馬明陽(yáng)

(西安文理學(xué)院化學(xué)與化學(xué)工程學(xué)院，陜西西安 710065)

氯霉素是世界上首種完全由合成方法大量制造的廣譜抗生素，對(duì)很多不同種類的微生物均起作用。它價(jià)錢低廉，廣泛用于治療各種敏感菌感染。但是，長(zhǎng)期微量攝入氯霉素，不僅使沙門菌和大腸桿菌產(chǎn)生耐藥性，還會(huì)引起機(jī)體正常菌群失調(diào)，引發(fā)各種疾病，從而對(duì)人類健康構(gòu)成潛在威脅。因此，對(duì)氯霉素的靈敏檢測(cè)具有十分重要的意義。

目前，測(cè)定氯霉素的方法主要有:高效液相色譜法［1-2］、氣相色譜法［3］、氣相色譜-質(zhì)譜聯(lián)用法［4］、免疫法［5］、紫外分光光度法［6］、熒光法［7］和毛細(xì)管電泳法［8］等。實(shí)驗(yàn)發(fā)現(xiàn)，氯霉素對(duì)H2O2-魯米諾化學(xué)發(fā)光體系有增敏作用，據(jù)此，結(jié)合流動(dòng)注射分析，建立了靈敏檢測(cè)氯霉素的化學(xué)發(fā)光分析方法。

1 實(shí)驗(yàn)部分

1.1 試劑與儀器

氯霉素(中國(guó)藥品生物制品檢定所);魯米諾;NaOH、H2O2、KMnO4等均為分析純;蒸餾水。

IFFM-E型流動(dòng)注射化學(xué)發(fā)光分析儀;IFFS-A型多功能化學(xué)發(fā)光檢測(cè)器。

1.2 溶液配制

1.2.1 魯米諾儲(chǔ)備液(1.0 ×10－2mol/L)的配制用10 mL 1.0 mol/L的氫氧化鈉溶液溶解1.77 g魯米諾，定容于1 000 mL容量瓶中作為儲(chǔ)備液，使用時(shí)用氫氧化鈉溶液稀釋至所需濃度。

1.2.2 標(biāo)準(zhǔn)溶液(1.00 ×10－3g/mL)的配制 準(zhǔn)確稱取0.100 0 g氯霉素，用蒸餾水溶解，定容于100 mL容量瓶中，使用時(shí)用水逐級(jí)稀釋至所需濃度。

1.3 實(shí)驗(yàn)方法

流動(dòng)注射化學(xué)發(fā)光反應(yīng)裝置如圖1所示。a為待測(cè)液(藥品)，b為H2O2溶液，二者先混合，c為魯米諾溶液，流入進(jìn)樣閥中，再與a、b混合液混合。三者流入流通池內(nèi)，產(chǎn)生化學(xué)發(fā)光。采樣時(shí)間和進(jìn)樣時(shí)間均為20 s，選擇高壓為500 V，泵速為30 r/min(進(jìn)樣管內(nèi)徑為0.8 mm，流路流速相當(dāng)3 m/min)，以峰高進(jìn)行定量。

圖1 流動(dòng)注射化學(xué)發(fā)光分析儀流程圖Fig.1 Schematic diagram of CL flow system

2 結(jié)果與討論

2.1 測(cè)定條件的選擇

2.1.1 流路選擇 可供選擇的流路有3種:①氯霉素和KMnO4先混合，再注入魯米諾(NaOH)溶液中;②氯霉素和魯米諾(NaOH)先混合，再注入KMnO4溶液中;③KMnO4和魯米諾(NaOH)先混合，再注入氯霉素溶液中。通過對(duì)以上流路的化學(xué)發(fā)光實(shí)驗(yàn)，發(fā)現(xiàn)氯霉素在①中發(fā)光信號(hào)信噪比最大。因此，選定流路①作為流動(dòng)注射發(fā)光實(shí)驗(yàn)中的最佳流路。

2.1.2 氧化劑的選擇 對(duì) KMnO4、H2O2、K2Cr2O7、K3Fe(CN)6逐一進(jìn)行化學(xué)發(fā)光實(shí)驗(yàn)，綜合考慮信噪比和樣品的相對(duì)發(fā)光強(qiáng)度兩個(gè)條件，確定H2O2為最佳氧化劑。

2.1.3 H2O2濃度的選擇 H2O2作為H2O2-魯米諾化學(xué)發(fā)光體系中的氧化劑，在 1×10－2～1×10－4mol/L范圍內(nèi)，考察H2O2濃度對(duì)反應(yīng)化學(xué)發(fā)光強(qiáng)度的影響，以最大信噪比作為依據(jù)。結(jié)果表明，H2O2最佳濃度為6.0 ×10－4mol/L。

2.1.4 魯米諾溶液中NaOH濃度的選擇 在堿性條件下，H2O2氧化魯米諾產(chǎn)生化學(xué)發(fā)光，介質(zhì)的堿度影響化學(xué)發(fā)光法信號(hào)?？疾炝?.0×10－2～1.0×10－6mol/L范圍內(nèi)NaOH的濃度對(duì)化學(xué)發(fā)光信號(hào)的影響。結(jié)果表明，當(dāng)魯米諾中NaOH的濃度為8.0×10－5mol/L時(shí)，檢測(cè)到的化學(xué)發(fā)光具有最大的信噪比。

2.1.5 魯米諾濃度的選擇 魯米諾作為發(fā)光試劑，在1.0×10－3～1.0×10－6mol/L 范圍內(nèi)考察了魯米諾濃度對(duì)體系化學(xué)發(fā)光信號(hào)的影響。結(jié)果表明，當(dāng)濃度為1.0×10－4mol/L時(shí)，化學(xué)發(fā)光檢測(cè)具有最大的信噪比。

2.1.6 混合管長(zhǎng)度的選擇 混合管的長(zhǎng)度影響氯霉素和H2O2反應(yīng)的完全程度，從而影響化學(xué)發(fā)光強(qiáng)度。若混合管太短，則氯霉素和H2O2反應(yīng)不充分，混合管太長(zhǎng)，則測(cè)量既費(fèi)時(shí)間又費(fèi)溶液。對(duì)混合管的長(zhǎng)度在2～40 cm范圍內(nèi)進(jìn)行了選擇。以最大信噪比作為最佳長(zhǎng)度判斷依據(jù)，選擇混合管長(zhǎng)度為5 cm。

2.2 校準(zhǔn)曲線、精密度和檢出限

在實(shí)驗(yàn)選定的最佳條件下，為了提高測(cè)定的準(zhǔn)確度，校準(zhǔn)曲線分段繪制，氯霉素的質(zhì)量濃度在2.0×10－7～8.0×10－6g/mL 范圍時(shí)，濃度與其發(fā)光強(qiáng)度呈良好的線性關(guān)系，校準(zhǔn)曲線的基本參數(shù)列于表1。

表1 校準(zhǔn)曲線的基本參數(shù)Table 1 The basic parameters of the calibration curve

11次平行測(cè)定5.0×10－7g/mL的氯霉素化學(xué)發(fā)光信號(hào)，方法的相對(duì)標(biāo)準(zhǔn)偏差為1.3%。方法的檢出限為5×10－8g/mL。

2.3 共存物質(zhì)的影響

在優(yōu)化的最佳實(shí)驗(yàn)條件下，對(duì)5×10－7g/mL氯霉素進(jìn)行干擾實(shí)驗(yàn)。結(jié)果表明，相對(duì)誤差小于5%時(shí)，1 000倍的 N、淀粉不干擾，500 倍的 Cl－、S、葡萄糖、麥芽糖不干擾;100倍K+不干擾;等倍的C、Cu2+不干擾。

2.4 樣品分析

準(zhǔn)確稱量10粒氯霉素膠囊，去皮后，稱取相當(dāng)于1粒的量，用超純水溶解后定容至250 mL容量瓶中。準(zhǔn)確移取一定體積該溶液，并用微孔濾膜過濾后稀釋至適宜濃度，用本方法定量測(cè)定膠囊中的氯霉素，同時(shí)做回收率實(shí)驗(yàn)，結(jié)果見表2。

表2 氯霉素膠囊的測(cè)定結(jié)果和回收率Table 2 Determination results and recovery of chloramphenicol capsules

3 結(jié)論

基于氯霉素對(duì)H2O2-魯米諾化學(xué)發(fā)光體系的增敏作用，建立了流動(dòng)注射化學(xué)發(fā)光分析方法檢測(cè)氯霉素的新方法。最佳實(shí)驗(yàn)條件:流路選擇氯霉素和KMnO4先混合，再注入魯米諾(NaOH)溶液中;氧化劑選擇 H2O2，其濃度為 6.0 ×10－4mol/L;魯米諾中NaOH的濃度為 8.0×10－5mol/L;魯米諾濃度為1.0×10－4mol/L;選擇混合管長(zhǎng)度為5 cm。在選擇的最佳條件下，該方法檢測(cè)氯霉素的檢出限(3σ)為5×10－8g/mL，對(duì)5×10－7g/mL氯霉素進(jìn)行 11次平行測(cè)定，相對(duì)標(biāo)準(zhǔn)偏差(RSD)為1.3%，加標(biāo)回收率在95%～105%。并用該方法對(duì)氯霉素膠囊中氯霉素的含量進(jìn)行了測(cè)定。

［1］中華人民共和國(guó)衛(wèi)生部藥典委員會(huì).中華人民共和國(guó)藥典(第二部)［M］.北京:化學(xué)工業(yè)出版社，2005:776.

［2］黃北雄.高效液相色譜法測(cè)定氯霉素滴眼液含量及降解產(chǎn)物的控制［J］.中國(guó)醫(yī)院藥學(xué)雜志，2005，25(9):837-838.

［3］彭莉，程江，高嵐，等.牛奶中氯霉素殘留的氣相色譜測(cè)定法研究［J］.中國(guó)獸藥雜志，2006，40(9):14-17.

［4］黃冬梅，于慧娟，李慶，等.GC-MS測(cè)定水產(chǎn)品中氯霉素的殘留量［J］.分析科學(xué)學(xué)報(bào)，2006，22(1):65-67.

［5］張勝幫，董士華，劉繼東，等.酶聯(lián)免疫檢測(cè)法測(cè)定水產(chǎn)品中殘留氯霉素的研究［J］.中國(guó)食品學(xué)報(bào)，2006，6(5):133-136.

［6］胡清宇，周家勝，朱虹云.氯霉素片的三波長(zhǎng)分光光度測(cè)定［J］.中國(guó)醫(yī)藥工業(yè)雜志，1996，27(2):76-77.

［7］潘瑩宇，張建新，許茜.熒光衍生化法測(cè)定牛奶中氯霉素殘留的研究［J］.分析試驗(yàn)室，2005，24(5):67-70.

［8］封宇飛，姜文清，郭郁，等.毛細(xì)管區(qū)帶電泳法測(cè)定氯霉素滴眼液的含量及降解產(chǎn)物二醇物的控制［J］.中國(guó)藥學(xué)雜志，2002，37(5):365-367.