(dá)，僅2例甲狀腺濾泡癌呈陽(yáng)性。在本研究中，所選的24例甲狀腺微小乳頭狀癌均呈TPO陰性，而30例甲狀腺良性病變中TPO陽(yáng)性表達(dá)率為100%。

綜上，Galectin-3、CK19、MC和TPO的單項(xiàng)檢測(cè)在甲狀腺微小乳頭狀癌及甲狀腺良性病變的鑒別診斷都具有一定的作用。但本研究也顯示，MC在甲狀腺良性病變中也有弱至中等強(qiáng)度表達(dá)，因而特異性不高，故單獨(dú)使用時(shí)的鑒別意義較小。此外，雖然本研究顯示TPO在甲狀腺微小乳頭狀癌中的敏感性與特異性均為100%，但不排除是所選樣本的局限性導(dǎo)致這種情況。因?yàn)橐延形墨I(xiàn)報(bào)道［13］甲狀腺乳頭狀癌中也存在著TPO的表達(dá)，說(shuō)明任何指標(biāo)的單獨(dú)使用都有一定的局限性，不能作為甲狀腺微小乳頭狀癌的診斷標(biāo)準(zhǔn)。所以，建議上述4種抗體聯(lián)合應(yīng)用，取長(zhǎng)補(bǔ)短，對(duì)于提高甲狀腺微小乳頭狀癌診斷的準(zhǔn)確性具有重要價(jià)值。

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（編輯 陳姜）

R736.1

B

0258-4646（2014）11-1051-03

王士娜（1979-），女，主治醫(yī)師，碩士.

王翠芳，E-mail：sywcf321@sohu.com

2014-06-13

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