馮劍軍
摘 要:二十二碳六烯酸(DHA)、二十碳五烯酸(EPA)是人體血液中的兩種物質(zhì),對(duì)人體的健康有著重要的影響。因此,使用科學(xué)方法對(duì)血液中DHA,EPA進(jìn)行檢測(cè)是非常重要的。使用氣相色譜儀對(duì)血液中的DHA和EPA進(jìn)行檢測(cè)實(shí)驗(yàn),詳細(xì)介紹了實(shí)驗(yàn)材料、方法和結(jié)果,最終證實(shí),氣相色譜儀適用于檢測(cè)血液中的DHA和EPA。
關(guān)鍵詞:氣相色譜儀;血液;DHA;EPA
中圖分類號(hào):TQ016.51 文獻(xiàn)標(biāo)識(shí)碼:A 文章編號(hào):2095-6835(2014)03-0042-02
DHA,即二十二碳六烯酸,俗稱腦黃金,是一種對(duì)人體非常重要的不飽和脂肪酸,屬于Omega-3不飽和脂肪酸家族中的重要成員。EPA ,即二十碳五烯酸,是魚油的主要成分,屬于Ω-3系列多不飽和脂肪酸。目前測(cè)定這兩種脂肪酸的方法有很多種,而氣相色譜儀法是比較常用的一種。通過(guò)對(duì)氣相色譜儀測(cè)定血液中DHA,EPA含量進(jìn)行探討,以期更準(zhǔn)確地測(cè)定血液中DHA和EPA的含量。
1 實(shí)驗(yàn)材料的準(zhǔn)備
儀器:GC112A氣相色譜儀、WYB-Ⅱ靜音無(wú)油空氣泵、SPGN-ⅡA高純氮發(fā)生器、SPGH-300高純氫發(fā)生器、XH-B型漩渦混合器、CF-長(zhǎng)風(fēng)水浴箱、B600A型低速離心機(jī)、TFG-1200通風(fēng)柜。
試劑:甲醇、乙酸乙酯、正己烷等,均為分析純;DHA甲酯標(biāo)準(zhǔn)品、EPA甲酯標(biāo)準(zhǔn)品;內(nèi)標(biāo)溶液(1 mg/mL,正二十三碳烷酸無(wú)水乙醇溶液);鹽酸甲醇溶液(氯化鈉與濃硫酸反應(yīng),產(chǎn)生的氯化氫氣體導(dǎo)入甲醇中,經(jīng)標(biāo)定物質(zhì)的量濃度為1.3 mol/L)。
312名來(lái)我院產(chǎn)檢的孕婦,體檢未發(fā)現(xiàn)重大疾病,且無(wú)不良嗜好??崭钩槿§o脈血2 mL,及時(shí)分離血清,待檢。
2 實(shí)驗(yàn)方法與結(jié)果
2.1 色譜條件的選擇
毛細(xì)管柱:老化過(guò)后毛細(xì)管柱,型號(hào)FFAP,規(guī)格30 m(長(zhǎng))×0.25 mm(內(nèi)徑)×0.25μm(液膜厚度)。柱溫:初始180 ℃,保持3.0 min,然后2 ℃/min升至250 ℃;汽化室溫度260 ℃;檢測(cè)器溫度300 ℃;分流比1∶60;進(jìn)樣量1.0 μL。
2.2 樣品處理
用定量移液器取200 μL血清放入5 mL尖底具塞試管內(nèi),加入物質(zhì)的量濃度為4.5 mol/L的濃硫酸2滴酸化,加內(nèi)標(biāo)液10 μL,用漩渦混合器混合3 min;用乙酸乙酯漩渦混合提取2次(1 mL和0.5 mL),3 000 r/min離心3 min,合并提取液放入5 mL尖底具塞試管備用;把乙酸乙酯提取液用小流量高純氮?dú)獯蹈桑患尤胛镔|(zhì)的量濃度為1.3 mol/L的HCL-CH3OH溶液1 mL后密封,置60 ℃恒溫水浴箱中酯化30 min后,冷卻。加入分析純的正己烷1 mL,漩渦混合1 min,靜置3 min,提取正己烷層放置在5 mL尖底具塞試管內(nèi)備用,把正己烷提取液用小流量高純氮?dú)獯蹈桑?0 μL正己烷溶解。
2.3 應(yīng)用及評(píng)價(jià)
2.3.1 色譜分離條件的結(jié)果
經(jīng)過(guò)試驗(yàn),在色譜條件下人血清游離脂肪酸甲酯達(dá)到完全分離,互不干擾。
2.3.2 標(biāo)準(zhǔn)曲線配制
質(zhì)量濃度為1 mg/mL的脂肪酸混合標(biāo)準(zhǔn)溶液,分別用正己烷將DHA混合準(zhǔn)溶液稀釋成含50 μg/mL、125 μg/mL、250 μg/mL、500 μg/mL、750 μg/mL、1 000 μg/mL系列質(zhì)量濃度的標(biāo)準(zhǔn)溶液,將EPA混合準(zhǔn)溶液稀釋成含10 μg/mL、25 μg/mL、50 μg/mL、100 μg/mL、250 μg/mL系列質(zhì)量濃度的標(biāo)準(zhǔn)溶液。以各標(biāo)準(zhǔn)溶液的質(zhì)量濃度X(mg/mL)為橫坐標(biāo),對(duì)照品的峰面積Y為縱坐標(biāo)作圖,按內(nèi)標(biāo)法計(jì)算,得出標(biāo)準(zhǔn)曲線。結(jié)果DHA的標(biāo)準(zhǔn)曲線為Y=0.005X+0.004 5,R=0.998;EPA的標(biāo)準(zhǔn)曲線為Y= 0.0062X-0.003 6,R=0.996。
2.3.3 精密度實(shí)驗(yàn)
平行制備6份血清樣品,分別加入高、中、低質(zhì)量濃度(分別為250 μg/mL、100 μg/mL、50 μg/mL)的DHA甲酯、EPA甲酯混合標(biāo)準(zhǔn)溶液,1 d內(nèi)各重復(fù)測(cè)定5次,記錄色譜圖,按峰面積計(jì)算天內(nèi)RSD;每天測(cè)1次,共測(cè)5 d,計(jì)算天間RSD。結(jié)果見(jiàn)表1.
2.3.4 重復(fù)性實(shí)驗(yàn)
平行制備6份樣品,在1 d內(nèi)測(cè)定2次,按峰面積除以取樣量后所得值計(jì)算RSD。結(jié)果DHA甲酯和EPA甲酯含量的RSD分別為3.00%和2.89%,表明方法的重復(fù)性良好。
2.3.5 穩(wěn)定性實(shí)驗(yàn)
取同一份樣品,于開(kāi)始時(shí)、第一天、第三天、第五天進(jìn)行測(cè)定,按峰面積計(jì)算RSD。結(jié)果DHA甲酯和EPA甲酯的RSD分別為2.57%和2.62%,表明該樣品溶液至少5 d內(nèi)可以保持基本穩(wěn)定。
2.3.6 回收率實(shí)驗(yàn)
取已知含量的樣品9份平行分為3組,每組分別加入高、中、低3種質(zhì)量濃度DHA甲酯、EPA甲酯混合標(biāo)準(zhǔn)溶液,經(jīng)氣相色譜分析,按內(nèi)標(biāo)法計(jì)算,以測(cè)得量與添加量計(jì)算平均回收率。結(jié)果見(jiàn)表2.
2.3.7 DHA和EPA含量
取1 μL各樣品注入氣相色譜儀,以內(nèi)標(biāo)法計(jì)算DHA甲酯和EPA甲酯的含量。312名孕婦血液中DHA含量為(14.88±10.54)mg/L,變異系數(shù)(CV)為 31.56 %,EPA含量為(10.54±10.43)mg/L,CV為79.63%.
3 討論
脂肪酸的分析過(guò)程較為復(fù)雜,其中樣品的前期處理過(guò)程非常關(guān)鍵。衍生化過(guò)程中DHA、EPA的酯化效率決定了兩種物質(zhì)含量檢測(cè)的準(zhǔn)確度。目前脂肪酸酯化的方法有三氟化硼酯化法、甲醇—?dú)溲趸浭覝仵セ?、甲醇—?dú)溲趸c加熱回流酯化法和薄層層析法。此次采用了鹽酸/甲醇溶液酯化法,DHA、EPA的萃取效率高,可完全分離,互不干擾,保證了結(jié)果的準(zhǔn)確性。且以正二十三碳烷酸無(wú)水乙醇溶液為內(nèi)標(biāo),其保留時(shí)間與DHA,EPA相近,能夠準(zhǔn)確測(cè)定DHA,EPA含量。
這種方法精密度和重復(fù)性良好,短時(shí)間內(nèi)較穩(wěn)定,并且在加標(biāo)回收率試驗(yàn)中,DHA平均回收率為92.0%~93.6%,RSD為3.0%~3.6%,EPA的平均回收率為92.3%~94.0%,RSD為2.8%~4.0%,適用于人血液中DHA,EPA的檢測(cè)。
4 結(jié)束語(yǔ)
氣相色譜儀具有分析速度快、應(yīng)用范圍廣、分離效率和分析靈敏度高等優(yōu)點(diǎn),常用于測(cè)定血液中DHA和EPA的含量。結(jié)合一系列具體的實(shí)驗(yàn)研究,認(rèn)為氣相色譜儀適用于檢測(cè)血液中的DHA和EPA。相信這種方法在以后會(huì)得到普遍應(yīng)用。
參考文獻(xiàn)
[1]李慶民,陳桂范,高實(shí),等.氣相色譜外標(biāo)法測(cè)定魚油中EPA和DHA的含量[J].沈陽(yáng)藥科大學(xué)學(xué)報(bào),1996(04).
[2]楊玉林,芮振榮,潘希和.毛細(xì)管氣相色譜法分析雞蛋中DHA、EPA和亞麻酸的含量[J].上海預(yù)防醫(yī)學(xué)雜志,2001(04). 〔編輯:陳文強(qiáng)〕
摘 要:二十二碳六烯酸(DHA)、二十碳五烯酸(EPA)是人體血液中的兩種物質(zhì),對(duì)人體的健康有著重要的影響。因此,使用科學(xué)方法對(duì)血液中DHA,EPA進(jìn)行檢測(cè)是非常重要的。使用氣相色譜儀對(duì)血液中的DHA和EPA進(jìn)行檢測(cè)實(shí)驗(yàn),詳細(xì)介紹了實(shí)驗(yàn)材料、方法和結(jié)果,最終證實(shí),氣相色譜儀適用于檢測(cè)血液中的DHA和EPA。
關(guān)鍵詞:氣相色譜儀;血液;DHA;EPA
中圖分類號(hào):TQ016.51 文獻(xiàn)標(biāo)識(shí)碼:A 文章編號(hào):2095-6835(2014)03-0042-02
DHA,即二十二碳六烯酸,俗稱腦黃金,是一種對(duì)人體非常重要的不飽和脂肪酸,屬于Omega-3不飽和脂肪酸家族中的重要成員。EPA ,即二十碳五烯酸,是魚油的主要成分,屬于Ω-3系列多不飽和脂肪酸。目前測(cè)定這兩種脂肪酸的方法有很多種,而氣相色譜儀法是比較常用的一種。通過(guò)對(duì)氣相色譜儀測(cè)定血液中DHA,EPA含量進(jìn)行探討,以期更準(zhǔn)確地測(cè)定血液中DHA和EPA的含量。
1 實(shí)驗(yàn)材料的準(zhǔn)備
儀器:GC112A氣相色譜儀、WYB-Ⅱ靜音無(wú)油空氣泵、SPGN-ⅡA高純氮發(fā)生器、SPGH-300高純氫發(fā)生器、XH-B型漩渦混合器、CF-長(zhǎng)風(fēng)水浴箱、B600A型低速離心機(jī)、TFG-1200通風(fēng)柜。
試劑:甲醇、乙酸乙酯、正己烷等,均為分析純;DHA甲酯標(biāo)準(zhǔn)品、EPA甲酯標(biāo)準(zhǔn)品;內(nèi)標(biāo)溶液(1 mg/mL,正二十三碳烷酸無(wú)水乙醇溶液);鹽酸甲醇溶液(氯化鈉與濃硫酸反應(yīng),產(chǎn)生的氯化氫氣體導(dǎo)入甲醇中,經(jīng)標(biāo)定物質(zhì)的量濃度為1.3 mol/L)。
312名來(lái)我院產(chǎn)檢的孕婦,體檢未發(fā)現(xiàn)重大疾病,且無(wú)不良嗜好??崭钩槿§o脈血2 mL,及時(shí)分離血清,待檢。
2 實(shí)驗(yàn)方法與結(jié)果
2.1 色譜條件的選擇
毛細(xì)管柱:老化過(guò)后毛細(xì)管柱,型號(hào)FFAP,規(guī)格30 m(長(zhǎng))×0.25 mm(內(nèi)徑)×0.25μm(液膜厚度)。柱溫:初始180 ℃,保持3.0 min,然后2 ℃/min升至250 ℃;汽化室溫度260 ℃;檢測(cè)器溫度300 ℃;分流比1∶60;進(jìn)樣量1.0 μL。
2.2 樣品處理
用定量移液器取200 μL血清放入5 mL尖底具塞試管內(nèi),加入物質(zhì)的量濃度為4.5 mol/L的濃硫酸2滴酸化,加內(nèi)標(biāo)液10 μL,用漩渦混合器混合3 min;用乙酸乙酯漩渦混合提取2次(1 mL和0.5 mL),3 000 r/min離心3 min,合并提取液放入5 mL尖底具塞試管備用;把乙酸乙酯提取液用小流量高純氮?dú)獯蹈?;加入物質(zhì)的量濃度為1.3 mol/L的HCL-CH3OH溶液1 mL后密封,置60 ℃恒溫水浴箱中酯化30 min后,冷卻。加入分析純的正己烷1 mL,漩渦混合1 min,靜置3 min,提取正己烷層放置在5 mL尖底具塞試管內(nèi)備用,把正己烷提取液用小流量高純氮?dú)獯蹈?,?0 μL正己烷溶解。
2.3 應(yīng)用及評(píng)價(jià)
2.3.1 色譜分離條件的結(jié)果
經(jīng)過(guò)試驗(yàn),在色譜條件下人血清游離脂肪酸甲酯達(dá)到完全分離,互不干擾。
2.3.2 標(biāo)準(zhǔn)曲線配制
質(zhì)量濃度為1 mg/mL的脂肪酸混合標(biāo)準(zhǔn)溶液,分別用正己烷將DHA混合準(zhǔn)溶液稀釋成含50 μg/mL、125 μg/mL、250 μg/mL、500 μg/mL、750 μg/mL、1 000 μg/mL系列質(zhì)量濃度的標(biāo)準(zhǔn)溶液,將EPA混合準(zhǔn)溶液稀釋成含10 μg/mL、25 μg/mL、50 μg/mL、100 μg/mL、250 μg/mL系列質(zhì)量濃度的標(biāo)準(zhǔn)溶液。以各標(biāo)準(zhǔn)溶液的質(zhì)量濃度X(mg/mL)為橫坐標(biāo),對(duì)照品的峰面積Y為縱坐標(biāo)作圖,按內(nèi)標(biāo)法計(jì)算,得出標(biāo)準(zhǔn)曲線。結(jié)果DHA的標(biāo)準(zhǔn)曲線為Y=0.005X+0.004 5,R=0.998;EPA的標(biāo)準(zhǔn)曲線為Y= 0.0062X-0.003 6,R=0.996。
2.3.3 精密度實(shí)驗(yàn)
平行制備6份血清樣品,分別加入高、中、低質(zhì)量濃度(分別為250 μg/mL、100 μg/mL、50 μg/mL)的DHA甲酯、EPA甲酯混合標(biāo)準(zhǔn)溶液,1 d內(nèi)各重復(fù)測(cè)定5次,記錄色譜圖,按峰面積計(jì)算天內(nèi)RSD;每天測(cè)1次,共測(cè)5 d,計(jì)算天間RSD。結(jié)果見(jiàn)表1.
2.3.4 重復(fù)性實(shí)驗(yàn)
平行制備6份樣品,在1 d內(nèi)測(cè)定2次,按峰面積除以取樣量后所得值計(jì)算RSD。結(jié)果DHA甲酯和EPA甲酯含量的RSD分別為3.00%和2.89%,表明方法的重復(fù)性良好。
2.3.5 穩(wěn)定性實(shí)驗(yàn)
取同一份樣品,于開(kāi)始時(shí)、第一天、第三天、第五天進(jìn)行測(cè)定,按峰面積計(jì)算RSD。結(jié)果DHA甲酯和EPA甲酯的RSD分別為2.57%和2.62%,表明該樣品溶液至少5 d內(nèi)可以保持基本穩(wěn)定。
2.3.6 回收率實(shí)驗(yàn)
取已知含量的樣品9份平行分為3組,每組分別加入高、中、低3種質(zhì)量濃度DHA甲酯、EPA甲酯混合標(biāo)準(zhǔn)溶液,經(jīng)氣相色譜分析,按內(nèi)標(biāo)法計(jì)算,以測(cè)得量與添加量計(jì)算平均回收率。結(jié)果見(jiàn)表2.
2.3.7 DHA和EPA含量
取1 μL各樣品注入氣相色譜儀,以內(nèi)標(biāo)法計(jì)算DHA甲酯和EPA甲酯的含量。312名孕婦血液中DHA含量為(14.88±10.54)mg/L,變異系數(shù)(CV)為 31.56 %,EPA含量為(10.54±10.43)mg/L,CV為79.63%.
3 討論
脂肪酸的分析過(guò)程較為復(fù)雜,其中樣品的前期處理過(guò)程非常關(guān)鍵。衍生化過(guò)程中DHA、EPA的酯化效率決定了兩種物質(zhì)含量檢測(cè)的準(zhǔn)確度。目前脂肪酸酯化的方法有三氟化硼酯化法、甲醇—?dú)溲趸浭覝仵セ?、甲醇—?dú)溲趸c加熱回流酯化法和薄層層析法。此次采用了鹽酸/甲醇溶液酯化法,DHA、EPA的萃取效率高,可完全分離,互不干擾,保證了結(jié)果的準(zhǔn)確性。且以正二十三碳烷酸無(wú)水乙醇溶液為內(nèi)標(biāo),其保留時(shí)間與DHA,EPA相近,能夠準(zhǔn)確測(cè)定DHA,EPA含量。
這種方法精密度和重復(fù)性良好,短時(shí)間內(nèi)較穩(wěn)定,并且在加標(biāo)回收率試驗(yàn)中,DHA平均回收率為92.0%~93.6%,RSD為3.0%~3.6%,EPA的平均回收率為92.3%~94.0%,RSD為2.8%~4.0%,適用于人血液中DHA,EPA的檢測(cè)。
4 結(jié)束語(yǔ)
氣相色譜儀具有分析速度快、應(yīng)用范圍廣、分離效率和分析靈敏度高等優(yōu)點(diǎn),常用于測(cè)定血液中DHA和EPA的含量。結(jié)合一系列具體的實(shí)驗(yàn)研究,認(rèn)為氣相色譜儀適用于檢測(cè)血液中的DHA和EPA。相信這種方法在以后會(huì)得到普遍應(yīng)用。
參考文獻(xiàn)
[1]李慶民,陳桂范,高實(shí),等.氣相色譜外標(biāo)法測(cè)定魚油中EPA和DHA的含量[J].沈陽(yáng)藥科大學(xué)學(xué)報(bào),1996(04).
[2]楊玉林,芮振榮,潘希和.毛細(xì)管氣相色譜法分析雞蛋中DHA、EPA和亞麻酸的含量[J].上海預(yù)防醫(yī)學(xué)雜志,2001(04). 〔編輯:陳文強(qiáng)〕
摘 要:二十二碳六烯酸(DHA)、二十碳五烯酸(EPA)是人體血液中的兩種物質(zhì),對(duì)人體的健康有著重要的影響。因此,使用科學(xué)方法對(duì)血液中DHA,EPA進(jìn)行檢測(cè)是非常重要的。使用氣相色譜儀對(duì)血液中的DHA和EPA進(jìn)行檢測(cè)實(shí)驗(yàn),詳細(xì)介紹了實(shí)驗(yàn)材料、方法和結(jié)果,最終證實(shí),氣相色譜儀適用于檢測(cè)血液中的DHA和EPA。
關(guān)鍵詞:氣相色譜儀;血液;DHA;EPA
中圖分類號(hào):TQ016.51 文獻(xiàn)標(biāo)識(shí)碼:A 文章編號(hào):2095-6835(2014)03-0042-02
DHA,即二十二碳六烯酸,俗稱腦黃金,是一種對(duì)人體非常重要的不飽和脂肪酸,屬于Omega-3不飽和脂肪酸家族中的重要成員。EPA ,即二十碳五烯酸,是魚油的主要成分,屬于Ω-3系列多不飽和脂肪酸。目前測(cè)定這兩種脂肪酸的方法有很多種,而氣相色譜儀法是比較常用的一種。通過(guò)對(duì)氣相色譜儀測(cè)定血液中DHA,EPA含量進(jìn)行探討,以期更準(zhǔn)確地測(cè)定血液中DHA和EPA的含量。
1 實(shí)驗(yàn)材料的準(zhǔn)備
儀器:GC112A氣相色譜儀、WYB-Ⅱ靜音無(wú)油空氣泵、SPGN-ⅡA高純氮發(fā)生器、SPGH-300高純氫發(fā)生器、XH-B型漩渦混合器、CF-長(zhǎng)風(fēng)水浴箱、B600A型低速離心機(jī)、TFG-1200通風(fēng)柜。
試劑:甲醇、乙酸乙酯、正己烷等,均為分析純;DHA甲酯標(biāo)準(zhǔn)品、EPA甲酯標(biāo)準(zhǔn)品;內(nèi)標(biāo)溶液(1 mg/mL,正二十三碳烷酸無(wú)水乙醇溶液);鹽酸甲醇溶液(氯化鈉與濃硫酸反應(yīng),產(chǎn)生的氯化氫氣體導(dǎo)入甲醇中,經(jīng)標(biāo)定物質(zhì)的量濃度為1.3 mol/L)。
312名來(lái)我院產(chǎn)檢的孕婦,體檢未發(fā)現(xiàn)重大疾病,且無(wú)不良嗜好。空腹抽取靜脈血2 mL,及時(shí)分離血清,待檢。
2 實(shí)驗(yàn)方法與結(jié)果
2.1 色譜條件的選擇
毛細(xì)管柱:老化過(guò)后毛細(xì)管柱,型號(hào)FFAP,規(guī)格30 m(長(zhǎng))×0.25 mm(內(nèi)徑)×0.25μm(液膜厚度)。柱溫:初始180 ℃,保持3.0 min,然后2 ℃/min升至250 ℃;汽化室溫度260 ℃;檢測(cè)器溫度300 ℃;分流比1∶60;進(jìn)樣量1.0 μL。
2.2 樣品處理
用定量移液器取200 μL血清放入5 mL尖底具塞試管內(nèi),加入物質(zhì)的量濃度為4.5 mol/L的濃硫酸2滴酸化,加內(nèi)標(biāo)液10 μL,用漩渦混合器混合3 min;用乙酸乙酯漩渦混合提取2次(1 mL和0.5 mL),3 000 r/min離心3 min,合并提取液放入5 mL尖底具塞試管備用;把乙酸乙酯提取液用小流量高純氮?dú)獯蹈?;加入物質(zhì)的量濃度為1.3 mol/L的HCL-CH3OH溶液1 mL后密封,置60 ℃恒溫水浴箱中酯化30 min后,冷卻。加入分析純的正己烷1 mL,漩渦混合1 min,靜置3 min,提取正己烷層放置在5 mL尖底具塞試管內(nèi)備用,把正己烷提取液用小流量高純氮?dú)獯蹈桑?0 μL正己烷溶解。
2.3 應(yīng)用及評(píng)價(jià)
2.3.1 色譜分離條件的結(jié)果
經(jīng)過(guò)試驗(yàn),在色譜條件下人血清游離脂肪酸甲酯達(dá)到完全分離,互不干擾。
2.3.2 標(biāo)準(zhǔn)曲線配制
質(zhì)量濃度為1 mg/mL的脂肪酸混合標(biāo)準(zhǔn)溶液,分別用正己烷將DHA混合準(zhǔn)溶液稀釋成含50 μg/mL、125 μg/mL、250 μg/mL、500 μg/mL、750 μg/mL、1 000 μg/mL系列質(zhì)量濃度的標(biāo)準(zhǔn)溶液,將EPA混合準(zhǔn)溶液稀釋成含10 μg/mL、25 μg/mL、50 μg/mL、100 μg/mL、250 μg/mL系列質(zhì)量濃度的標(biāo)準(zhǔn)溶液。以各標(biāo)準(zhǔn)溶液的質(zhì)量濃度X(mg/mL)為橫坐標(biāo),對(duì)照品的峰面積Y為縱坐標(biāo)作圖,按內(nèi)標(biāo)法計(jì)算,得出標(biāo)準(zhǔn)曲線。結(jié)果DHA的標(biāo)準(zhǔn)曲線為Y=0.005X+0.004 5,R=0.998;EPA的標(biāo)準(zhǔn)曲線為Y= 0.0062X-0.003 6,R=0.996。
2.3.3 精密度實(shí)驗(yàn)
平行制備6份血清樣品,分別加入高、中、低質(zhì)量濃度(分別為250 μg/mL、100 μg/mL、50 μg/mL)的DHA甲酯、EPA甲酯混合標(biāo)準(zhǔn)溶液,1 d內(nèi)各重復(fù)測(cè)定5次,記錄色譜圖,按峰面積計(jì)算天內(nèi)RSD;每天測(cè)1次,共測(cè)5 d,計(jì)算天間RSD。結(jié)果見(jiàn)表1.
2.3.4 重復(fù)性實(shí)驗(yàn)
平行制備6份樣品,在1 d內(nèi)測(cè)定2次,按峰面積除以取樣量后所得值計(jì)算RSD。結(jié)果DHA甲酯和EPA甲酯含量的RSD分別為3.00%和2.89%,表明方法的重復(fù)性良好。
2.3.5 穩(wěn)定性實(shí)驗(yàn)
取同一份樣品,于開(kāi)始時(shí)、第一天、第三天、第五天進(jìn)行測(cè)定,按峰面積計(jì)算RSD。結(jié)果DHA甲酯和EPA甲酯的RSD分別為2.57%和2.62%,表明該樣品溶液至少5 d內(nèi)可以保持基本穩(wěn)定。
2.3.6 回收率實(shí)驗(yàn)
取已知含量的樣品9份平行分為3組,每組分別加入高、中、低3種質(zhì)量濃度DHA甲酯、EPA甲酯混合標(biāo)準(zhǔn)溶液,經(jīng)氣相色譜分析,按內(nèi)標(biāo)法計(jì)算,以測(cè)得量與添加量計(jì)算平均回收率。結(jié)果見(jiàn)表2.
2.3.7 DHA和EPA含量
取1 μL各樣品注入氣相色譜儀,以內(nèi)標(biāo)法計(jì)算DHA甲酯和EPA甲酯的含量。312名孕婦血液中DHA含量為(14.88±10.54)mg/L,變異系數(shù)(CV)為 31.56 %,EPA含量為(10.54±10.43)mg/L,CV為79.63%.
3 討論
脂肪酸的分析過(guò)程較為復(fù)雜,其中樣品的前期處理過(guò)程非常關(guān)鍵。衍生化過(guò)程中DHA、EPA的酯化效率決定了兩種物質(zhì)含量檢測(cè)的準(zhǔn)確度。目前脂肪酸酯化的方法有三氟化硼酯化法、甲醇—?dú)溲趸浭覝仵セā⒓状肌獨(dú)溲趸c加熱回流酯化法和薄層層析法。此次采用了鹽酸/甲醇溶液酯化法,DHA、EPA的萃取效率高,可完全分離,互不干擾,保證了結(jié)果的準(zhǔn)確性。且以正二十三碳烷酸無(wú)水乙醇溶液為內(nèi)標(biāo),其保留時(shí)間與DHA,EPA相近,能夠準(zhǔn)確測(cè)定DHA,EPA含量。
這種方法精密度和重復(fù)性良好,短時(shí)間內(nèi)較穩(wěn)定,并且在加標(biāo)回收率試驗(yàn)中,DHA平均回收率為92.0%~93.6%,RSD為3.0%~3.6%,EPA的平均回收率為92.3%~94.0%,RSD為2.8%~4.0%,適用于人血液中DHA,EPA的檢測(cè)。
4 結(jié)束語(yǔ)
氣相色譜儀具有分析速度快、應(yīng)用范圍廣、分離效率和分析靈敏度高等優(yōu)點(diǎn),常用于測(cè)定血液中DHA和EPA的含量。結(jié)合一系列具體的實(shí)驗(yàn)研究,認(rèn)為氣相色譜儀適用于檢測(cè)血液中的DHA和EPA。相信這種方法在以后會(huì)得到普遍應(yīng)用。
參考文獻(xiàn)
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[2]楊玉林,芮振榮,潘希和.毛細(xì)管氣相色譜法分析雞蛋中DHA、EPA和亞麻酸的含量[J].上海預(yù)防醫(yī)學(xué)雜志,2001(04). 〔編輯:陳文強(qiáng)〕