陳岳青 王一鳳 陳文學(xué)

人乳頭瘤病毒感染亞型與宮頸病變的關(guān)系

陳岳青 王一鳳 陳文學(xué)

目的 探討HPV感染與宮頸病變發(fā)生的關(guān)系。方法 將病理檢查確診宮頸有病變的187例患者分為3組:慢性炎癥組(n=41)、宮頸上皮瘤變(CIN)組(n=62)和宮頸癌組(n=84)。采用人乳頭瘤病毒核酸擴(kuò)增分型技術(shù)對(duì)患者宮頸脫落細(xì)胞樣本作HPV基因分型檢測(cè)，分析HPV感染狀況及HPV基因型在各組疾病中的分布。結(jié)果 ①187例患者中共檢出HPV陽(yáng)性者136例，陽(yáng)性率為72.72%(136/187)，其中高危型HPV感染陽(yáng)性率為95.58%(130/136)。在被測(cè)的21個(gè)HPV亞型中最常見的6個(gè)類型依次為16型(46.32%、63/136)，58型(21.32%、29/136)，52型(15.44%、21/136)，18型(12.50%、17/136)，33型(9.56%、13/136)，31型(8.09%、11/136)，未檢測(cè)出44型、43型及6型。②慢性炎癥組HPV陽(yáng)性率為14.63%(6/41)；CIN組HPV陽(yáng)性率為85.48%(53/62)、其中CINⅠ組、CINⅡ組、CIN Ⅲ組中HPV感染率分別為62.50%(10/16)、90.47%(19/21)、96.00%(24/25)；宮頸癌組HPV陽(yáng)性率91.67%(77/84)。CIN及宮頸癌組HPV陽(yáng)性率均高于炎癥組，而CINⅡ～CINⅢ組及宮頸癌組HPV陽(yáng)性率又明顯高于CINⅠ組。3組陽(yáng)性表達(dá)率差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P<0.05)。③HPV陽(yáng)性者中單一感染率為67.65(92/136),多重感染率為32.35%(44/136)，其中以雙重感染為主，占79.55%(35/44)。④HPV感染患者年齡以 30～59歲最高，但各年齡段HPV感染檢出率比較無(wú)統(tǒng)計(jì)學(xué)差異(P>0.05)。⑤慢性炎癥組、CIN組和宮頸癌組的16型感染率分別為16.67%(1/6)、47.16%(25/53)、48.05%(37/77)。CIN組和宮頸癌組的16型感染率高于慢性炎癥組，差異具有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P<0.05)。結(jié)論 HPV感染與宮頸病變發(fā)生、發(fā)展密切相關(guān)，HPV基因分型診斷對(duì)宮頸病變高危人群的篩查、預(yù)防、臨床診斷、治療可提供重要的理論依據(jù)。

人乳頭瘤病毒;宮頸病變;基因分型

(ThePracticalJournalofCancer,2014,29:1540～1543)

宮頸癌是全球婦女第二大常見腫瘤，其發(fā)病率僅次于乳腺癌，80%左右發(fā)生在發(fā)展中國(guó)家。在我國(guó)宮頸癌發(fā)病通常在35歲以后，高峰年齡段為45～49歲，近年來(lái)我國(guó)宮頸癌的發(fā)生有明顯上升和年輕化趨勢(shì)，發(fā)病以每年2%～3%的速度增長(zhǎng)[1]。通過(guò)現(xiàn)有的研究顯示HPV持續(xù)感染是導(dǎo)致宮頸上皮內(nèi)瘤變并進(jìn)一步引發(fā)宮頸癌的主要病因[2]。本研究進(jìn)一步分析HPV感染與宮頸病變的相關(guān)性,深入了解宮頸病變患者HPV感染狀況,現(xiàn)報(bào)告如下。

1 資料與方法

1.1 一般資料

選取2012年9月-2013年10月在我院門診就診的表現(xiàn)為不規(guī)則陰道流血、流液，接觸性陰道出血，或無(wú)癥狀僅在婦科體檢時(shí)發(fā)現(xiàn)宮頸外觀異常的187例患者，經(jīng)陰道鏡活檢、病理學(xué)檢查確診為慢性炎癥、宮頸上皮瘤變CIN及浸潤(rùn)癌，年齡27～74歲，平均年齡(39.80±9.14)歲，其中慢性炎癥41例、宮頸上皮瘤變CINⅠ16例、CIN Ⅱ 21例、CIN Ⅲ 25例，浸潤(rùn)癌(鱗癌、腺癌)84例。

1.2 方法

1.2.1 HPV DNA取樣 受檢者由婦產(chǎn)科醫(yī)生用窺陰器暴露宮頸，用無(wú)菌棉拭下將宮頸口的分泌物擦去，將專用宮頸刷伸入宮頸口處，宮頸刷沿一個(gè)方向旋轉(zhuǎn)3～5圈取出，放入專用的細(xì)胞保存液中，送實(shí)驗(yàn)室置4 ℃冰箱保存，1周內(nèi)完成檢測(cè)?；颊咄ǔＴ谛嘘幍犁R及宮頸活組織病理檢查同時(shí)取HPV DNA樣。

1.2.2 HPV基因分型檢測(cè) 采用凱普HPV分型檢測(cè)試劑盒，通過(guò)分離提取宮頸細(xì)胞中的DNA、PCR擴(kuò)增、導(dǎo)流雜交3個(gè)步驟檢測(cè)出21種HPV基因型。結(jié)果的判定通過(guò)肉眼觀察獲得:檢測(cè)結(jié)果陽(yáng)性者為清晰可見的藍(lán)紫色圓點(diǎn)。根據(jù)雜交條膜HPV分型分布圖判斷陽(yáng)性點(diǎn)的HPV病毒亞型。每一批同時(shí)擴(kuò)增陽(yáng)性對(duì)照和陰性對(duì)照。21種亞型包括16種高危亞型(16,18,31,33,35,39，45,51,52,53,56,58,59，66,68,CP 8304)和 5種低危亞型(6,11,42,43,44)。

1.2.3 統(tǒng)計(jì)學(xué)處理 建立Excel數(shù)據(jù)庫(kù)，采用SPSS 16.0統(tǒng)計(jì)軟件，計(jì)數(shù)資料采用例數(shù)或百分率描述，組間比較用χ2檢驗(yàn)或精確概率檢驗(yàn)，以P<0.05為差異具有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義。

2 結(jié)果

2.1 HPV檢測(cè)陽(yáng)性率及各亞型分布情況

187例宮頸病變患者中共檢出HPV感染陽(yáng)性者136例，陽(yáng)性率為72.72%(136/187)。慢性炎癥組HPV感染陽(yáng)性率14.63%(6/41)，宮頸上皮瘤變CINⅠ～Ⅲ組HPV感染陽(yáng)性率85.48%(53/62)、其中宮頸上皮瘤變CINⅠ組、CINⅡ組、CINⅢ組中的感染率分別為62.50%(10/16)、90.47%(19/21)、96.00%(24/25)，宮頸癌組HPV感染陽(yáng)性率91.67%(77/84)。高危型感染最多見，在被測(cè)的21個(gè)HPV亞型中最常見6個(gè)類型依次為16型(46.32%、63/136)，58型(21.32%、29/136)，52型(15.44%、21/136)，18型(12.50%、17/136)，33型(9.56%、13/136)，31型(8.09%、11/136)，未檢測(cè)出44型、43型及6型。

2.2 多重感染分布情況

136例HPV感染陽(yáng)性樣本中，HPV單一感染92例，占67.65%(92/136)；多重感染44例，占32.35%(44/136)。多重感染中以二重感染為主，占多重感染的79.55%(35/44)；三重感染9例，占多重感染的20.45%(9/44)；未見四重及以上多重感染病例。最常見的是HPV16合并其他型別的感染。

2.3 HPV感染年齡分布情況

不同年齡組(<30歲、30 ～39歲、40～49歲、50～59歲、≥60歲)HPV感染率分別為33.33%(2/6)、75.67%(28/37)、79.66%(47/59)、72.72%(40/55)、63.33%(19/30)，經(jīng)檢驗(yàn)，差異無(wú)統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P>0.05)。HPV感染高峰年齡在30～59歲。

2.4 宮頸病變與HPV 16及18亞型的關(guān)系

本組病例中HPV16共感染63型次，慢性炎癥、CIN Ⅰ、 CIN Ⅱ 、 CINⅢ、宮頸浸潤(rùn)癌中HPV 16的感染率分別為：16.67 %(1/6)、20.00%(2/10)、42.10%(8/19)、62.50%(15/24)、48.05%(37/77)，顯示隨著宮頸腫瘤癌變級(jí)別的升高，HPV16感染的陽(yáng)性率逐漸升高，且CIN組和宮頸癌組的16型感染率明顯高于慢性炎癥組，差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P<0.05)。HPV18亞型共感染17型次，88.23%(15/17)出現(xiàn)在宮頸浸潤(rùn)癌中，其中5例出現(xiàn)在鱗癌中，10例出現(xiàn)在腺癌中，2例出現(xiàn)在CIN瘤變中，慢性宮頸炎癥未見HPV18型次感染。

3 討論

自從1976年ZurHausen推測(cè)HPV感染與宮頸癌發(fā)生有關(guān)后，國(guó)內(nèi)外學(xué)者對(duì)HPV感染與宮頸癌的相關(guān)性進(jìn)行了大量的研究，并證實(shí)HPV感染是宮頸癌發(fā)病的必要因素[3]。也有研究結(jié)果報(bào)道，大約82.4%的宮頸癌前病變和92%的宮頸浸潤(rùn)癌都存在HPV感染[4]。本研究結(jié)果顯示，宮頸上皮瘤變HPV感染率85.48%和宮頸癌HPV感染率92%，與上述報(bào)道結(jié)果一致。HPV檢測(cè)是宮頸病變及宮頸癌篩查的重要方法之一，對(duì)早期預(yù)防、早期發(fā)現(xiàn)和早期治療宮頸癌有重要作用。本組資料顯示，宮頸病變HPV感染以HPV16亞型的感染率最高(63.9%)，并隨著宮頸病變分級(jí)升高，HPV16亞型感染的陽(yáng)性率逐漸升高，HPV16亞型在CINⅠ及以上級(jí)別的宮頸腫瘤中起了至關(guān)重要作用,HPV16是致宮頸癌常見原因,但HPV18致癌作用比HPV16更大,HPV18一旦致病均出現(xiàn)在宮頸癌病例中[5]。

本文HPV感染者以單一感染為主，占67.65%，HPV多重感染率為32.35%，高于蔣旭峰等[6]報(bào)道的金華地區(qū)多重感染率21.87%，低于陶萍萍等[7]報(bào)道的多重感染率44.35%。在多重感染中雙重感染占較大比例，為79.55%。HPV多重感染是否促進(jìn)宮頸病變發(fā)生和進(jìn)展，一直是學(xué)者們爭(zhēng)議頗多的問(wèn)題。有學(xué)者認(rèn)為，HPV多重感染是宮頸病變的一個(gè)重要危險(xiǎn)因素[7-8]，也有學(xué)者認(rèn)為HPV多重感染并不增加宮頸病變的發(fā)生率[9-10]。有研究發(fā)現(xiàn)，HPV單一感染和多重感染的清除率相當(dāng)，但部分型別更難以被機(jī)體清除，可能更易致持續(xù)性感染，從而成為導(dǎo)致宮頸病變及宮頸癌的主要病因[11]。

目前對(duì)HPV感染與年齡的相關(guān)性有不同觀點(diǎn)。Lozcano Ponce等[12]報(bào)道在年齡小于25歲的女性(16.17%)及年齡大于65歲的女性(23.10%)中，有2個(gè)HPV感染高峰，35～44歲年齡段的女性HPV感染率最低(3.17%)。Sellors等[13]報(bào)道在20～24歲年齡段女性HPV感染率最高為24.0%，而45～49歲年齡段女性HPV感染率降至3.4%,HPV感染率隨年齡增長(zhǎng)逐漸降低。沈艷紅等[14]對(duì)山西省子宮頸癌高發(fā)區(qū)30～50歲的女性HPV感染進(jìn)行調(diào)查，不同年齡組之間的HPV感染率經(jīng)統(tǒng)計(jì)學(xué)比較無(wú)顯著性差異(P>0.05)。楊曉華等[15]報(bào)道成都農(nóng)村地區(qū)女性HPV高危型感染率50歲以內(nèi)差異不顯著，50歲以上明顯降低。本研究發(fā)現(xiàn)，HPV感染率在不同年齡段(<30歲、30 ～39歲、40～49歲、50～59歲、≥60歲)無(wú)顯著差異，60歲以上有所降低，30歲以下感染率明顯降低。HPV感染高峰年齡在30～59歲。與山西省、成都地區(qū)相近，與國(guó)外文獻(xiàn)報(bào)道[12-13]并不一致。

宮頸癌已成為人類通過(guò)注射疫苗、篩查和早診早治來(lái)預(yù)防并消滅的第一種惡性腫瘤。宮頸癌作為一種感染性疾病，其預(yù)防性疫苗在疾病預(yù)防中的作用具有臨床意義。根據(jù)現(xiàn)有資料，已經(jīng)上市和在進(jìn)行臨床試驗(yàn)的HPV預(yù)防性疫苗，均僅保護(hù)有限的幾個(gè)型別[16-18]。目前HPV預(yù)防疫苗針對(duì)宮頸癌只能保護(hù)HPV16,18型的感染。HPV各亞型引起的感染有明顯地域差異[19]，HPV52和HPV58型引起的宮頸癌在亞洲地區(qū)所占比例明顯高于非洲及西方國(guó)家[20]。并有研究發(fā)現(xiàn)，宮頸癌中最常見的亞型為HPV16,HPV18,HPV56,HPV58等。通過(guò)對(duì)本地區(qū)宮頸病變婦女HPV感染情況分析，顯示感染HPV16,58,52亞型最多，與Lin等[21]報(bào)道的一致。根據(jù)各地區(qū)HPV感染情況及亞型分布規(guī)律，針對(duì)各亞型研發(fā)單價(jià)及多價(jià)HPV疫苗，對(duì)預(yù)防及降低宮頸癌的發(fā)生，保護(hù)婦女健康具有重要意義。

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(編輯：甘 艷)

Analysis of the Relationships between the Different Subtypes of Human Papillomavirus Infection and Cervical Lesions

CHENYueqing,WANGYifeng,CHENWenxue.

JiangxiCancerHospital，Nanchang,330029

Objective To discuss the relation between human papillomavirus(HPV) infection and the pathogenes of cervical lesions.Methods 187 cases of pathologically confirmed cervical lesions were divided into 3 groups,chronic flammation(n=41) group,cervical intraepithelial neoplasia (CIN)(n=62) group and cervical cancer (n=84)group.The characterization of genotypes of HPV in cervical cells was detected by human papillomavirus PCR method (Kaipu),and the situation of HPV infection and distribution of genotypes of HPV in patients of each group were analyzed.Results 136 patients were infected with HPV,the positive rate was 72.72% (136/187)，and 87 patients were infected with HR-HPV(high risk HPV,95.58%)。HPV-16(46.32%，63/136) was the most common of the 21 subtypes of HPV,followed by subtypes HPV-58(21.32%,29/136)，HPV-52(15.44%,21/136)，HPV-18(12.50%,17/136)，HPV-33(9.56%，13/136)，HPV-31(8.09%，11/136)，and there was no HPV-44 or HPV-43 or HPV-6.The positive rate of HPV in chronic flammation group was 14.63%(6/41),The positive rate of HPV in group of patients with CIN was 85.48%(53/62),and the positive rate of HPV in each typing of CINⅠ、CINⅡ、CINⅢwas 62.50%(10/16)、90.47%(19/21)、96.0%(24/25).The positive rate of HPV in group of patiens with cervical cancer was 91.67%(77/84).CIN level and cervical cancer patients of poitive rate of HPV were significantly higher than patients with cervical disease,and the positive rates of HPV in CIN Ⅱ～Ⅲ level and cervical cancer group were significantly higher than type CIN Ⅰ group.The positive rates of the 3 groups were statistically different.HPV-positive rate was 67.65 in single infection (92/136),mixed infection rate was 32.35% (44/136),of which dual infection (35/44) rate was 79.55%.The peak age of HPV infection was 30-59 years old,there was no significant difference in the HPV-positive rates between each group (P<0.05).HPV-16 infection rates of the chronic in flammation,cervical in traepithelial neoplasia and cervical cancer group were 16.67%(1/6)，47.16%(25/53)、48.05%(37/77),respectively.HPV-16 infection rates in cervical in traepithelial neoplasia and cervical cancer group were higher than that of chronic in flammation group,there was significant difference in the positive rate results.(P<0.05).Conclusion HPV infection is closely associated with occurrence and development of cervical lesions,the characterization of HPV-DNA typing can provide significant theoretical basis for screening,prevention,cure and clinical diagnosis of high risk population.

Human papillomavirus(HPV);Cervical lesions;Genotypes

330029 江西省腫瘤醫(yī)院

10.3969/j.issn.1001-5930.2014.12.010

R737.33

A

1001-5930(2014)12-1540-04

2014-09-02

2014-10-20)