陳旭明 謝鵬飛 史秋盛

（江蘇省溧陽(yáng)市竹簀鎮(zhèn)畜牧獸醫(yī)站，江蘇溧陽(yáng) 213300）

1 實(shí)驗(yàn)準(zhǔn)備

1.1 軟骨細(xì)胞來(lái)源

原代犬關(guān)節(jié)軟骨細(xì)胞進(jìn)行細(xì)胞擴(kuò)增培養(yǎng)。

1.2 試劑

DMEM/F12培養(yǎng)基，胰蛋白酶，無(wú)水乙醇，MTT，環(huán)丙沙星鹽酸鹽等。

2 實(shí)驗(yàn)方法

MTT法檢測(cè)環(huán)丙沙星對(duì)軟骨細(xì)胞增殖的影響：取第3代軟骨細(xì)胞104個(gè)/ml密度接種于96孔板，置于CO2培養(yǎng)箱培養(yǎng)。待細(xì)胞貼壁后換液培養(yǎng)3 d，加入0.05、0.10、0.15g/L濃度的環(huán)丙沙星，于24 h、72 h、120 h檢測(cè)，測(cè)定前4 h棄去舊培養(yǎng)液，加入100 μl無(wú)血清DMEM/F12培養(yǎng)液（含5 g/L的MTT10μl），37℃培養(yǎng)箱內(nèi)孵育4 h，棄去MTT，加入150 μl無(wú)水乙醇，振蕩10 min，選取490 nm波長(zhǎng)，用酶標(biāo)儀讀取OD值，記錄數(shù)據(jù)。

3 實(shí)驗(yàn)結(jié)果

軟骨細(xì)胞中加入環(huán)丙沙星后，與對(duì)照組相比，軟骨細(xì)胞增殖受到明顯的抑制作用，隨時(shí)間延長(zhǎng)抑制作用增大，隨著劑量增大抑制作用增大（詳見(jiàn)表1和圖1），從表中和圖中均可以看出，0.15 g/L濃度的環(huán)丙沙星抑制軟骨細(xì)胞增殖作用最大。

表1 環(huán)丙沙星對(duì)軟骨細(xì)胞增殖的影響

圖1 環(huán)丙沙星對(duì)軟骨細(xì)胞增殖的影響

4 實(shí)驗(yàn)討論

目前，對(duì)QNs的軟骨毒性是否會(huì)影響兒童生長(zhǎng)發(fā)育，是個(gè)爭(zhēng)議較大的問(wèn)題，國(guó)內(nèi)外眾多的動(dòng)物實(shí)驗(yàn)結(jié)果均表明QNs確實(shí)對(duì)幼齡動(dòng)物負(fù)重關(guān)節(jié)軟骨有損傷作用，其損傷程度與動(dòng)物的年齡和藥物濃度有關(guān)，年齡越小藥物濃度越大，關(guān)節(jié)軟骨損傷越嚴(yán)重[1，2]。并且在同等濃度下，環(huán)丙沙星對(duì)犬軟骨細(xì)胞生長(zhǎng)抑制率隨培養(yǎng)時(shí)間的延長(zhǎng)而增高[3]。

通過(guò)本實(shí)驗(yàn)證實(shí)0.05、0.10、0.15g/L濃度的環(huán)丙沙星對(duì)體外培養(yǎng)的犬軟骨細(xì)胞具有抑制生長(zhǎng)的作用，抑制作用呈劑量依賴性和時(shí)間依賴性。隨著時(shí)間延長(zhǎng)，抑制作用增強(qiáng)；隨著劑量增加，抑制作用增強(qiáng)。

[1] 曲芬，姜素椿，王力娜，等.環(huán)丙沙星對(duì)胎兒軟骨發(fā)育的影響[J].中華內(nèi)科雜志，1998，37（4）：239.

[2] Stahlmann R，ZippelU，F(xiàn)orster C，et al.Chondrotoxicity and toxicokinetics of sparfloxacin in juvenile rats[J].Antimicrob Agents Chemother，1998，42（6）：1470.

[3] 劉健，魏莉，王永秀，等.喹諾酮類藥物不良反應(yīng)回顧性分析[J].醫(yī)學(xué)理論與實(shí)踐，2007，20（5）：561-562.