臺凡力 陳民傭

（廣東湛江農(nóng)墾畜牧有限公司，廣東湛江 524022）

2013年廣東省湛江市規(guī)?；i場PRRSV免疫抗體的監(jiān)測結(jié)果

臺凡力 陳民傭

（廣東湛江農(nóng)墾畜牧有限公司，廣東湛江 524022）

為了解廣東省湛江市規(guī)?；i場中豬繁殖與呼吸綜合征的防控狀況，2013年對廣東省湛江市8個規(guī)?；i場進(jìn)行豬繁殖與呼吸綜合征病毒免疫抗體的監(jiān)測。共采集樣品血清802份，采用ELISA的方法進(jìn)行檢測。結(jié)果顯示，2013年4月、8月和12月豬繁殖與呼吸綜合征病毒免疫抗體的合格率分別為88.85%、79.48%和81.75%，抗體離散度分別是39.70%、49.60%和67.95%；全年免疫抗體合格率為83.29%。可見2013年廣東省湛江市規(guī)?；i場中豬繁殖與呼吸綜合征病毒的免疫抗體合格率雖高，但疫苗免疫效果不理想，防控形勢比較嚴(yán)峻。

豬繁殖與呼吸綜合征；抗體監(jiān)測；廣東湛江；抗體離散度

豬繁殖與呼吸綜合征（PRRS）是由豬繁殖與呼吸綜合征病毒（PRRSV）引起的豬的一種繁殖障礙和呼吸道炎癥的傳染病[1]。其臨床特征為厭食、發(fā)熱；母豬繁殖障礙，懷孕期發(fā)生大批流產(chǎn)，產(chǎn)死胎和木乃伊胎；仔豬與育成豬發(fā)生嚴(yán)重的呼吸道癥狀及高死亡率。

PRRSV主要侵害豬的巨噬細(xì)胞，極易感染和損傷免疫器官，致使機(jī)體免疫功能降低，使患病豬極易繼發(fā)各種疾病。本病1987年首先在美國被發(fā)現(xiàn)，1995年侵入我國，1996-1998年在我國養(yǎng)豬業(yè)出現(xiàn)流產(chǎn)風(fēng)暴，2001-2002年在我國南方地區(qū)再次流行，給我國的養(yǎng)豬業(yè)帶來災(zāi)難性的打擊。PRRS被世界動物衛(wèi)生組織（OIE）列為B類傳染病，我國將其列為二類傳染病。目前對該病的控制主要是通過接種疫苗，因此對該病抗體的監(jiān)控已經(jīng)成為規(guī)?；i場控制該病的重要措施。為了了解廣東省湛江市PRRS的防控狀況，筆者于2013年對廣東省湛江市8個規(guī)?；i場802份血清進(jìn)行抗體檢測，為該市有效控制PRRS提供了科學(xué)依據(jù)。

1 材料和方法

1.1 材料

1.1.1 血清來源

2013年4月、8月和12月，分明從廣東省湛江市各縣市的8個規(guī)?；i場采集共802份血清。要求樣品必須來源于經(jīng)產(chǎn)母豬。

1.1.2 試劑

豬繁殖與呼吸綜合征病毒抗體檢測試劑盒（PRRS X3 Ab），美國IDEXX公司生產(chǎn)。

1.1.3 儀器設(shè)備

MK3酶標(biāo)儀、MK2自動洗板儀、MILLI-Q-A超純水機(jī)、單道微量移液器、多道微量移液器、渦旋混合儀等。

1.2 方法

1.2.1 樣品采集

采取隨機(jī)抽樣的方法，每個豬場一次采血不低于30份。血樣采集后及時進(jìn)行常規(guī)血清分離，冷凍備檢。

1.2.2 抗體測定

取10μL血清，利用豬繁殖與呼吸綜合征病毒抗體檢測試劑盒進(jìn)行抗體檢測。按照試劑盒說明書上的操作程序進(jìn)行操作，在630 nm處測定樣本以及對照品的吸光度值（OD630）。只有陰性對照的平均OD630小于等于0.150，陽性對照的平均值減去陰性對照的平均值大于或等于0.150時，該檢測結(jié)果才有效。如果被檢樣品阻斷率大于或等于40%，該樣本被判為抗體陽性，即有PRRSV抗體存在；如果被檢樣品的阻斷率小于或等于30%，該樣本就被判為抗體陰性，即無PRRSV抗體存在；如果被檢樣品的阻斷率在30%～40%之間，就應(yīng)在數(shù)日后再對該豬只個體進(jìn)行重測，如果重測結(jié)果仍可疑，就使用血清中和試驗(yàn)方法進(jìn)行確認(rèn)。

1.2.3 離散度分析

離散度（CV）采用變異系數(shù)表示。如果被檢豬場PRRSV抗體的離散度小于或等于40%，則認(rèn)為該豬場PRRSV抗體水平比較整齊，免疫效果比較確實(shí)。反之，如果該場的離散度大于40%，則認(rèn)為該豬場的PRRSV抗體水平參差不齊，免疫效果不理想。

2 結(jié)果與分析

2013年廣東省湛江市PRRSV免疫抗體的監(jiān)測結(jié)果見表1。

由表1可見，2013年4月監(jiān)測的PRRSV免疫抗體總體水平較好，免疫合格率高達(dá)88.85%。在參與調(diào)查的8個場中，其中6個場的免疫抗體合格率都達(dá)到90.00%以上。8個場的抗體離散度為39.70%，小于40%。通過以上數(shù)據(jù)可以判斷，這一時期廣東省湛江市PRRS的免疫工作比較到位，PRRSV抗體水平比較整齊，免疫效果確實(shí)，沒有發(fā)現(xiàn)PRRSV抗體阻斷率S/P≥3.0的樣品。在這一時期的監(jiān)測中，監(jiān)測結(jié)果最理想的是1號和8號規(guī)?；i場，這兩個豬場的免疫抗體合格率都達(dá)到了100%，并且抗體離散度很低，分別為21.49%和19.24%；最不理想的是3號規(guī)模化豬場，免疫抗體合格率只有50%，同時抗體離散度非常高，達(dá)到92.22%。

2013年8月監(jiān)測的PRRSV免疫抗體總體水平一般，免疫合格率高達(dá)79.48%。在參與調(diào)查的8個場中，其中3個場的免疫抗體合格率都達(dá)到90.00%以上。8個場的抗體離散度為49.60%，大于40%。通過以上數(shù)據(jù)可以判斷，這一時期廣東省湛江市PRRS的免疫工作成果不夠理想，PRRSV抗體水平不整齊，免疫效果不確實(shí)，沒有發(fā)現(xiàn)PRRSV抗體阻斷率S/P≥3.0的樣品。在這一時期的監(jiān)測中，監(jiān)測結(jié)果最理想的是2號規(guī)?；i場，這個場的免疫抗體合格率達(dá)到了100%，并且抗體離散度很低，為19.94%。在2013年4月監(jiān)測的最理想的兩個場中，1號和8號規(guī)?；i場的抗體水平下降都非常明顯。特別是1號場，免疫抗體合格率由4月的100 %下降到53.33%。3號場抗體合格率略有回升，但是仍然不理想，免疫抗體合格率為66.67%，抗體離散度略有下降，為63.22%。

表 1 2013 年廣東省湛江市PRRSV免疫抗體的監(jiān)測結(jié)果

2013年12月監(jiān)測的PRRSV免疫抗體總體水平一般，免疫合格率高達(dá)81.75%。在參與調(diào)查的8個場中，其中3個場的免疫抗體合格率都達(dá)到90.00%以上。8個場的抗體離散度為67.95%，大于40%。通過以上數(shù)據(jù)可以判斷，這一時期廣東省湛江市PRRS的免疫工作不夠理想，PRRSV抗體不整齊，免疫效果不確實(shí)。6個規(guī)?；i場都發(fā)現(xiàn)了PRRS抗體阻斷率S/P≥3.0的樣品。在實(shí)際生產(chǎn)中，現(xiàn)有的診斷試劑盒還不能區(qū)分野毒和疫苗毒所產(chǎn)生的抗體，但一般認(rèn)為現(xiàn)有的疫苗干預(yù)所能產(chǎn)生抗體的阻斷率都小于3.0。因此當(dāng)樣品的阻斷率超過3.0時，我們將其判為野毒感染。在這一時期的監(jiān)測中，參與調(diào)查的8個場中有6個場疑似有野毒活動，所以各個規(guī)?；i場的監(jiān)測結(jié)果都不理想。1號規(guī)?；i場免疫抗體合格率雖然達(dá)到了100%，并且抗體離散度很低，僅為20.14%，但是其S/P≥3.0的數(shù)量達(dá)到了25頭，占抽樣比率的78.13%，因此判斷這次檢測到的抗體為野毒和疫苗毒共同產(chǎn)生的抗體。另外2號場、6號場的情況和1號場類似，免疫抗體合格率雖高，但是有野毒存在。5號場和8號場雖然沒有出現(xiàn)抗體阻斷率S/P≥3.0的情況，但是其抗體合格率和離散度都是一般水平。

2013年全年監(jiān)測的PRRSV免疫抗體總體水平良好，免疫抗體合格率高達(dá)83.29%。但是，免疫抗體合格率雖高，但抗體離散度不理想，平均值高達(dá)52.42%，高于40%，說明在2013年廣東省湛江市對PRRS免疫抗體的人為干預(yù)效果不理想，PRRS的防控形勢比較嚴(yán)峻。

3 討論

3.1 抗體依賴性增強(qiáng)作用

PRRS感染的一個重要特點(diǎn)就是抗體依賴性增強(qiáng)作用（Antibody dependent enhancement，ADE），即無論在體內(nèi)或者體外的試驗(yàn)條件下，PRRSV抗體的存在可介導(dǎo)和加強(qiáng)感染，而不是保護(hù)[2]。因此，單單通過血清抗體來評估PRRSV疫苗的免疫效果不科學(xué)，但可以通過檢測PRRSV N蛋白的抗體水平來監(jiān)測群體中PRRSV的活躍程度。

例如參與調(diào)查的1號場，一年當(dāng)中抗體變化非常明顯，4月時免疫抗體合格率為100%，8月時則下降到53.3%，12月時又重新回到100%，離散度由21.49%上升到69.04%，又重新下降到20.14%。如果該場從4—8月都沒有接種疫苗，基本就可以斷定1號場內(nèi)PRRS野毒非常活躍，隨時都可能暴發(fā)。更細(xì)致地又可以分為兩個階段，如果在7、8月都沒有接種疫苗，則8月的監(jiān)測結(jié)果說明疑似有野毒干擾，或者疫苗效價衰減比較迅速。如果在8—11月沒有接種疫苗，則從12月的監(jiān)測結(jié)果看基本可以斷定有野毒干擾。

再如2號場，一年當(dāng)中免疫抗體合格率變化不大，變化幅度在10%以內(nèi)，但是抗體離散度變化非常明顯，從49.90%下降至19.14%，又重新升至59.04%。如果在4—8月之間接種過疫苗，說明這次接種疫苗的質(zhì)量非常好，對PRRSV的干擾作用非常有效；如果這期間沒有接種過疫苗，基本可以斷定是野毒的干擾。如果在8—12月之間接種過疫苗，說明疫苗質(zhì)量非常差，甚至有散毒的可能；如果沒有接種過疫苗，則說明疫苗的效價衰減比較迅速。因此對于PRRSV來說，全年的監(jiān)控非常重要。

3.2 監(jiān)測方法

目前臨床上監(jiān)測PRRSV抗體多采用間接酶聯(lián)免疫吸附試驗(yàn)（ELISA）的方法。國內(nèi)外很多生物制品廠家都生產(chǎn)檢測PRRSV抗體的試劑盒，但是質(zhì)量參差不齊。錢歡和唐利[2]對市場一些常見的試劑盒做了對比試驗(yàn)，發(fā)現(xiàn)美國IDXX公司生產(chǎn)的PRRSV抗體檢測試劑盒的重復(fù)性和一致性比較高，適用于發(fā)病診斷和疫病預(yù)警。馬超峰等[3]也對市場一些常見的試劑盒做了對比試驗(yàn)，結(jié)果是美國IDXX公司生產(chǎn)的PRRSV抗體檢測試劑盒具有較高的敏感性和特異性，可以作為檢測PRRSV的首選試劑盒。IDEXX的PRRSV抗體ELISA檢測試劑盒是用重組的PRRSV抗原包被微量反應(yīng)板，利用ELISA原理來檢測豬血清或血漿中的PRRSV抗體。該試劑盒具有較高的重現(xiàn)性、敏感性和特異性，檢測結(jié)果可靠。所以筆者認(rèn)為，本試驗(yàn)對廣東省湛江市規(guī)?；i場的檢測結(jié)果比較可靠。

3.3 樣品來源

之所以只選擇經(jīng)產(chǎn)母豬作為樣品來源，是因?yàn)橹饕紤]了以下幾種因素。

首先是公豬?，F(xiàn)在的規(guī)模化豬場基本采用人工授精，公豬集中在公豬站，種豬場內(nèi)飼養(yǎng)的數(shù)量極少。同時由于公豬很精貴，飼養(yǎng)管理和免疫工作做得比較到位。一般情況下，公豬的免疫抗體水平要高于母豬群的免疫抗體平均水平，因此公豬的免疫抗體水平不能代表一個豬場的免疫水平。

其次是產(chǎn)房仔豬、保育豬和育肥豬?，F(xiàn)在規(guī)模化豬場都采用多點(diǎn)式飼養(yǎng)、仔豬單相流動、全進(jìn)全出的管理模式，一般情況下育肥豬上市前在種豬場只能免疫PRRSV疫苗1～2次。從免疫學(xué)的角度考慮，經(jīng)過1～2次免疫后的動物機(jī)體還處于基礎(chǔ)免疫狀態(tài)，免疫抗體還不能達(dá)到理想的水平。同時很少有豬場監(jiān)測母源抗體，并根據(jù)母源抗體的消長規(guī)律來制定免疫程序，多數(shù)都是根據(jù)經(jīng)驗(yàn)給仔豬在15日齡左右首次免疫。在這個時期免疫，母源抗體還處在一個比較高的水平，因此免疫抗體受母源抗體的干擾也會比較嚴(yán)重。而經(jīng)產(chǎn)母豬一般都經(jīng)過3次以上的疫苗接種，受母源抗體的影響相對較小。綜上所述，產(chǎn)房仔豬、保育豬和育肥豬的PRRSV抗體水平要低于經(jīng)產(chǎn)母豬的抗體水平，因此它們的免疫抗體水平也不能代表豬場的免疫抗體水平。

最后是后備豬?，F(xiàn)在的規(guī)?；i場在引進(jìn)后備豬的時候，都有一個嚴(yán)格隔離馴化的程序，在隔離馴化的過程中，一般都會加打兩次PRRS疫苗，并且做嚴(yán)格的檢疫，直到引進(jìn)后備豬的抗體水平達(dá)標(biāo)，才讓它們混群[4]，因此后備豬的PRRSV免疫抗體水平會略高于經(jīng)產(chǎn)母豬的免疫抗體水平，所以也不能代表豬場的實(shí)際免疫狀態(tài)。只有經(jīng)產(chǎn)母豬，它們一般都在豬場呆3～5年，每年免疫2～4次，它們的PRRS免疫抗體水平才可以真實(shí)反映出一個豬場的免疫水平。

3.4 樣品數(shù)量

現(xiàn)在規(guī)?；i場母豬存欄相對比較多，一般都超過300頭以上，按照常用的10%～20%的采樣標(biāo)準(zhǔn)來采樣，所需樣品數(shù)量比較大。筆者選擇采用生物統(tǒng)計(jì)學(xué)的方法來確定樣本含量。根據(jù)PRRSV抗體檢測試劑盒的特異性和敏感性以及檢測結(jié)果的估計(jì)標(biāo)準(zhǔn)差計(jì)算，PRRSV免疫抗體檢測需要采集的樣本數(shù)量大約為30份[5]，該數(shù)量具有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義，可以代表一個豬場的免疫水平，所以要求所有參與調(diào)研的規(guī)模化豬場采集35份左右的血清，最少有效血清數(shù)量不能低于30份。綜上所述，本實(shí)驗(yàn)中抽檢的樣品可以代表和反映廣東省湛江市規(guī)模化豬場PRRS疫苗免疫的真實(shí)情況。

3.5 疫苗選擇

目前市場上PRRS疫苗的生產(chǎn)廠家比較多，生產(chǎn)規(guī)格也很多。每一種規(guī)格的疫苗、每一個廠家的疫苗都有自己的市場。免疫PRRS疫苗后能不能真正地、有效地干預(yù)到豬體對PRRSV的反應(yīng)才是關(guān)鍵。本試驗(yàn)中，通過對廣東省湛江市2013年P(guān)RRSV免疫抗體的檢測發(fā)現(xiàn)，不同規(guī)格、不同廠家的疫苗所產(chǎn)生的免疫效果相差甚遠(yuǎn)。因此，建議大家一定要慎重選擇疫苗。同時還發(fā)現(xiàn)，目前廣東省湛江市的規(guī)?；i場在設(shè)計(jì)PRRS免疫程序時，大多是根據(jù)經(jīng)驗(yàn)或者根據(jù)專家教授的推薦來設(shè)計(jì)，有的豬場甚至很多年都沒有變過免疫程序。隨著疫苗的生產(chǎn)工藝不斷在改進(jìn)，疫苗免疫效果不斷在進(jìn)步，因此對免疫程序也要做出相應(yīng)的調(diào)整。所以，建議有條件的豬場最好借助實(shí)驗(yàn)室檢測手段，根據(jù)抗體的消長規(guī)律，來選擇適合自己豬場的PRRS疫苗，完善適合本豬場的免疫程序。

[1]宜長和.豬病學(xué)[M].北京:中國農(nóng)業(yè)大學(xué)出版社,2010: 146-172.

[2]錢歡,唐利.3種檢測豬繁殖與呼吸綜合征抗體的ELISA試劑盒的比較[J].豬業(yè)科學(xué),2012(10):42-44.

[3]馬超鋒,孫何云,張軼,等.幾種檢測豬豬繁殖與呼吸綜合征免疫抗體ELSA診斷試劑盒的對比試驗(yàn)[J].豬業(yè)科學(xué),2013(9): 82-83.

[4]蘆惟本.后備種豬同化技術(shù)[J].養(yǎng)豬,2013(4):113-114.

[5]劉建營,曹長仁,謝水華,等.豬血液的實(shí)驗(yàn)室檢測及數(shù)據(jù)分析技術(shù)[J].豬業(yè)科學(xué),2012(10):36-39.

S858.28

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1673-4645(2014)09-0040-04

2014-05-05

臺凡力（1976-），男，山東菏澤人，碩士，中級獸醫(yī)師，從事動物疫病實(shí)驗(yàn)室檢測和綜合防控工作