孫 炯，楊留才,李仕紅,徐紅濤

(1.亭湖區(qū)人民醫(yī)院婦產(chǎn)科,江蘇 鹽城224000； 2.鹽城衛(wèi)生職業(yè)技術(shù)學(xué)院,江蘇 鹽城 224006)

子宮內(nèi)膜癌是女性最常見(jiàn)的生殖系統(tǒng)惡性腫瘤之一。研究表明，與增殖、凋亡相關(guān)的細(xì)胞因子表達(dá)異常可導(dǎo)致細(xì)胞周期發(fā)生紊亂，細(xì)胞無(wú)限制生長(zhǎng)，最終導(dǎo)致惡性腫瘤的發(fā)生[1]。生存蛋白(Livin)是凋亡抑制蛋白家族成員，研究表明其在乳腺癌[2]、食管癌等實(shí)體腫瘤和腫瘤細(xì)胞系中表達(dá)水平顯著增高[3]。而胱天蛋白酶(caspase)-3是caspase家族的成員之一，其主要的功能為被凋亡通路激活，導(dǎo)致細(xì)胞凋亡[4]。本研究通過(guò)免疫組織化學(xué)染色法檢測(cè)Livin與caspase-3在子宮內(nèi)膜癌組織中的表達(dá)情況及其相關(guān)性，并探討兩者在子宮內(nèi)膜癌發(fā)生、發(fā)展中的作用。

1 資料與方法

1.1一般資料 收集2009年6月至2011年6月于亭湖區(qū)人民醫(yī)院婦產(chǎn)科就診且進(jìn)行活檢或手術(shù)治療的患者268例，年齡36～69(46.3±10.1)其中子宮內(nèi)膜癌196例作為試驗(yàn)組，取子宮內(nèi)膜癌患者肌瘤旁正常組織72例作為對(duì)照組。試驗(yàn)組患者年齡<45歲者90例、≥45歲者106例；國(guó)際婦產(chǎn)科聯(lián)盟臨床分期：Ⅰ期67例、Ⅱ期55例、Ⅲ期42例、Ⅳ期32例；病理診斷：高分化72例、中分化76例、低分化48例；有淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移82例、無(wú)淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移114例。所有患者在進(jìn)行手術(shù)前未經(jīng)過(guò)放療和化療等治療措施。

1.2方法 石蠟切片脫蠟水化，加羊抗人Livin一抗(1∶100,美國(guó)Santa Cruz 公司)，羊抗人caspase-3一抗(1∶200,美國(guó)Santa Cruz 公司)兔抗羊IgG二抗(1∶100，美國(guó)Sigma公司)室溫孵育40 min；磷酸鹽緩沖液清洗，加Elite-AP(美國(guó)Vector公司，)孵育30 min，磷酸鹽緩沖液清洗，二氨基聯(lián)苯胺底物液(中國(guó)邁新公司)顯色5 min，蘇木精復(fù)染10 s，脫水，二甲苯透明，中性樹(shù)膠封片，光鏡下觀察攝片。

1.3染色結(jié)果判斷 染色結(jié)果顯示Livin和caspase-3均定位于胞質(zhì)中，以胞質(zhì)內(nèi)出現(xiàn)棕黃色顆粒為陽(yáng)性細(xì)胞標(biāo)志。在高倍鏡下隨機(jī)選取10個(gè)視野，根據(jù)陽(yáng)性細(xì)胞在全部組織細(xì)胞中所占比例判定實(shí)驗(yàn)結(jié)果，陽(yáng)性細(xì)胞數(shù)占全部組織細(xì)胞數(shù)比例<10%判斷為(-)，陽(yáng)性細(xì)胞數(shù)占全部組織細(xì)胞數(shù)比例為10%～50%判斷為(+)，陽(yáng)性細(xì)胞數(shù)占全部組織細(xì)胞數(shù)>50%判斷為(++)，以(+)及(++)作為顯色陽(yáng)性[5]。

1.4統(tǒng)計(jì)學(xué)方法 應(yīng)用SPSS 18.0軟件進(jìn)行統(tǒng)計(jì)分析，計(jì)數(shù)資料采用χ2檢驗(yàn)，等級(jí)資料采用秩和檢驗(yàn)，相關(guān)性分析采用Spearman檢驗(yàn)，P<0.05為差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義。

2 結(jié) 果

2.1兩組Livin和caspase-3表達(dá)情況的比較 試驗(yàn)組 Livin表達(dá)的陽(yáng)性率顯著高于對(duì)照組(77.04% vs 11.11%)；試驗(yàn)組caspase-3表達(dá)的陽(yáng)性率顯著低于對(duì)照組(28.06% vs 73.61%),差異均有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P<0.05)(表1)。

對(duì)照組：子宮內(nèi)膜癌患者肌瘤旁正常組織；試驗(yàn)組：子宮內(nèi)膜癌

2.2子宮內(nèi)膜癌組織中Livin和caspase-3表達(dá)與臨床、病理指標(biāo)的關(guān)系 臨床分期為Ⅲ～Ⅳ期患者的Livin陽(yáng)性表達(dá)率高于Ⅰ～Ⅱ期，而caspase-3陽(yáng)性表達(dá)率低于Ⅰ～Ⅱ期，差異均有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P<0.05)；高分化患者Livin陽(yáng)性表達(dá)率低于中、低分化患者，而caspase-3陽(yáng)性表達(dá)率高于中、低分化患者，差異均有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P<0.05)；有淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移的患者Livin陽(yáng)性表達(dá)率高于無(wú)淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移患者，而caspase-3陽(yáng)性表達(dá)率低于無(wú)淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移患者，差異均有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P<0.05)(表2)。

2.3子宮內(nèi)膜癌組織中Livin和caspase-3表達(dá)的相關(guān)性 在子宮內(nèi)膜癌組織中，Livin檢出陽(yáng)性率高于caspase-3(χ2=57.600，P=0.000)。Spearman等級(jí)檢驗(yàn)結(jié)果顯示：Livin和caspase-3表達(dá)在子宮內(nèi)膜癌組織中呈負(fù)相關(guān)(rs=-0.56,P<0.05)(表3)。

表2 子宮內(nèi)膜癌組織中Livin和caspase-3表達(dá)與臨床、病理指標(biāo)的關(guān)系

對(duì)照組：子宮內(nèi)膜癌患者肌瘤旁正常組織 試驗(yàn)組：子宮內(nèi)膜癌；a與高分化比較，P<0.05

表3 子宮內(nèi)膜癌組織中Livin和caspase-3表達(dá)的相關(guān)性 (例)

3 討 論

現(xiàn)有的研究表明，惡性腫瘤的發(fā)生和發(fā)展與細(xì)胞增殖、凋亡的平衡紊亂存在密切關(guān)系。細(xì)胞凋亡是由基因控制的自殺程序引起的主動(dòng)性死亡[6]，其中Survivin[7]、p53[8]、Bcl-2[9]和caspases[10]等細(xì)胞因子在腫瘤的發(fā)生過(guò)程中起到了重要作用。

本研究結(jié)果顯示,Livin在正常組織中陽(yáng)性表達(dá)率低于子宮內(nèi)膜癌陽(yáng)性表達(dá)率,Livin的蛋白表達(dá)水平越高，子宮內(nèi)膜癌的臨床分期越晚，病理分級(jí)越低，淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移的可能性越大，表明Livin在腫瘤組織中的表達(dá)水平越高，患者的預(yù)后相對(duì)越差。Gazzaniga等[11]的研究結(jié)果表明，膀胱癌患者中Livin表達(dá)陽(yáng)性的復(fù)發(fā)時(shí)間顯著短于Livin陰性表達(dá)，說(shuō)明Livin的表達(dá)水平與預(yù)后存在密切關(guān)系。周莉等[12]的研究結(jié)果也發(fā)現(xiàn)，Livin不僅在子宮內(nèi)膜癌中高表達(dá)，并且可能與子宮內(nèi)膜癌的預(yù)后相關(guān)，這與本研究的結(jié)果基本一致。

本研究還發(fā)現(xiàn)，caspase-3在子宮內(nèi)膜癌組織中的陽(yáng)性率較正常組織低，并且caspase-3在子宮內(nèi)膜癌組織中表達(dá)水平越低，分化越差，臨床分期越晚，患者的預(yù)后越差。本研究結(jié)果與在乳腺癌[13]、卵巢癌[14]等實(shí)體腫瘤中的研究結(jié)果基本一致。caspase是一組存在于胞質(zhì)中的半胱氨酸蛋白酶，目前的研究認(rèn)為caspase-3是整個(gè)凋亡過(guò)程中最重要的執(zhí)行者之一，能夠水解大量底物蛋白[15]。同時(shí)caspase-3也是線粒體和死亡受體兩條凋亡信號(hào)途徑的共同通道，凋亡通路一旦激活則引起caspase-3級(jí)聯(lián)反應(yīng)并使其活化引起細(xì)胞凋亡，體外實(shí)驗(yàn)表明，經(jīng)過(guò)地塞米松處理的子宮內(nèi)膜癌發(fā)生凋亡，并且與細(xì)胞內(nèi)caspase-3水平上調(diào)有關(guān)[16]。而范引俠等[1]的研究結(jié)果也發(fā)現(xiàn),子宮內(nèi)膜癌組織中的caspase-3水平顯著下調(diào)。上述研究結(jié)果與本研究結(jié)果基本一致，說(shuō)明在子宮內(nèi)膜癌中caspase-3的表達(dá)水平顯著下調(diào)，導(dǎo)致細(xì)胞增殖和凋亡間的平衡被打破，細(xì)胞凋亡減少，增殖增加。

本研究結(jié)果還顯示，Livin與caspase-3在子宮內(nèi)膜癌中的表達(dá)呈負(fù)相關(guān)，說(shuō)明Livin可能通過(guò)影響caspase-3的表達(dá)水平來(lái)調(diào)控細(xì)胞的凋亡。目前研究認(rèn)為其作用機(jī)制主要表現(xiàn)為以下兩個(gè)方面：①Livin能直接下調(diào)caspase-3的表達(dá)水平，減少凋亡的發(fā)生；②Livin通過(guò)與caspase-9結(jié)合，并且降低caspase-3的表達(dá)水平抑制線粒體信號(hào)通路發(fā)生抑制凋亡[17]。

綜上所述，Livin在子宮內(nèi)膜癌的組織中高表達(dá)，caspase-3在子宮內(nèi)膜癌的組織中低表達(dá)，且兩者的表達(dá)水平均與臨床分期、病理分級(jí)以及淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移相關(guān)；Livin和caspase-3表達(dá)在子宮內(nèi)膜癌組織中呈負(fù)相關(guān)，提示Livin可能通過(guò)與caspase-3共同作用促進(jìn)子宮內(nèi)膜癌的發(fā)生、發(fā)展。

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