，，，，

(青島大學(xué)附屬醫(yī)院婦產(chǎn)科，山東 青島 266003)

目前卵巢上皮癌主要以手術(shù)和化療為主要治療手段。其化療失敗的最主要原因之一是耐藥性的產(chǎn)生，因此，提高腫瘤對(duì)化療藥物的敏感性對(duì)改善病人預(yù)后意義重大。細(xì)胞分化抑制因子1(Id1)是螺旋-環(huán)-螺旋(HLH)蛋白質(zhì)家族的一員，其二聚體可抑制腫瘤細(xì)胞凋亡，促進(jìn)增生，在腫瘤發(fā)生發(fā)展過(guò)程中發(fā)揮重要作用[1]。近期研究顯示,Id1在內(nèi)皮細(xì)胞腫瘤組織中存在過(guò)表達(dá)的現(xiàn)象[2]。哺乳動(dòng)物的絲氨酸蛋白酶家族由同源性的不同結(jié)構(gòu)域的絲氨酸蛋白酶類(lèi)組成。HtrA1是第一個(gè)被發(fā)現(xiàn)的人類(lèi)絲氨酸蛋白酶家族成員,對(duì)惡性組織具有抑制作用，與惡性腫瘤的演進(jìn)相關(guān)[3]。本研究采用免疫組織化學(xué)方法檢測(cè)Id1和HtrA1在卵巢上皮癌組織中的表達(dá)，分析其與臨床病理參數(shù)的關(guān)系，探討這兩種因子與卵巢上皮癌發(fā)生發(fā)展及化療耐藥的關(guān)系。

1 資料與方法

1.1 標(biāo)本來(lái)源

收集我院婦科2008年1月—2010年12月住院手術(shù)病例，其中卵巢上皮癌病人40例(均行腫瘤細(xì)胞減滅術(shù)，術(shù)后病理確診為卵巢漿液性腺癌),良性卵巢腫瘤病人10例(術(shù)后病理確診為卵巢漿液性囊腺瘤)及正常卵巢組織病人10例(因子宮肌瘤行全子宮加雙附件切除術(shù)病人，卵巢組織無(wú)異常)。卵巢上皮癌病人年齡27～77歲，平均年齡50.90歲，中位年齡51.50歲，其中≥50歲30例，<50歲10例；腫瘤直徑≥5 cm者23例，<5 cm者17例；術(shù)前CA125水平≥200 kU/L者32例，<200 kU/L者8例；術(shù)前有大量腹水者33例,無(wú)或少量腹水者7例；高、中分化15例，低分化25例；按FIGO(2000年)卵巢癌分期標(biāo)準(zhǔn)，Ⅰ～Ⅱ期17例，Ⅲ～Ⅳ期23例；淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移陽(yáng)性30例，淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移陰性10例?；熀筮_(dá)到臨床完全緩解(CR)，持續(xù)>6個(gè)月者20例(敏感組)；化療后達(dá)到CR，持續(xù)<6個(gè)月，或化療期間最好療效為部分緩解、疾病穩(wěn)定或疾病進(jìn)展者20例(耐藥組)。

1.2 Id1和HtrA1檢測(cè)方法

采用免疫組化SP法檢測(cè)標(biāo)本中Id1和HtrA1的表達(dá)。Id1單抗購(gòu)自北京博奧森生物技術(shù)有限公司，HtrA1單抗為美國(guó)Santa Cruz公司產(chǎn)品，SP試劑盒和DNA顯色試劑盒均購(gòu)自北京中杉金橋生物技術(shù)有限公司。標(biāo)本以3 μm厚切片，按照試劑盒說(shuō)明書(shū)操作。以二者已知陽(yáng)性切片作為陽(yáng)性對(duì)照，以磷酸鹽緩沖液(PBS)代替一抗作陰性對(duì)照。

1.3 結(jié)果判定

Id1大部分在胞核、部分在胞漿著色，HtrA1在胞漿著色。隨機(jī)選擇5個(gè)高倍視野，計(jì)數(shù)腫瘤細(xì)胞100個(gè)以上，根據(jù)陽(yáng)性細(xì)胞數(shù)及染色強(qiáng)度判斷結(jié)果。以陽(yáng)性細(xì)胞數(shù)<5%，計(jì)0分；5%～25%，計(jì)1分；26%～50%，計(jì)2分；51%～75%，計(jì)3分；>75%，計(jì)4分。染色強(qiáng)度不著色為0分，淺棕色為1分，棕黃色為2分，棕褐色為3分。將每張切片兩項(xiàng)分?jǐn)?shù)相加，0分為陰性(-)，1～2分為弱陽(yáng)性(+)，3～4分為中陽(yáng)性()，5～6分為強(qiáng)陽(yáng)性()。

1.4 統(tǒng)計(jì)學(xué)處理

采用SPSS 17.0統(tǒng)計(jì)軟件對(duì)數(shù)據(jù)進(jìn)行χ2檢驗(yàn)和Spearman相關(guān)分析，檢驗(yàn)水準(zhǔn)α=0.05。

2 結(jié) 果

2.1 Id1和HtrA1在正常卵巢、卵巢良性腫瘤和卵巢上皮癌組織中的表達(dá)

卵巢上皮癌組織中Id1陽(yáng)性表達(dá)率為77.5%，均顯著高于卵巢良性腫瘤組織的40.0%和正常卵巢組織的30.0%(χ2=5.357、8.295，P<0.05)。卵巢上皮癌組織中HtrA1的陽(yáng)性表達(dá)率為22.5%，均顯著低于卵巢良性腫瘤組織的40.0%和正常卵巢組織的60.0%(χ2=4.372、5.357，P<0.05)。

2.2 化療耐藥組及敏感組Id1和HtrA1表達(dá)比較

Id1在耐藥組中的陽(yáng)性表達(dá)率為95.0%，顯著高于敏感組的60.0%(χ2=5.914，P<0.05)；HtrA1在耐藥組的陽(yáng)性表達(dá)率為5.0%,顯著低于敏感組的40.0%(χ2=14.824,P<0.01)。

2.3 Id1和HtrA1表達(dá)與卵巢上皮癌臨床病理特征的關(guān)系

Id1和HtrA1的表達(dá)與病人年齡、腫瘤大小、臨床分期和有無(wú)腹水等均無(wú)關(guān)(P>0.05)，而與術(shù)前CA125水平、病理分級(jí)和淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移等有關(guān)(χ2=4.215～10.753，P<0.05)。見(jiàn)表1。

表1 Id1和HtrA1表達(dá)與卵巢上皮癌臨床病理特征的關(guān)系(例(χ/%))

2.4 卵巢上皮癌組織Id1和HtrA1表達(dá)相關(guān)性

在40例卵巢上皮癌組織中，Id1和HtrA1表達(dá)均陽(yáng)性者12例，均陰性者6例，兩者表達(dá)無(wú)明顯相關(guān)性(r=-0.186，P>0.05)。

3 討 論

3.1 Id1與卵巢上皮癌的關(guān)系

Id1中的HLH結(jié)構(gòu)區(qū)域能夠與bHLH蛋白結(jié)合，起到抑制細(xì)胞分化、調(diào)節(jié)細(xì)胞周期的作用，其分子作用機(jī)制復(fù)雜多樣。表皮生長(zhǎng)因子受體(EGFR)為酪氨酸激酶Ⅰ家族成員。該受體能與胞漿中過(guò)度表達(dá)的表皮生長(zhǎng)因子結(jié)合，使其受體酪氨酸殘基磷酸化，通過(guò)胞漿信號(hào)通路，促進(jìn)細(xì)胞分化、血管增生，抑制細(xì)胞凋亡。有研究結(jié)果表明，Id1過(guò)表達(dá)促進(jìn)EGFR表達(dá)上調(diào)，兩者呈正相關(guān)[4]。周慶全等[5]研究結(jié)果顯示，在胃癌組織中Id1與EGFR呈現(xiàn)高表達(dá)，并且這兩種因子呈正相關(guān)。誘導(dǎo)細(xì)胞凋亡是化療藥物抑制腫瘤生長(zhǎng)的重要途徑之一，抑制細(xì)胞凋亡的Bcl-2、Rb、P53表達(dá)異常與腫瘤細(xì)胞耐藥密切相關(guān)。LING等[6]報(bào)道，用Id1-siRNA降低Id1蛋白表達(dá)水平后Bcl-2、JNK表達(dá)明顯降低，細(xì)胞對(duì)紫杉醇耐藥性降低，表明Id1是調(diào)節(jié)腫瘤細(xì)胞耐藥的一個(gè)重要靶點(diǎn)。

本文研究結(jié)果顯示，Id1在卵巢上皮癌組織中呈高表達(dá)，且腫瘤細(xì)胞分化程度越低，Id1的陽(yáng)性表達(dá)率越高，與MAW等[7]的研究結(jié)果相一致。渠力平等[8]的研究顯示，Id1在宮頸癌組織中高表達(dá)，并且與宮頸癌組織分化程度呈正相關(guān)。本文研究結(jié)果也顯示，Id1表達(dá)與病人術(shù)前CA125水平、淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移和病理分級(jí)等密切相關(guān)，而與病人年齡、臨床分期、腫瘤大小和有無(wú)腹水等無(wú)關(guān)，且在化療耐藥組中Id1的陽(yáng)性表達(dá)率高于敏感組。表明Id1的表達(dá)可能與卵巢上皮癌的發(fā)生、發(fā)展有關(guān)，與卵巢上皮癌細(xì)胞化療耐藥相關(guān)。

3.2 HtrA1與卵巢上皮癌的關(guān)系

HtrA1為一種具有熱休克蛋白性質(zhì)的膜絲氨酸蛋白酶，體內(nèi)和體外試驗(yàn)研究顯示，該因子與腫瘤細(xì)胞的凋亡、侵襲等有關(guān)，但其分子作用機(jī)制不詳。HE等[9]報(bào)道，HtrA1表達(dá)下調(diào)可促進(jìn)EGFR表達(dá)，兩者呈負(fù)相關(guān)，但具體通路不明。CHIEN等[10]報(bào)道，HtrA1與紫杉醇、順鉑誘導(dǎo)的細(xì)胞凋亡有關(guān)，該因子在應(yīng)激條件下，通過(guò)N端Kazal抑制區(qū)域分離后活化，引起Caspase激活促進(jìn)細(xì)胞凋亡，增強(qiáng)對(duì)化療藥物的敏感性。HtrA1可以作為臨床化療反應(yīng)的預(yù)測(cè)指標(biāo)。

本文研究結(jié)果顯示，HtrA1在卵巢上皮癌組織中呈低表達(dá)，且腫瘤細(xì)胞分化程度越低，HtrA1的陽(yáng)性表達(dá)率越低，與BOWDEN等[11]的研究結(jié)果相一致。同時(shí)，HtrA1陽(yáng)性表達(dá)與術(shù)前CA125水平、淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移和病理分級(jí)等密切相關(guān)，術(shù)前CA125水平較高者、有淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移者、腫瘤細(xì)胞分化程度低者HtrA1的陽(yáng)性表達(dá)率低，而與病人年齡、臨床分期、腫瘤大小和有無(wú)腹水等無(wú)關(guān)，這表明HtrA1可能與卵巢上皮癌的發(fā)生、進(jìn)展有關(guān)。在化療耐藥組中HtrA1的陽(yáng)性表達(dá)率低于敏感組，推測(cè)HtrA1可能是卵巢上皮癌耐藥的重要因素之一。

3.3 Id1和HtrA1的關(guān)系

轉(zhuǎn)化生長(zhǎng)因子β(TGF-β)是一種多功能的多肽類(lèi)細(xì)胞因子，通過(guò)細(xì)胞表面的受體信號(hào)轉(zhuǎn)導(dǎo)途徑參與細(xì)胞的分化、增殖。STRONG等[12]研究表明，在PZ-HPV7、DU145細(xì)胞中TGF-β能增加Id1的表達(dá)，提示Id1與TGF-β的表達(dá)有相關(guān)性。HtrA1通過(guò)自身結(jié)構(gòu)中的功能區(qū)域與TGF-β1結(jié)合并抑制其作用。另有研究結(jié)果表明，Id1過(guò)表達(dá)促進(jìn)EGFR表達(dá)上調(diào)，兩者呈正相關(guān)[4]。HE等[9]報(bào)道，HtrA1表達(dá)下調(diào)可促進(jìn)EGFR表達(dá)，兩者呈負(fù)相關(guān)。因此推測(cè)Id1和HtrA1可能通過(guò)共同通路，相互作用，共同參與卵巢癌的發(fā)生、發(fā)展及耐藥。雖然本研究?jī)煞N因子在蛋白水平上無(wú)明顯相關(guān)性，但在分子水平上有待于進(jìn)一步研究證實(shí)。

綜上所述，Id1和HtrA1的表達(dá)與卵巢上皮癌發(fā)生、發(fā)展及其耐藥性相關(guān)，可作為卵巢上皮癌耐藥的參考指標(biāo)，預(yù)測(cè)病人的化療敏感性。

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