李建玲??蘇震??劉海旺??李春輝

[摘要] 目的 檢測(cè)Cx43與Smad1在胃癌中的表達(dá)，探討其與胃癌發(fā)生發(fā)展的關(guān)系以及兩者的相關(guān)性。 方法 采用免疫組織化學(xué)方法檢測(cè)Cx43和Smad1在胃癌和正常胃組織中的表達(dá)，研究它們的表達(dá)與胃癌的關(guān)系以及二者的相關(guān)性。 結(jié)果 在胃癌中，Cx43的陽(yáng)性表達(dá)率以及染色強(qiáng)度均隨分化程度的降低而呈現(xiàn)出下降趨勢(shì)（P<0.05）。Smad1的陽(yáng)性表達(dá)率隨分化程度的降低而呈現(xiàn)出上升趨勢(shì)（P<0.05）。Cx43與Smad1在胃癌組織中的表達(dá)呈現(xiàn)出負(fù)相關(guān)性。 結(jié)論 Cx43在胃癌組織中的低表達(dá)與Smad1高表達(dá)顯示二者存在負(fù)相關(guān)，可能對(duì)胃癌的發(fā)生發(fā)展起一定作用。

[關(guān)鍵詞] 胃癌；Cx43；Smad1；免疫組織化學(xué)

[中圖分類號(hào)] R735.2 [文獻(xiàn)標(biāo)識(shí)碼] A [文章編號(hào)] 2095-0616（2014）04-19-04

A study of expressions and correlation of Cx43 and Smad1 in gastric cancer tissues

LI Jianling1 SU Zhen1 LIU Haiwang2 LI Chunhui2

1.Department of Anesthesiology， Chengde Medical University Affiliated Hospital，Chengde 067000，China；2.Department of Pathology， Chengde Medical University Affiliated Hospital，Chengde 067000，China

[Abstract] Objective To detect the expressions of Cx43 and Smad1 in gastric cancer and to discuss their relations with the development and progression of gastric cancer， and correlation between the two. Methods Immunohistochemistry was applied to detect the expressions of Cx43 and Smad1 in gastric cancer and normal gastric tissues.The relations between their expressions and gastric cancer and their correlation were investigated. Results The expression rate and staining intensity of Cx43 in gastric cancer decreased with the lowering of differentiation degree （P<0.05）.The expression rate of Smad1 increased with the lowering of differentiation degree （P<0.05）.The expression of Cx43 and Smad1 in gastric cancer tissues was negatively correlated. Conclusion The low expression of Cx43 and high expression of Smad1 in gastric cancer tissues show a negative correlation between the two， which may have certain effects on the development and progression of gastric cancer.

[Key words] Gastric cancer；Cx43；Smad1；Immunohistochemistry

胃癌是發(fā)病率和死亡率非常高的疾病，嚴(yán)重威脅著人類的健康。其發(fā)生發(fā)展是一個(gè)多因素、多步驟的漸進(jìn)過(guò)程，其中抑癌因子與促癌因子的相互作用失衡最終導(dǎo)致了胃癌的發(fā)生[1]。縫隙連接（gap junction）是相鄰細(xì)胞間的膜通道結(jié)構(gòu)，由胞膜上的縫隙連接蛋白（connexin，Cx）構(gòu)成，其中包括Cx43，細(xì)胞通過(guò)它所介導(dǎo)的細(xì)胞縫隙連接通訊（gap junction intercellular communication，GJIC）進(jìn)行細(xì)胞間信息和能量的傳遞，調(diào)控細(xì)胞的生殖、分化及內(nèi)環(huán)境的穩(wěn)定[2]。Smad1是SMAD蛋白家族成員之一，是把骨形態(tài)發(fā)生蛋白與細(xì)胞表面受體作用的信號(hào)傳至細(xì)胞核的中介分子。本研究通過(guò)免疫組織化學(xué)染色方法觀察Cx43與Smad1在胃癌和正常胃組織中的表達(dá)情況，研究細(xì)胞間的信號(hào)傳導(dǎo)是否會(huì)

影響信號(hào)通路Smad1介導(dǎo)的BMP通路從而調(diào)節(jié)胃癌的發(fā)生和發(fā)展。

1 材料與方法

1.1 標(biāo)本來(lái)源

收集承德醫(yī)學(xué)院附屬醫(yī)院2012年9月～2013年2月手術(shù)切除后，經(jīng)病理證實(shí)為胃癌的組織60例及正常胃組織30例，所有患者術(shù)前未接受放化療。組織常規(guī)取材后固定于中性甲醛，常規(guī)石蠟包埋，連續(xù)切片，厚4μm。由2名有經(jīng)驗(yàn)的病理醫(yī)師進(jìn)行雙盲獨(dú)立閱片，鏡檢胃癌組織學(xué)類型、分化程度及淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移情況

1.2 患者一般情況

60例胃癌患者中，男34例、女26例，年齡47～77歲，平均（58.5±4.0）歲。腫瘤分化：高中分化者28例、低分化者32例。淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移：無(wú)轉(zhuǎn)移者23例、有轉(zhuǎn)移者37例。浸潤(rùn)深度：浸潤(rùn)全層者48例，未達(dá)全層者12例。30例正常胃組織，男19例，女11例，年齡35～72歲，平均（55.0±6.0）歲。endprint

1.3 免疫組化染色檢測(cè)Cx43與Smad1蛋白的表達(dá)及結(jié)果判定

鼠抗人Cx43抗體購(gòu)自福州邁新生物技術(shù)開(kāi)發(fā)有限公司，兔抗人Smad1抗體購(gòu)自武漢博士德生物工程有限公司，采用SP免疫組化法，實(shí)驗(yàn)步驟按說(shuō)明書(shū)進(jìn)行，DAB顯色，蘇木素復(fù)染細(xì)胞核。以PBS代替一抗作為陰性對(duì)照，用已知正常胃黏膜組織的標(biāo)準(zhǔn)陽(yáng)性切片作為陽(yáng)性對(duì)照。Cx43陽(yáng)性信號(hào)在正常胃組織主要表達(dá)于細(xì)胞膜，在胃癌組織中可表達(dá)于細(xì)胞漿。Smad1陽(yáng)性信號(hào)在正常胃組織及胃癌組織中主要表達(dá)于細(xì)胞膜。在染色均勻的區(qū)域，選取5個(gè)高倍鏡視野（×400）：（1）按陽(yáng)性細(xì)胞百分率（A值）評(píng)分：1%～25%為1分，25%～50%為2分，>50%為3分；（2）按染色強(qiáng)度（B值）評(píng)分：不著色為0分，淺棕黃色為1分，棕黃色為2分，棕褐色為3分。綜合染色陽(yáng)性細(xì)胞數(shù)（A值）與染色強(qiáng)度（B值）判斷結(jié)果，陰性（-）：0分，弱陽(yáng)性（+）：1～2分，中度陽(yáng)性（++）：3～4分，強(qiáng)陽(yáng)性（+++）：5～6分。

1.4 統(tǒng)計(jì)學(xué)方法

采用SPSS17.0統(tǒng)計(jì)軟件對(duì)數(shù)據(jù)進(jìn)行統(tǒng)計(jì)學(xué)處理。各組間差異比較應(yīng)用x2檢驗(yàn)，P<0.05為差異具有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義。

2 結(jié)果

2.1 Cx43在正常胃組織及胃癌組織中的表達(dá)

Cx43在正常胃組織、高中分化胃癌和低未分化胃癌中的陽(yáng)性表達(dá)率分別為76.67%，53.57%和15.63%，呈現(xiàn)下降趨勢(shì)（x2=38.134，P<0.05）。見(jiàn)表1。并且細(xì)胞漿的染色強(qiáng)度也呈下降趨勢(shì)。見(jiàn)圖1～3。

在胃癌中，Cx43的表達(dá)在不同年齡、性別胃癌組織中無(wú)顯著性差異（P>0.05）。Cx43在浸潤(rùn)全層及有淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移組的表達(dá)明顯低于未達(dá)全層（P<0.05）和無(wú)淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移組（P<0.05）；在不同分化類型中Cx43的表達(dá)存在差異，低分化腺癌組Cx43的表達(dá)明顯低于高中分化腺癌組（P<0.05）。見(jiàn)表2。

2.2 Smad1在正常胃組織及胃癌組織中的表達(dá)

Smad1在正常胃組織陽(yáng)性表達(dá)率為16.67%，在高中分化胃癌組中陽(yáng)性率為35.71%，在低分化胃癌中的陽(yáng)性率為68.75%。Smad1蛋白的表達(dá)陽(yáng)性率呈現(xiàn)上升趨勢(shì)（x2=37.213，P<0.05）。見(jiàn)表1。并且細(xì)胞漿的染色強(qiáng)度也是上升趨勢(shì)。見(jiàn)圖4～6。

在胃癌中，與對(duì)Cx43表達(dá)的分析相類似：不同年齡、性別胃癌組織中Smad1表達(dá)也無(wú)顯著性差異。Smad1在浸潤(rùn)全層及有淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移組的表達(dá)分別明顯高于未達(dá)全層（P<0.05）和無(wú)淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移組（P<0.05）。在對(duì)不同病理組織分化類型分析顯示：隨著分化程度的降低，Smad1的表達(dá)呈上升趨勢(shì)（P<0.05）。見(jiàn)表2。

2.3 Cx43與Smad1在胃癌組織中表達(dá)的關(guān)系

在正常胃組織30例中Cx43表達(dá)陰性而Smad1表達(dá)陽(yáng)性2例，Cx43表達(dá)陽(yáng)性而Smad1表達(dá)陰性20例；在胃癌組織60例中Cx43表達(dá)陰性而Smad1表達(dá)陽(yáng)性22例，Cx43表達(dá)陽(yáng)性而Smad1表達(dá)陰性10例。經(jīng)Spearman等級(jí)相關(guān)分析得出相關(guān)系數(shù)r=-0.54，Cx43與Smad1呈現(xiàn)出負(fù)相關(guān)性。

3 討論

縫隙連接是細(xì)胞間進(jìn)行信息交流的一種特殊的膜結(jié)構(gòu)，由胞膜上的縫隙連接蛋白亞單位構(gòu)成。腫瘤發(fā)生發(fā)展的特點(diǎn)是增殖失控和異常分化，腫瘤中存在著Cx的異常表達(dá)。Cx43作為重要的縫隙連接蛋白參與了多種疾病和腫瘤的發(fā)生，對(duì)于胃癌也不例外[3-4]。

Cx43是縫隙鏈接通道的組成部分，在細(xì)胞間存在信息交流，發(fā)揮細(xì)胞間接觸抑制的作用，正常細(xì)胞及癌旁細(xì)胞中均陽(yáng)性表達(dá)，相反在腫瘤細(xì)胞中接觸抑制的作用常常消失[5]。Cx43在癌組織中明顯下降，導(dǎo)致了在癌細(xì)胞中最重要的細(xì)胞間接觸抑制消失，促進(jìn)了癌組織的生長(zhǎng)。這就提示了Cx43表達(dá)下調(diào)導(dǎo)致細(xì)胞縫隙連接通訊（GJIC）異?；蛳Э赡軈⑴c了胃癌的發(fā)生過(guò)程。

Smads作為細(xì)胞質(zhì)內(nèi)信號(hào)轉(zhuǎn)導(dǎo)分子，Smads通過(guò)直接與DNA結(jié)合作為轉(zhuǎn)錄因子，或者與其他的轉(zhuǎn)錄因子以及細(xì)胞活化因子相互作用誘導(dǎo)其對(duì)BMP信號(hào)通路的轉(zhuǎn)錄應(yīng)答。目前，脊椎動(dòng)物中至少發(fā)現(xiàn)8種Smad蛋白，被分成3類：（1）受體調(diào)節(jié)型Smad S蛋白：其中Smad1、5、8參與BMP信號(hào)轉(zhuǎn)導(dǎo)[6]，Smad2，3參與TGF-β或激活素信號(hào)轉(zhuǎn)導(dǎo)[7-8]；（2）通用型Smad蛋白：主要是Smad4，它是TGF-β各類信號(hào)轉(zhuǎn)導(dǎo)過(guò)程中共同需要的介質(zhì)[9]；（3）抑制型Smad S蛋白：：其中Smad6優(yōu)先抑制BMP信號(hào)轉(zhuǎn)導(dǎo)，Smad7抑制TGF-β和BMP信號(hào)轉(zhuǎn)導(dǎo)[10]。其Smadl是smad家族中受體調(diào)節(jié)型蛋白，是骨形態(tài)發(fā)生蛋白（bonemorphogenetic proteins，BMPs）細(xì)胞內(nèi)信號(hào)轉(zhuǎn)導(dǎo)子，是BMPs通路的關(guān)鍵組件，其表達(dá)的高低直接反映了BMPs通路的表達(dá)的高低。骨形成蛋白屬于轉(zhuǎn)化生長(zhǎng)因子β（transfor ming growth factorβ，TGF-β）超家族的成員的一員[11-12]。BMP前體蛋白經(jīng)蛋白水解后形成具有活性的二聚體，再與其受體的復(fù)合物結(jié)合，BMP受體有兩型Ⅰ型和Ⅱ型，Ⅱ型受體使Ⅰ型受體磷酸化激活，后者通過(guò)依次磷酸化Smad1來(lái)傳遞BMP信號(hào)，Smad1是BMP家族的功能信號(hào)傳感器[13]。Smad1形成異源聚合體移進(jìn)細(xì)胞核，影響了BMP通路基因的轉(zhuǎn)錄[14-15]，研究了Smad1在胃癌中的表達(dá)，也就一定程度上研究了BMP通路。本研究中Smad1在胃癌中的表達(dá)比在正常組之中要高，表達(dá)強(qiáng)度與胃癌的組織學(xué)分化程度、浸潤(rùn)深度、TNM分期、淋巴結(jié)轉(zhuǎn)有關(guān)。這充分的說(shuō)明了它與胃癌的發(fā)生和發(fā)展有密切的關(guān)系。

本研究中在胃癌組織中CX43的低表達(dá)與Smad1的高表達(dá)成負(fù)相關(guān)的關(guān)系，這就說(shuō)明了胃癌的發(fā)生發(fā)展過(guò)程中存在著兩條信號(hào)通路的交匯對(duì)話，他們共同促進(jìn)了胃癌的發(fā)生和發(fā)展。endprint

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（收稿日期：2013-11-15）endprint

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（收稿日期：2013-11-15）endprint