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      象草和雜交狼尾草細(xì)胞壁組分及乙醇理論產(chǎn)量動(dòng)態(tài)分析

      2014-03-26 08:38:18吳娟子張建麗潘玉梅劉智微鐘小仙
      草業(yè)學(xué)報(bào) 2014年4期
      關(guān)鍵詞:移苗狼尾草纖維素

      吳娟子,張建麗,潘玉梅,劉智微,鐘小仙

      (江蘇省農(nóng)業(yè)科學(xué)院畜牧所,江蘇 南京210014)

      能源短缺是當(dāng)前人類面臨的重大挑戰(zhàn)。生物質(zhì)能是僅次于石油、煤炭和天然氣而位居世界第4位的能源,越來(lái)越受到世界各國(guó)的高度關(guān)注[1]。眾所周知,木質(zhì)纖維素類生物質(zhì)是地球上來(lái)源廣泛、可再生和環(huán)境友好的最豐富的生物質(zhì)資源,這些生物質(zhì)資源可通過(guò)化學(xué)或生物轉(zhuǎn)化等方法制造替代石油的燃料,如乙醇[2]。2007年國(guó)家《可再生能源中長(zhǎng)期發(fā)展規(guī)劃》明確提出:“從長(zhǎng)遠(yuǎn)考慮,要積極發(fā)展以木質(zhì)纖維素生物質(zhì)為原料的生物液體燃料技術(shù)”。

      象草(Pennisetumpurpureum,elephantgrass,PP)是熱帶和亞熱帶地區(qū)廣泛栽培的優(yōu)質(zhì)、高產(chǎn)、多用途牧草[3-6]。蘇牧2號(hào)象草(P.purpureumcv.Sumu No.2)是由江蘇省農(nóng)業(yè)科學(xué)院自主選育的耐鹽牧草新品種,2010年通過(guò)全國(guó)草品種審定委員會(huì)審定,適合各種類型的土壤種植,在中高鹽度海涂地生長(zhǎng)顯著優(yōu)于其他牧草,非鹽堿地種植草產(chǎn)量更高[7-9]。雜交狼尾草(P.americanum×P.purpureum,hybridPennisetum,HP)是母本美洲狼尾草(P.americanum)不育系Tift23A與父本象草N51遠(yuǎn)緣雜交獲得的三倍體雜交種,綜合了母本品質(zhì)優(yōu)、父本生態(tài)適應(yīng)性廣、產(chǎn)量高的特點(diǎn),并具有明顯的雜種優(yōu)勢(shì),干物質(zhì)產(chǎn)量比象草可提高20%~50%,1989年通過(guò)全國(guó)草品種審定委員會(huì)審定[10]。國(guó)內(nèi)外的研究表明,象草和雜交狼尾草不僅可作為草食畜禽的優(yōu)質(zhì)青飼料、理想的水土保持作物、優(yōu)質(zhì)紙漿和綠色環(huán)保型復(fù)合人造板原料,還是理想的木質(zhì)纖維素類能源作物[3-6,11-12]。象草單位面積的生物量是能源作物甘蔗(Saccharumsinensis)和柳枝稷(Panicumvirgatum)的2倍,由于其成本更加低廉,歐美等國(guó)正在加強(qiáng)象草生物質(zhì)能源的開(kāi)發(fā)利用研究[11-12]。

      木質(zhì)纖維類生物質(zhì)主要由纖維素、半纖維素和木質(zhì)素三大部分組成,構(gòu)成了植物的細(xì)胞壁。纖維素和半纖維素是多糖,在酶的作用下可以水解生成單糖,然后由發(fā)酵平臺(tái)轉(zhuǎn)化為乙醇或其他高附加值化工產(chǎn)品[13];而木質(zhì)素能夠抵抗自然界多數(shù)微生物的有效降解,目前工業(yè)上幾乎不能降解利用木質(zhì)素,它對(duì)纖維素酶和半纖維素酶存在空間阻礙作用,而且木質(zhì)素的存在還會(huì)對(duì)纖維素酶水解的活性產(chǎn)生致鈍作用,抑制纖維素和半纖維素的降解[14]。研究表明提高原料中纖維素、半纖維素含量、降低木質(zhì)素含量可顯著提高木質(zhì)纖維素的乙醇轉(zhuǎn)化效率[15]。不同的木質(zhì)纖維素類生物質(zhì)原料,在不同發(fā)育時(shí)期其所含的纖維素、半纖維素和木質(zhì)素均有一定差異,這導(dǎo)致其乙醇產(chǎn)量的不同。研究者往往通過(guò)比較分析植物細(xì)胞壁組分來(lái)預(yù)測(cè)、比較其木質(zhì)纖維素乙醇生產(chǎn)潛力[15-17]。

      本試驗(yàn)以蘇牧2號(hào)象草和雜交狼尾草為材料,探討了兩品種不同生長(zhǎng)時(shí)期莖和葉中纖維素(cellulose,CEL)、半纖維素(hemicellulose,HMC)和酸性木質(zhì)素(acid detergent lignin,ADL)含量和總量以及來(lái)源于木質(zhì)纖維素的乙醇理論產(chǎn)量隨生長(zhǎng)變化的規(guī)律,旨在為國(guó)審品種蘇牧2號(hào)象草和雜交狼尾草作為生物質(zhì)能源的評(píng)價(jià)及開(kāi)發(fā)利用提供基礎(chǔ)資料。

      1 材料與方法

      1.1 供試材料

      蘇牧2號(hào)象草和雜交狼尾草由江蘇省農(nóng)業(yè)科學(xué)院畜牧研究所提供。

      1.2 試驗(yàn)地概況和設(shè)計(jì)

      試驗(yàn)地位于江蘇省農(nóng)業(yè)科學(xué)院內(nèi),地處北緯32°32′、東經(jīng)118°48′,年均溫15℃,最高溫度39℃,最低溫度-12℃,年降水量1000mm左右,無(wú)霜期220~240d。供試土壤屬粘性馬肝土,肥力中等,整個(gè)試驗(yàn)地肥力均勻。前一年秋季收割后在大棚內(nèi)越冬的象草和雜交狼尾草于2011年5月11日分株移栽,小區(qū)面積8m2,每小區(qū)種植36株,行距40cm,株距50cm,每小區(qū)間隔80cm,隨機(jī)區(qū)組排列,每一品種重復(fù)種植5個(gè)小區(qū)。

      1.3 采樣及樣品處理

      分別于2011年8月2日(移栽后83d)、9月2日(移栽后114d)和10月31日(移栽后173d)隨機(jī)選取小區(qū)刈割,所取樣品均為第1次刈割,刈割留茬高度為10~15cm。植株葉片和莖稈(含葉鞘)分離后,105℃殺青30 min,70℃烘干至恒重,稱量。

      1.4 測(cè)定項(xiàng)目和方法

      將各器官烘干稱重,計(jì)算葉莖比。烘干的莖和葉分別粉碎,過(guò)80目篩(篩孔尺寸0.18mm),冷卻后于密封袋中保存,待進(jìn)一步分析。CEL(cellulose,纖維素)、HMC(hemicellulose,半纖維素)和 ADL(acid detergent lignin,酸性木質(zhì)素)采用范氏洗滌纖維法測(cè)定[18]。

      1.5 生物量計(jì)算

      木質(zhì)纖維素乙醇產(chǎn)量(L/hm2)=(CEL+HMC)%×1.11(CEL和 HMC轉(zhuǎn)化為糖的轉(zhuǎn)換因子)×0.85(CEL和HMC轉(zhuǎn)化為糖的過(guò)程效率)×0.51(糖轉(zhuǎn)化為乙醇的轉(zhuǎn)換因子)×0.85(糖轉(zhuǎn)化為乙醇的過(guò)程效率)×1000/0.79(乙醇比重g/mL)[19]。

      1.6 數(shù)據(jù)處理

      對(duì)3個(gè)不同生長(zhǎng)階段兩品種間的差異顯著性,運(yùn)用SPSS 16.0軟件中的雙因素方差分析(two-way ANOVA),選擇S-N-K均數(shù)比較法(Student-Newman-Keuls’means test),分別在P=0.05和P=0.01水平上進(jìn)行多重比較分析。

      2 結(jié)果與分析

      2.1 兩供試品種葉和莖中CEL含量隨生長(zhǎng)天數(shù)的變化

      移苗后83d,蘇牧2號(hào)象草葉中CEL含量顯著高于雜交狼尾草(P<0.01),二者分別為51.23%和43.46%;兩品種莖中CEL含量分別為44.10%和41.94%,無(wú)顯著差異。移苗后114d,蘇牧2號(hào)象草無(wú)明顯變化,雜交狼尾草葉中CEL含量顯著增加至56.67%(P<0.01);兩品種莖中CEL含量均顯著降低(P<0.01)。與移苗后114d相比,移苗后173d兩品種葉中CEL含量均顯著降低(P<0.01),莖中CEL含量無(wú)明顯變化。總體上,不同生長(zhǎng)階段兩品種葉中CEL含量明顯高于莖;隨著生長(zhǎng)時(shí)間的延長(zhǎng),兩品種莖、葉中CEL含量逐漸減少,早期(移苗后83d)蘇牧2號(hào)象草葉中CEL含量顯著高于雜交狼尾草(P<0.01),二者莖組織CEL含量無(wú)顯著差異,但從移苗后114d起,蘇牧2號(hào)象草莖(P<0.05)和葉(P<0.01)中CEL含量均顯著低于雜交狼尾草(表1,表2)。

      表1 象草和雜交狼尾草不同生長(zhǎng)階段葉中CEL含量Table 1 The CEL content of leaves at different growth stages in EG and HP %DM

      表2 象草和雜交狼尾草不同生長(zhǎng)階段莖中CEL含量Table 2 The CEL content of stems at different growth stages in EG and HP %DM

      2.2 兩供試品種葉和莖中HMC含量隨生長(zhǎng)天數(shù)的變化

      移苗后83d,蘇牧2號(hào)象草葉中HMC含量顯著高于雜交狼尾草(P<0.01),二者莖組織HMC含量無(wú)顯著差異。移苗后114d,兩品種葉中HMC含量均顯著降低(P<0.01),莖中HMC含量均顯著增加(P<0.01)。移苗后173d,與移苗后114d相比,兩品種葉中HMC含量均顯著增加(P<0.01),蘇牧2號(hào)象草莖中HMC含量顯著增加(P<0.01),而雜交狼尾草顯著降低(P<0.01)??傮w上,不同生長(zhǎng)階段,兩品種葉中HMC含量明顯低于莖,蘇牧2號(hào)象草葉中HMC含量均顯著高于雜交狼尾草(P<0.01);隨著生長(zhǎng)時(shí)間的延長(zhǎng),兩品種莖中HMC含量呈增加趨勢(shì),移苗后114和173d時(shí)蘇牧2號(hào)象草莖中HMC含量均顯著高于雜交狼尾草(P<0.01)(表3,表4)。

      2.3 兩供試品種葉和莖中ADL含量隨生長(zhǎng)天數(shù)的變化

      移苗后83d,蘇牧2號(hào)象草葉中ADL含量顯著低于雜交狼尾草(P<0.01),二者莖組織ADL含量無(wú)顯著差異。移苗后114d,兩品種葉中ADL含量均顯著降低(P<0.01),而莖中ADL含量均顯著增加(P<0.05)。移苗后173d,與移苗后114d時(shí)相比,蘇牧2號(hào)象草葉中ADL含量顯著增加,而雜交狼尾草顯著降低(P<0.01),兩品種莖中ADL含量無(wú)顯著變化。移苗后83~114d,蘇牧2號(hào)象草葉中ADL含量均顯著低于雜交狼尾草(P<0.01),而移苗后173d,蘇牧2號(hào)象草葉中ADL含量顯著高于雜交狼尾草(P<0.05)。隨著生長(zhǎng)時(shí)間的延長(zhǎng),兩品種莖中ADL含量均逐漸增高,移苗后114~173d,蘇牧2號(hào)象草莖中ADL含量明顯高于雜交狼尾草(P<0.05)(表5,表6)。

      表3 象草和雜交狼尾草不同生長(zhǎng)階段葉中HMC含量Table 3 The HMC content of leaves at different growth stages in EG and HP %DM

      表4 象草和雜交狼尾草不同生長(zhǎng)階段莖中HMC含量Table 4 The HMC content of stems at different growth stages in EG and HP %DM

      表5 象草和雜交狼尾草不同生長(zhǎng)階段葉中ADL含量Table 5 The ADL content of leaves at different growth stages in EG and HP %DM

      表6 象草和雜交狼尾草不同生長(zhǎng)階段莖中ADL含量Table 6 The ADL content of stems at different growth stages in EG and HP %DM

      2.4 兩供試品種葉和莖細(xì)胞壁各組分總量隨生長(zhǎng)天數(shù)的變化

      隨著生長(zhǎng)時(shí)間的延長(zhǎng),兩品種含水量逐漸降低,莖葉比和干物質(zhì)產(chǎn)量逐漸增加。移苗后83~114d,蘇牧2號(hào)象草和雜交狼尾草兩品種含水量逐漸降低,莖葉比穩(wěn)定,莖和葉產(chǎn)量穩(wěn)步增加;干物質(zhì)產(chǎn)量二者無(wú)明顯差異(P>0.05)。移苗后114~173d,象草含水量緩慢減少,雜交狼尾草含水量顯著減少(P<0.05);兩品種莖葉比均迅速增加,葉產(chǎn)量穩(wěn)步增加,而莖產(chǎn)量急劇增加,雜交狼尾草莖的生長(zhǎng)最為顯著(P<0.01),此階段雜交狼尾草干物質(zhì)產(chǎn)量顯著高于象草(P<0.01)(表7)。

      隨著生長(zhǎng)時(shí)間的延長(zhǎng),兩品種CEL、HMC和ADL總量逐漸增加。移苗后83~114d,蘇牧2號(hào)象草和雜交狼尾草莖和葉組織中CEL、ADL總量無(wú)顯著差異(P>0.05);HMC主要集中在莖組織中;兩品種間細(xì)胞壁各組分總量無(wú)顯著差異(P>0.05)。移苗后114~173d,兩品種細(xì)胞壁各組分總量急劇增加,增加的產(chǎn)量更多來(lái)源于莖組織;兩品種間HMC和ADL總量無(wú)明顯差異,雜交狼尾草中CEL總量明顯高于蘇牧2號(hào)象草(P<0.01)(表7)。

      2.5 兩供試品種纖維素和半纖維素乙醇理論產(chǎn)量隨生長(zhǎng)天數(shù)的變化

      隨著生長(zhǎng)時(shí)間的延長(zhǎng),兩品種來(lái)源于莖和葉組織的總乙醇產(chǎn)量(TCEY)逐漸增加,變化范圍為1300~16347 L/hm2;移苗后114d,蘇牧2號(hào)象草和雜交狼尾草TCEY分別是移苗后83d的4.0和4.5倍;移苗后174d,蘇牧2號(hào)象草和雜交狼尾草TCEY分別是移苗后83d的10.38和12.29倍;雜交狼尾草的乙醇產(chǎn)量增長(zhǎng)幅度顯著高于象草(P<0.01)。移苗后83d,TCEY為1300~1440L/hm2,象草略高于雜交狼尾草(P>0.05);移苗后114d,TCEY為5758~5852L/hm2,象草略小于雜交狼尾草(P>0.05);移苗后173d,TCEY 顯著增加至14943~16347L/hm2,象草明顯低于雜交狼尾草(P<0.01)。3個(gè)不同生長(zhǎng)階段,來(lái)源于葉組織的乙醇產(chǎn)量為577~3587L/hm2,各階段象草均略高于雜交狼尾草。大部分的乙醇來(lái)源于莖,移苗后83~114d,來(lái)自于象草和雜交狼尾草莖組織的乙醇產(chǎn)量占總乙醇產(chǎn)量的54.10%~57.26%,兩品種無(wú)明顯差異;移苗后173d,這一指標(biāo)上升至76.00%~78.97%,雜交狼尾草顯著高于象草(表8)。

      3個(gè)不同的生長(zhǎng)階段,象草和雜交狼尾草中來(lái)源于纖維素的乙醇分別占TCEY的48.00%~78.40%和60.97%~78.08%;隨著生長(zhǎng)時(shí)間的延長(zhǎng),兩品種中其所占比例逐漸降低;生長(zhǎng)114~173d,雜交狼尾草中的纖維乙醇產(chǎn)量顯著高于象草。相反,移苗后83~173d,來(lái)源于半纖維的乙醇所占比例逐漸升高(21.53%~52.00%);而且莖是半纖維素最重要的儲(chǔ)存組織,移苗后114~173d,其半纖維素乙醇產(chǎn)量占總半纖維乙醇的比例高達(dá)88.19%~94.66%;不同時(shí)期象草中半纖維乙醇產(chǎn)量均高于雜交狼尾草(表8)。

      表7 象草和雜交狼尾草不同生長(zhǎng)階段細(xì)胞壁組分的總量Table 7 Changes in yield of cell wall components of leaves and stems at different growth stages in EG and HP

      表8 象草和雜交狼尾草不同生長(zhǎng)階段纖維素和半纖維素理論乙醇產(chǎn)量Table 8 Changes in calculated ethanol yields(CEY)from cellulose and hemicellulose of leaves and stems at different growth stages in EG and HP L/hm2

      3 討論與結(jié)論

      大量研究表明植物細(xì)胞壁組分與木質(zhì)纖維素類生物質(zhì)乙醇轉(zhuǎn)化效率密切相關(guān)[15-17]。木質(zhì)纖維素類能源植物的生物產(chǎn)量、細(xì)胞壁組分及相應(yīng)的生物質(zhì)乙醇產(chǎn)量隨生長(zhǎng)發(fā)育動(dòng)態(tài)變化,了解其變化規(guī)律,可為能源植物的適時(shí)刈割利用提供必要的科學(xué)依據(jù),具有重要的理論價(jià)值和實(shí)踐意義,但相關(guān)研究報(bào)道尚少。最近,Godin等[20]分析報(bào)道了芒草(Miscanthus×giganteus),柳枝稷,纖維高粱(Sorghumbicolor),纖維玉米(Zeamays),高羊茅(Festucaarundinacea)等多種能源植物不同收獲期的化學(xué)組分和生物質(zhì)能源轉(zhuǎn)化潛能。本研究探討了蘇牧2號(hào)象草和雜交狼尾草兩品種細(xì)胞壁組分含量、總量和木質(zhì)纖維素乙醇理論產(chǎn)量隨生長(zhǎng)的變化過(guò)程。

      Sarath等[15]曾比較不同基因型柳枝稷的細(xì)胞壁組分和乙醇轉(zhuǎn)化效率的相關(guān)性,研究表明,木質(zhì)素含量是影響乙醇轉(zhuǎn)化效率的關(guān)鍵因素,木質(zhì)素含量越低,乙醇轉(zhuǎn)化效率越高。Studera等[16]對(duì)1100份楊樹(shù)(Populustrichocarpa)資源的木質(zhì)素含量和乙醇轉(zhuǎn)化效率的相關(guān)性分析也證實(shí)了這一推論。Serapiglia等[21]對(duì)不同基因型灌木柳(Salixspp.)的研究表明纖維素含量越高,木質(zhì)纖維素乙醇轉(zhuǎn)化效率越高。近年來(lái)大量植物基因工程研究也報(bào)道提高木質(zhì)纖維素生物質(zhì)原料中的纖維素含量、降低其木質(zhì)素含量可以顯著提高其乙醇轉(zhuǎn)化效率[22-23]。我們的研究發(fā)現(xiàn),隨著生長(zhǎng)天數(shù)的增加,蘇牧2號(hào)象草及其雜交種葉和莖中CEL含量逐漸降低,莖中ADL和HMC含量逐漸上升。早期(移苗后83d),雜交狼尾草葉中CEL含量低于象草,兩品種莖中CEL含量無(wú)顯著差異,移苗后114~173d,雜交狼尾草莖、葉中CEL含量顯著高于象草。不同生長(zhǎng)階段,雜交狼尾草葉中HMC含量均顯著低于蘇牧2號(hào)象草,移苗后83d,兩品種莖中HMC無(wú)顯著差異,移苗后114~173d,雜交狼尾草莖中HMC含量顯著低于象草;雜交狼尾草葉中ADL含量早中期(移苗后83~114d)高于象草,后期低于象草,不同生長(zhǎng)階段,雜交狼尾草莖中ADL含量均顯著低于象草。因此,僅從生物質(zhì)乙醇轉(zhuǎn)化效率的角度考慮,兩品種8月份(移苗后83d)的轉(zhuǎn)化效率顯著優(yōu)于9、10月,早期(移苗后83d),蘇牧2號(hào)象草轉(zhuǎn)化效率優(yōu)于雜交狼尾草,中后期(移苗后114~173d),雜交狼尾草轉(zhuǎn)化效率優(yōu)于蘇牧2號(hào)象草。

      除細(xì)胞壁組成,生物質(zhì)產(chǎn)量也是影響木質(zhì)纖維素類生物質(zhì)能源利用潛力的關(guān)鍵因素[24]。Godin等[20]的研究表明芒草、柳枝稷、纖維高粱、纖維玉米、高羊茅等多種能源植物在秋季收獲具有最大的生物能源產(chǎn)出,雖然此階段這些植物的細(xì)胞壁組成并非最佳時(shí)期,但由于干物質(zhì)產(chǎn)量達(dá)到最高,一定程度上補(bǔ)償細(xì)胞壁品質(zhì)的降低。我們的研究也呈相似的規(guī)律。在南京地區(qū),象草早期生長(zhǎng)迅速,而雜交狼尾草在移苗后的前期和中期(移苗后83~114d)長(zhǎng)勢(shì)較象草差,后期(移苗后114~173d),雜交狼尾草雜種優(yōu)勢(shì)明顯,長(zhǎng)勢(shì)顯著優(yōu)于象草。隨著生長(zhǎng)天數(shù)的增加,兩品種細(xì)胞壁木質(zhì)素含量逐漸增加,纖維素含量逐漸降低,但細(xì)胞壁各組分總量和TCEY均逐漸增加,而且兩品種來(lái)源于莖的乙醇產(chǎn)量占TCEY的比例逐漸增加。移苗后114和173d,兩品種乙醇產(chǎn)量分別是移苗后83d的4.0~4.5倍和10.38~12.29倍,雜交狼尾草的乙醇產(chǎn)量增長(zhǎng)幅度顯著高于象草。移苗后83d,兩品種細(xì)胞壁各組分總量和TCEY無(wú)顯著差異,隨著生長(zhǎng)的延長(zhǎng),雜交狼尾草中CEL總量以及來(lái)源于CEL的乙醇理論產(chǎn)量顯著高于象草,其HMC總量以及來(lái)源于HMC的乙醇理論產(chǎn)量和ADL總量顯著低于象草。

      因此,綜合考慮乙醇轉(zhuǎn)化效率和生物質(zhì)產(chǎn)量因素,在中后期(移苗后114~173d),雜交狼尾草生物質(zhì)能的利用潛力優(yōu)于蘇牧2號(hào)象草。同時(shí),雜交狼尾草可有效解決象草結(jié)實(shí)率極低,不能種子繁殖的難題,這為高效低成本產(chǎn)業(yè)化種植和應(yīng)用奠定了良好基礎(chǔ)[10],使其更適合于大面積推廣。另外,同一地區(qū)大面積推廣單一品種會(huì)降低品種抗病蟲(chóng)害和抵御不良環(huán)境的能力,并易在大范圍內(nèi)引發(fā)新的災(zāi)害而影響生產(chǎn)的穩(wěn)定性[25],因此可以在同一地區(qū)同時(shí)大面積種植蘇牧2號(hào)象草和雜交狼尾草,蘇牧2號(hào)象草多次刈割利用,雜交狼尾草生長(zhǎng)后期一次性刈割利用。這樣既能避免品種單一的潛在風(fēng)險(xiǎn),又充分發(fā)揮蘇牧2號(hào)象草早期生長(zhǎng)迅速、生物質(zhì)乙醇轉(zhuǎn)化效率高以及雜交狼尾草后期生物產(chǎn)量高的品種優(yōu)勢(shì),同時(shí)避免了生物質(zhì)原料收獲期過(guò)度集中,延長(zhǎng)了原料的收獲期,減少原料收獲壓力和貯存成本。

      已有研究報(bào)道刈割頻次對(duì)象草和雜交狼尾草飼用品質(zhì)的影響[26-27],還未見(jiàn)刈割對(duì)象草和雜交狼尾草能源利用潛力影響的相關(guān)研究,今后我們將進(jìn)一步開(kāi)展這方面的研究。同時(shí)目前我們僅對(duì)蘇牧2號(hào)象草和雜交狼尾草的乙醇理論產(chǎn)量進(jìn)行了預(yù)測(cè)和比較,這可能與實(shí)際的生產(chǎn)有一定的差異,今后我們將進(jìn)一步開(kāi)展象草和雜交狼尾草乙醇生產(chǎn)研究。

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