興安百里香離體快繁技術(shù)研究

王新穎

沈陽市園林科學(xué)研究院 沈陽 110016

興安百里香(Thymus dahuricus)為唇形科，百里香屬小灌木，分布于我國東北北部及內(nèi)蒙古東部?；ü诜圩仙ǘ嗲一ㄆ陂L，且耐干旱、耐踐踏，管理粗放。全株香味濃郁，其所含的芳香油揮發(fā)性較強(qiáng)，能驅(qū)蟲防蚊、抗菌防腐，可以用作觀賞地被，也可以用于芳香療養(yǎng)功能地被和護(hù)坡地被等。

種子繁殖是百里香屬常見而有效的繁殖方法［1］。但該種子為小粒種子，采收和播種比較難，難以滿足快速獲得大量種苗的需求。本試驗(yàn)研究了興安百里香(T. dahuricus)的快速繁殖方式，建立了快速繁殖體系，以期解決興安百里香(T. dahuricus)人工快繁問題。

1 材料與方法

1.1 材料及外植體處理

試驗(yàn)于2013年9月—2014年10月于沈陽市園林科學(xué)研究院芳香園林植物研究所組培室進(jìn)行，供試興安百里香引自遼寧省阜新境內(nèi)。外植體采用1 ～1.5 cm 帶腋芽的莖段，在洗衣粉水中浸泡10 min，自來水沖洗3 ～4h 后置于超凈工作臺上，用75%的酒精浸泡10 ～30s，放入1g·LHgCl2中消毒，然后無菌水沖洗5 遍，用無菌濾紙吸干材料表面水分，待用。

1.2 不同消毒時(shí)間

將處理好的外植體放入1g·LHgCl2中消毒3，5，6，7 min，然后無菌水沖洗5 遍，用無菌濾紙吸干材料表面水分，接種到無菌固體MS 培養(yǎng)基中，每個(gè)處理90 個(gè)外植體，15 d 后調(diào)查不同消毒時(shí)間下外植體成活率(表1)。

1.3 初代培養(yǎng)基的篩選

將帶腋芽的莖段接種到初代培養(yǎng)基中(表2)，每個(gè)處理接種90 個(gè)外植體，15 d 后觀察腋芽萌發(fā)狀態(tài)。

1.4 愈傷組織分化培養(yǎng)基的篩選

挑選淡綠色、質(zhì)地疏松透明的愈傷組織，接種到愈傷組織分化培養(yǎng)基中(表3)，每個(gè)處理接種90塊愈傷組織，30 d 后統(tǒng)計(jì)不定芽分化率及生長狀況。

1.5 繼代增殖培養(yǎng)基的篩選

將誘導(dǎo)出來的叢生芽轉(zhuǎn)接到繼代增殖培養(yǎng)基中(表4)，30 d 后比較不同培養(yǎng)基誘導(dǎo)不定芽的長勢。

1.6 生根培養(yǎng)基的篩選

將誘導(dǎo)出來的小苗轉(zhuǎn)接到不同的生根培養(yǎng)基中，30 d 后調(diào)查生根率和幼苗長勢。

2 結(jié)果與分析

2.1 消毒時(shí)間對外植體成活的影響

由表1 可以看出，隨著消毒時(shí)間的延長，污染率逐漸降低，成活率隨之增高。當(dāng)消毒時(shí)間為7 min時(shí)，污染率最低(8.9%)，而成活率為90%。因此，最佳消毒時(shí)間為7 min。

表1 不同消毒時(shí)間對興安百里香成活率的影響

2.2 不同初代培養(yǎng)基對誘導(dǎo)成苗的影響

由表2 看出，不同初代培養(yǎng)基對誘導(dǎo)叢生芽影響較小，而在一定范圍內(nèi)，激素濃度對愈傷組織的誘導(dǎo)率影響較大。當(dāng)激素濃度為6- BA0.25 mg·L-1+IAA1.0 mg·L-1時(shí)，成苗最好，叢生芽和愈傷組織誘導(dǎo)率最高達(dá)100%和94.4%，而且愈傷組織狀態(tài)最佳。因此，最適宜的初代培養(yǎng)基為MS +6-BA0.25 mg·L-1+IAA1.0 mg·L-1。

表2 不同初代培養(yǎng)基對誘導(dǎo)成苗的影響

2.3 不同培養(yǎng)基對愈傷組織分化的影響

由表3 看出，不同的培養(yǎng)基對愈傷組織分化的影響較大，在一定范圍內(nèi)分化率隨著激素濃度的升高而升高。當(dāng)激素濃度為6- BA0.5 mg·L-1+IAA0.5 mg·L-1時(shí)，分化率最高，分化率達(dá)到64.4%;當(dāng)激素濃度繼續(xù)升高時(shí)，愈傷組織顏色變褐變硬，分化率降低為32.2%。因此，較適宜的愈傷組織分化培養(yǎng)基為MS +6- BA0.5 mg·L-1+IAA0.5 mg·L-1。

表3 不同培養(yǎng)基對愈傷組織分化的影響

2.4 不同培養(yǎng)基對興安百里香繼代增殖的影響

由表4 看出，激素種類和濃度對興安百里香增殖影響較大，不添加激素，興安百里香繼代苗長勢良好，但是沒有增殖。當(dāng)激素濃度為0.5 mg·L-1時(shí)，均有增殖;當(dāng)激素種類為IBA 時(shí)，繼代苗長勢良好且可見少量生根。因此，適宜的繼代培養(yǎng)基為MS+IBA0.5 mg·L-1。

表4 不同培養(yǎng)基對興安百里香繼代苗長勢的影響

2.5 不同培養(yǎng)基對興安百里香生根的影響

由表5 看出，以MS 為基本培養(yǎng)基，生根率為0;而以1/2MS 為基本培養(yǎng)基有利于生根，當(dāng)IBA濃度為0.5 mg·L-1時(shí)，生根率最高達(dá)100%，且地上部長勢健壯;激素濃度高于1.0 mg·L-1，抑制了興安百里香生根。因此，適宜興安百里香的生根培養(yǎng)基為1/2MS+IBA0.5 mg·L-1。

表5 不同培養(yǎng)基對興安百里香生根的影響

3 結(jié)論

外植體的選擇和滅菌是組織培養(yǎng)的關(guān)鍵環(huán)節(jié)。由于興安百里香具有密生的匍匐莖且具有少量的短毛，因此外植體消毒具有一定難度。試驗(yàn)結(jié)果表明，采用帶腋芽的莖段在1g·LHgCl2中消毒7 min，污染率最低。這與李曉東［2］普通百里香的3 min 滅菌時(shí)間的研究結(jié)果不同，究其原因可能是試驗(yàn)外植體采自露地栽培的苗，而李曉東采用無菌苗為外植體。另外，在初代培養(yǎng)中，不僅誘導(dǎo)出大量的叢生芽，而且還誘導(dǎo)出長勢良好、透明疏松的愈傷組織。愈傷組織在MS +6- BA0.5 mg·L-1+ IAA0.5 mg·L-1中，分化率最高達(dá)到64.4%。這與王玲［3］的研究相近，進(jìn)一步證明百里香屬植物愈傷組織分化不定芽是可行的，但是不同的是試驗(yàn)改進(jìn)了培養(yǎng)基中激素的種類和濃度，將分化率提高了近1 倍。試驗(yàn)還發(fā)現(xiàn)，在1/2MS + IBA0.5 mg·L-1中生根率100%。這與李曉東的研究相同，不同的是在培養(yǎng)基1/2MS+IBA0.5 mg·L-1+PP3330.75 mg·L-1中生根率為0，其原因和影響試管苗移栽后長勢的原因還有待進(jìn)一步研究。

［1］王玲，張秀珍，仲軼，等.4種百里香屬植物種皮微形態(tài)比較［J］.東北林業(yè)大學(xué)學(xué)報(bào)，2010，38(4):20-22.

［2］李曉東，王永飛，馬三梅，等. 普通百里香的組織培養(yǎng)和快速繁殖［J］.湖北農(nóng)業(yè)科學(xué)，2009，48(6):1295-1297.

［3］王玲，楊麗鵬，張秀珍，等. 東北百里香組培再生體系的建立［J］.園藝學(xué)報(bào)，2011，38(6):1185-1190.