復方中藥對雛雞冷應激的保護效應

陳海娟 孫 心 周靚靚 李 靜

（哈藥集團生物疫苗有限公司，黑龍江哈爾濱 150069）

復方中藥對雛雞冷應激的保護效應

陳海娟 孫 心 周靚靚 李 靜

（哈藥集團生物疫苗有限公司，黑龍江哈爾濱 150069）

本實驗以附子、當歸、黃芪、五味子等中藥，按照祖國中醫(yī)學傳統(tǒng)理論，配成復方中藥，研究其對冷應激雛雞的保護效應。試驗選取150只1日齡雛雞。預試7d后分成空白組（正常溫度對照組）、冷應激對照組、中藥組（低溫環(huán)境下飼喂含1% 復方中藥的日糧）。每組50只。試驗周期為35d。各組雛雞分別于7d、14d、21d、28d 和35d 隨機抽取10只，稱重后采血、宰殺，分離血清。取心臟、肝臟、脾臟、腎臟、睪丸、法氏囊、胸腺稱重。用分光光度計檢測血液內(nèi)乳酸脫氫酶、堿性磷酸酶、谷胱甘肽過氧化物酶、總抗氧化能力、肌酐、尿酸和尿素氮的含量或者活性，并測定各組雛雞血清中三碘甲腺原氨酸（triiodothyronine，T3）、甲狀腺素（thyroxine，T4）含量。結(jié)果表明，冷應激對照組雛雞從飼養(yǎng)第21d 開始體重較空白組和中藥組生長緩慢，與空白組和中藥組比較差異極顯著（p＜0.01）；中藥組雛雞，在生長21d之內(nèi)，體重增長較空白組比較差異性不顯著（p＞0.05），從第28d 開始，體重增長較空白組差異性顯著（p＜0.05）。中藥組雛雞體重明顯高于空白組和冷應激對照組。冷應激對照組雛雞的臟器指數(shù)，以免疫器官為主明顯受到損傷，中藥組雛雞在21d之內(nèi)臟器指數(shù)維持正常水平，較冷應激對照組無差異（p ＞ 0.05）。28 d后免疫器官的臟器指數(shù)明顯高于空白組，且高于冷應激對照組。與空白組和冷應激對照組比較統(tǒng)計學差異顯著或極顯著（p ＜ 0.05或p ＜ 0.01）。中藥組的乳酸脫氫酶、堿性磷酸酶、谷胱甘肽過氧化物酶活性水平較空白組降低（P＜ 0.05或P ＜ 0.01），總抗氧化能力下降，統(tǒng)計學分析差異顯著或極顯著（p ＜ 0.05或p ＜ 0.01），肌酐和尿酸含量較空白組升高，統(tǒng)計學分析差異顯著或極顯著（p ＜ 0.05或p＜ 0.01）。從14d開始至28d，冷應激對照組雛雞的T3，T4含量升高，與空白對照組統(tǒng)計學比較差異顯著或極顯著（p ＜ 0.05或P ＜ 0.01）。中藥組雛雞的T3，T4含量未見明顯變化，與空白對照組比較差異不顯著（p ＞ 0.05）。與冷應激對照組比較差異顯著或極顯著（p ＜0.05或P ＜ 0.01）。

復方中藥；雛雞；冷應激；保護效應

1 試驗材料

1.1 實驗動物

1日齡海蘭白雄性健康雛雞150只（黑龍江省哈爾濱市某雞場提供）

1.2 飼料及藥品

復方中藥內(nèi)主要包含附子、當歸、黃芪、五味子等粉劑，均購買于藥材大市場。中藥組飼喂日糧在哈爾濱東大牧業(yè)有限公司用小型混合機混合。

2 試驗方法

2.1 實驗分組及管理

選取體重無顯著差異的1日齡海蘭白雄性雛雞150只，雛雞適應7d后，隨機分為冷應激中藥組、冷應激對照組、空白對照組，每組50只。試驗組飼喂日糧+1%復方中藥；空白對照組和冷應激對照組飼喂正常日糧。冷應激中藥組和冷應激對照組雛雞飼養(yǎng)環(huán)境控制在15℃左右室內(nèi)飼養(yǎng)，而空白對照組按常規(guī)標準飼養(yǎng)，溫度控制在正常飼養(yǎng)溫度。各組雞自由采食、飲水。

2.2 樣品采集與處理

每組雞群分別于7d、14d、21d、28d、35d，隨機選取10 只雞，先稱重并記錄，然后進行靜脈采血10ml。血液靜止10min后，以3000r/min離心，分離血清，-20℃冰箱保存用于生化指標、抗氧化性能及T3、T4含量的測定。最后采集心、肝、腎、脾、法氏囊、胸腺、睪丸用于臟器指數(shù)的分析。

2.3 體重檢測

每組分別在7d、14d、21d、28d、35d分別隨機選取10只雞，編號并稱重，記錄體重數(shù)據(jù)。

2.4 臟器指數(shù)檢測

取完整的心、肝、腎、脾、法氏囊、胸腺、睪丸，分別對所取器官稱重，并按下列公式計算上述各個臟器指數(shù)。

2.5 雛雞血液生化指標的測定

檢測各組雞血清中乳酸脫氫酶（LDH）、堿性磷酸酶（AKP）、尿酸、尿素氮（BUN）、肌酐活性，按試劑盒說明書操作進行。

2.6 雛雞血液抗氧化性能測定

（1）總抗氧化能力（T-AOC）測定：

充分混勻，放置10 min，波長520nm，1cm 光徑，雙蒸水調(diào)零，測定各管吸光度OD值。

單位定義及計算公式：

在37℃ 時，每分鐘每毫升血清使反應體系的吸光度（OD）每增加0.01時，為一個總抗氧化能力單位。

混勻，3500～4000 轉(zhuǎn)/min，離心10 min，取上清1 ml 作顯色反應。

②顯色反應

（2）雛雞血清GSH-PX活性測定：

血清GSH-PX測定操作方法

①酶促反應：試劑一應用液提前在37℃ 預溫

混勻，室溫靜止15 min后，波長412nm，1cm 光徑比色環(huán)，雙蒸水調(diào)零，測定各管吸光度OD值。

單位定義及計算公式：血清中GSH活力的計算：

定義：規(guī)定每0.1 ml 血清在37℃ 反應5 min，扣除非酶促反應作用，使反應體系中GSH 濃度降低1 μmol/L 為一個每活力單位。

注：*，從酶促反應中看出反應液0.4 ml，加試劑二2 ml，在反應液中6倍稀釋。

2.7 雛雞血清中T3，T4含量的測定

血清中T3，T4的濃度的測定采用放射免疫分析法（RIA），按試劑盒說明書操作，測定儀器采用瑞典LKB-1261I十探頭自動γ計數(shù)器。

2.8 數(shù)據(jù)處理與分析

數(shù)據(jù)均以平均數(shù)±標準差表示，采用Oringin70軟件作圖，采用SPSSL2.0統(tǒng)計軟件中的多重比較Duncan’s法，其中各組間進行統(tǒng)計學分析：a，aa：與同時間冷應激對照組t-檢驗比較時分別p＜ 0.05，p ＜ 0.01；b，bb：與同時間中藥組組間t-檢驗比較時分別p ＜ 0.05，p ＜ 0.01；（p＜0.01表示差異極顯著，p＜0.05表示差異顯著，p＞0.05表示差異不顯著）。

3 結(jié)果

3.1 不同組間雛雞體重的變化

由圖3-1可知，冷應激對照組的體重增長從飼養(yǎng)第21d 開始，冷應激對照組雛雞體重較空白組和中藥組生長緩慢，與空白組比較差異性及顯著（p＜0.01），與中藥組比較差異性極顯著（p＜0.01）；中藥組雛雞在生長21d之內(nèi)，體重增長較空白組比較差異性不顯著（p＞0.05），從第28d 開始，體重增長較空白組差異性顯著（p＜0.05）。中藥組雛雞體重明顯高于空白組和冷應激對照組。

3.2 不同組間雛雞臟器指數(shù)的變化

通過比較相同實驗時間，不同組間（空白對照組、冷應激對照組、中藥組）的臟器指數(shù)得出，見圖3-2至3-8。雛雞在飼養(yǎng)第7d，第14d各組間相互統(tǒng)計比較，無顯著性差異（p＞0.05）。但從21d開始，冷應激對照組中的免疫器官臟器指數(shù)相對空白對照組的免疫器官指數(shù)有所降低，其中法氏囊的臟器指數(shù)與空白組比較有統(tǒng)計學差異（p＜0.05）；中藥組的免疫器官的臟器指數(shù)卻有相應的增加，尤其以法氏囊和胸腺為主，與空白組比較差異顯著（p＜0.05或p＜0.01）。飼喂第28d開始，中藥組的免疫器官，脾臟、法氏囊和胸腺的臟器指數(shù)明顯增加，與空白組比較差異顯著或極顯著（p＜0.05或p＜0.01）。而冷應激對照組，在第28d出現(xiàn)了臟器指數(shù)明顯的下降，尤以免疫器官為主，與空白組比較差異顯著或極顯著（p＜0.05或p＜0.01）。

圖3 -3 不同組間雛雞肝臟指數(shù)在不同時間的變化

3.3 復方中藥對冷應激雛雞血液生化指標的影響

3.3.1 復方中藥對冷應激雛雞血液LDH的影響

表3-1為空白對照組、冷應激對照組和中藥組雛雞的LDH 指標在不同時間段的變化。隨著雛雞的日齡增加和體重增大，機體的LDH 指標逐漸升高，實驗期間在第21d 達到峰值。且中藥組中LDH 最高。各組統(tǒng)計學比較差異不顯著（p ＞ 0.05）。

3.3.2 復方中藥對冷應激雛雞血液AKP的影響

由表3-2可知。冷應激對照組AKP活性下降較空白組明顯。飼喂28d和35d 時，空白組與冷應激對照組比較差異性顯著或極顯著（p ＜ 0.05或p ＜ 0.01）。中藥組雛雞的AKP 活性也隨日齡增長而降低，只有21d 與空白組比較有統(tǒng)計學差異（p ＜ 0.05），其他時間無統(tǒng)計學差異（p ＞ 0.05）；而與冷應激對照組比較，28d和35d AKP活性差異性顯著或極顯著（p ＜ 0.05或p ＜ 0.01），其他時間無統(tǒng)計學差異（p ＞ 0.05）。

3.3.3 復方中藥對冷應激雛雞血液尿素氮含量、尿酸和肌酐的影響

由表3-3看出，尿素氮指標統(tǒng)計學比較差異不顯著（p ＞0.05）。

由表3-4 明顯看出，冷應激對照組雛雞的尿酸含量明顯較空白對照組高，統(tǒng)計學差異顯著或極顯著（p ＜ 0.05或P ＜ 0.01）。中藥組與空白對照組比較差異不顯著（p ＞ 0.05）。與冷應激對照組比較差異顯著或極顯著（p ＜ 0.05或p ＜ 0.01）。

由表3-5明顯看出，冷應激對照組雛雞的肌酐含量明顯較空白組高，統(tǒng)計學差異顯著或極顯著（p＜ 0.05或p ＜ 0.01）。中藥組與空白組比較差異不顯著（p ＞ 0.05）。與冷應激對照組比較差異極顯著（p ＜ 0.01）。

3.4 復方中藥對冷應激雛雞抗氧化性能的影響

3.4.1 復方中藥對冷應激雛雞血液T-AOC含量的影響

由圖3-9可見，冷應激對照組T-AOC含量下降明顯，與空白組數(shù)據(jù)統(tǒng)計比較在14d、21d和35d時差異性極顯著（p ＜ 0.01）。中藥組雛雞血液內(nèi)總抗氧化能力值較空白組比較無統(tǒng)計學差異（p＞ 0.05）。

3.4.2 復方中藥對冷應激雛雞血液GSH-Px活性的影響

由圖3-10可知，實驗第14d 開始，冷應激對照組和中藥組與空白對照組進行統(tǒng)計學比較差異顯著或極顯著（p ＜ 0.05或p ＜0.01）。而中藥組的GSH-Px活性升高顯著，較冷應激對照組比較統(tǒng)計學差異顯著或極顯著（p ＜ 0.05或p ＜ 0.01）。

3.5 復方中藥對冷應激雛雞血液T3，T4含量的影響

由表3-6明顯看出，從14d開始至28d，冷應激對照組雛雞的T3含量明顯升高，與空白對照組統(tǒng)計學比較差異顯著或極顯著（p ＜ 0.05或P ＜ 0.01）。中藥組雛雞的T3含量未見明顯變化，與空白對照組比較差異不顯著（p ＞ 0.05）。與冷應激對照組比較差異極顯著（p ＜ 0.01）。

由表3-7看出，從14d開始至28d，冷應激對照組雛雞的T4含量升高，與空白對照組統(tǒng)計學比較差異顯著（p ＜ 0.05）。中藥組雛雞的T4含量未見明顯變化，與空白對照組比較差異不顯著（p ＞0.05）。與冷應激對照組比較差異顯著（p ＜ 0.05）。

4 討論

冷應激雛雞生長性能下降，免疫能力降低，機體抗氧化能力和激素調(diào)節(jié)水平下降。復方中藥能夠提高冷應激雛雞的免疫水平和抗氧化能力，促進雛雞生長。通過實驗表明復方中藥能夠保證雛雞在冷應激環(huán)境下正常生長。對家禽的養(yǎng)殖生產(chǎn)有一定的實際應用意義。