王向兵，張 志，林朵朵，黃秀艷遼寧醫(yī)學(xué)院附屬第三醫(yī)院 心內(nèi)科，遼寧錦州 00；中國(guó)醫(yī)科大學(xué)附屬盛京醫(yī)院 產(chǎn)科，遼寧沈陽0004

Apelin-13對(duì)壓力超負(fù)荷大鼠心肌纖維化及TGF-β1/Smads信號(hào)通路的影響

王向兵1，張 志1，林朵朵1，黃秀艷21遼寧醫(yī)學(xué)院附屬第三醫(yī)院 心內(nèi)科，遼寧錦州 121001；2中國(guó)醫(yī)科大學(xué)附屬盛京醫(yī)院 產(chǎn)科，遼寧沈陽110004

目的 觀察血管緊張素Ⅱ1型受體相關(guān)蛋白內(nèi)源性配體-13(Apelin-13)對(duì)壓力超負(fù)荷大鼠心肌纖維化的影響，探討其可能的影響機(jī)制。方法 40只成年雄性SD大鼠隨機(jī)分為假手術(shù)組(Sham組)、模型組(AOB組)、Apelin-13組、阻斷劑組(SB431542組)。假手術(shù)組游離但不結(jié)扎腹主動(dòng)脈，其余3組于左腎動(dòng)脈上方0.5 cm處行腹主動(dòng)脈縮窄術(shù)建立壓力超負(fù)荷模型，3 d后各組給予相應(yīng)藥物干預(yù)。4周后取材，計(jì)算大鼠心臟指數(shù)(H/B)和左心室質(zhì)量指數(shù)(left ventricular mass index，LVMI)；Masson染色光鏡下觀察心肌組織形態(tài)學(xué)改變，測(cè)算心肌膠原容積分?jǐn)?shù)(collagen volume fraction，CVF)；ELISA法測(cè)定血清轉(zhuǎn)化生長(zhǎng)因子-β1(transforming growth factor-β1，TGF-β1)濃度；Western-blotting檢測(cè)TGF-β1及Ⅰ型、Ⅲ型膠原纖維的蛋白表達(dá)量；RT-PCR檢測(cè)心肌組織Smad3 mRNA、Smad7 mRNA的表達(dá)水平。結(jié)果 與Sham組相比，AOB組大鼠H/B、LVMI、CVF、血清TGF-β1均明顯升高(P＜0.05)，心肌組織TGF-β1、Ⅰ型膠原纖維、Ⅲ型膠原纖維及Smad3 mRNA表達(dá)水平亦顯著升高(P＜0.05)；與AOB組相比，Apelin-13和SB431542干預(yù)組上述指標(biāo)均明顯下調(diào)(P＜0.05)。Smad7 mRNA在各組間的表達(dá)呈相反趨勢(shì)。結(jié)論 Apelin-13可通過部分抑制TGF-β1/Smads通路以減輕壓力超負(fù)荷大鼠心肌纖維化。

Apelin-13；壓力超負(fù)荷；心肌纖維化；轉(zhuǎn)化生長(zhǎng)因子-β1

高血壓性心臟病(hypertensive heart disease，HHD)是高血壓主要并發(fā)癥之一。左心室肥厚和心肌纖維化(myocardial fibrosis，MF)是HHD的特征性病理學(xué)表現(xiàn)。研究表明，HHD患者心肌纖維化的發(fā)生和發(fā)展與腎素-血管緊張素-醛固酮系統(tǒng)(renin-angiotensin-aldosterone system，RAAS)的異常激活及某些致纖維化因子的過度表達(dá)密切相關(guān)。現(xiàn)已證實(shí)，血清轉(zhuǎn)化生長(zhǎng)因子-β1(transforming growth factor-β1，TGF-β1)與臟器纖維化關(guān)系緊密，由TGF-β1及其下游Smads蛋白家族構(gòu)成的TGF-β1/Smads信號(hào)通路是介導(dǎo)心肌纖維化的主要途徑，現(xiàn)已成為治療心肌纖維化的新靶點(diǎn)[1]。SB431542是TGF-β1Ⅰ型受體的特異性阻斷劑，其通過阻斷TGF-β1與Ⅰ型受體結(jié)合而抑制心肌纖維化的作用已明確[2]。Apelin是血管緊張素Ⅱ1型受體相關(guān)蛋白(putative receptor protein related to the angiotensinⅡtype 1 receptor，APJ)的內(nèi)源性配體，是一種分布于機(jī)體多器官的脂肪細(xì)胞因子，包含多種亞型，Apelin-13是其中最具內(nèi)分泌效應(yīng)的肽段之一[3-4]。Apelin-13具有多重生物學(xué)活性，可通過減弱垂體后葉加壓素的活性而起到利尿、改善心臟功能的作用[5]。同時(shí)可減輕心臟前后負(fù)荷、降低心肌耗氧量、增加心肌收縮儲(chǔ)備而不引起心肌肥厚[6-7]。另有研究證實(shí)，Apelin-13可以降低氧自由基活性，減少心肌細(xì)胞活性氧的形成；近期研究示：Apelin-13經(jīng)過激活PI3K/Akt/mTOR信號(hào)通路來起到減輕心肌細(xì)胞自噬的生物學(xué)效應(yīng)[8-10]。我們前期研究發(fā)現(xiàn)，Apelin-13可減輕壓力超負(fù)荷大鼠心肌纖維化的發(fā)生，但具體機(jī)制尚未明確[11]。本文通過觀察Apelin-13對(duì)壓力超負(fù)荷大鼠TGF-β1/Smads信號(hào)通路的影響，探討其抑制心肌纖維化發(fā)生的可能機(jī)制。

材料和方法

1 主要試劑 Apelin-13(北京康肽生物科技有限公司)；SB431542(上海艾黎化學(xué)科技有限公司)；兔抗人TGF-β1抗體、兔抗人CollagenⅠ抗體、兔抗人CollagenⅢ抗體(北京博奧森生物技術(shù)有限公司)；RT-PCR引物(寶生物工程大連有限公司合成)；TGF-β1ELISA試劑盒(美國(guó)RB公司)；Masson染色試劑盒(上海博谷生物科技有限公司)。

2 模型制備和實(shí)驗(yàn)分組 220 ～ 270 g雄性SD大鼠40只(遼寧醫(yī)學(xué)院動(dòng)物飼養(yǎng)中心供應(yīng))，禁食水12 h，稱體質(zhì)量，10%水合氯醛(0.3 ml/100 g)腹腔注射麻醉，固定，剃毛，消毒。其中30只大鼠仿照Anversa等[12]方法，于左肋弓下脊柱旁1 cm處逐層打開腹腔，在左腎動(dòng)脈上方分離出腹主動(dòng)脈0.5 ～1 cm，于左腎動(dòng)脈上方0.5 cm處用內(nèi)徑為0.70 mm U型銀夾鉗夾，使腹主動(dòng)脈縮窄60% ～ 70%。檢查腹腔無出血，腹腔給予慶大霉素1 mg/kg后將臟器復(fù)位后逐層關(guān)閉腹腔。術(shù)后6 h正常進(jìn)食水，肌注慶大霉素1.5 mg/kg 3次/d，共3 d。造模過程中6只大鼠死亡，24只大鼠造模成功且術(shù)后存活良好，將其隨機(jī)均分為主動(dòng)脈縮窄(AOB)組8只、Apelin-13組8只、抑制劑(SB431542)組8只。其余10只大鼠術(shù)中不結(jié)扎腹主動(dòng)脈，余處理同上，術(shù)后均存活良好，為假手術(shù)組。

3 藥物干預(yù) Apelin-13組給予腹腔注射Apelin-13 100 μg/(kg·d)，抑制劑(SB431542)組腹腔注射SB431542 100 μg/(kg·d)，連續(xù)給藥4周。假手術(shù)組及AOB組均給予等量0.9%氯化鈉注射液1次/d，腹腔注射。

4 心臟功能測(cè)定 20%烏拉坦(0.5 ml/100 g)腹腔注射麻醉，心電監(jiān)護(hù)，氣管插管，呼吸機(jī)輔助呼吸，迅速打開胸腔，心功能測(cè)定管插至左心室尖，生理記錄儀監(jiān)測(cè)左心室收縮壓(left ventricular systolic pressure，LVSP)、左心室舒張末期壓(left ventricular end diastolic pressure，LVEDP)，等容收縮期左心室內(nèi)壓最大上升速率(+dp/dtmax，mmHg/s)，等容舒張期左心室內(nèi)壓最大下降速率(-dp/dtmax，mmHg/s)。

5 心臟指數(shù)(H/B)與左心室質(zhì)量指數(shù)(left ventricular mass index，LVMI)測(cè)定 心功能測(cè)定完畢后，迅速取出心臟，0.9%氯化鈉注射液沖洗干凈，濾紙吸干，稱量心臟重量，修剪出室間隔、左心室游離壁作為左心室質(zhì)量。全心重量與體質(zhì)量的比值為心臟指數(shù)(H/B，mg/g)，左心室質(zhì)量與體質(zhì)量的比作為左心室質(zhì)量指數(shù)(LVMI，mg/g)。取部分心肌組織迅速冷凍于-80℃冰箱內(nèi)以備Western blotting用，另取部分心尖組織4%甲醛溶液固定，用于Masson染色。

6 Masson染色 取左心室最大冠狀切面心肌組織，常規(guī)石蠟切片脫蠟后，按Masson染色試劑盒說明染，脫水、包埋，鏡下觀察膠原分布形態(tài)，心肌膠原纖維、黏液被染成藍(lán)色；胞質(zhì)、肌纖維被染成紅色；胞核則呈藍(lán)褐色。通過圖像分析系統(tǒng)，調(diào)節(jié)灰度以區(qū)別膠原和非膠原成分，測(cè)定心肌膠原容積分?jǐn)?shù)(collagen volume fraction，CVF)，CVF=膠原面積/總面積×100%，以CVF作為心肌纖維化指標(biāo)，每張切片均隨機(jī)選擇5個(gè)視野測(cè)量，計(jì)算其均值。

7 血清TGF-β1水平測(cè)定 心功能測(cè)定完畢后從右心室取血5 ml，2 000 r/min，離心20 min，取上清液按照試劑盒說明書操作。

8 Western blotting檢測(cè)蛋白表達(dá) 取適量心肌組織用干凈眼科剪剪成碎塊用PBS洗滌2次，加入細(xì)胞裂解液，低溫機(jī)器勻漿混勻，移入離心管中10 000 r/min，低溫離心10 min，取上清用BCA法行蛋白定量后制成蛋白樣品。上樣，進(jìn)行SDS-聚丙烯酰胺凝膠電泳，取出電泳后的膠浸入轉(zhuǎn)膜液平衡5 min，行半干法蛋白轉(zhuǎn)膜，5% BSA-PBST室溫封閉1 h。TGF-β1、Ⅰ、Ⅲ型膠原和β-actin一抗4℃孵育過夜，二抗室溫孵育1 h。經(jīng)洗滌、顯影、灰度掃描后，用Scion Corporation分析軟件對(duì)電泳條帶進(jìn)行測(cè)定，分別以目的條帶灰度與內(nèi)參條帶β-actin灰度的比值表示TGF-β1、Ⅰ型和Ⅲ型膠原纖維的蛋白表達(dá)水平。

9 實(shí)時(shí)熒光定量PCR檢測(cè)Smad3和Smad7 mRNA表達(dá) 按Trizol法進(jìn)行左心室心肌總RNA提取，42℃反轉(zhuǎn)錄50 min，95℃ 5 min滅活反轉(zhuǎn)錄酶，合成cDNA。實(shí)時(shí)熒光定量PCR采用大連寶生物SYBR Green Realtime PCR試劑盒，反應(yīng)條件：95℃ 60 s，1循環(huán)；95℃ 15 s、60℃ 15 s、72℃ 45 s、40個(gè)循環(huán)，于每個(gè)循環(huán)的第三步即72℃ 45s收集熒光信號(hào)。引物序列如下表所示：Smad3上游引物AGGGAAGGGGAAGAGCAACA，下游引物AAG TGAAGTGCTCGCACAGA；Smad7上游引物AACT GCAGACTGTCCAGAC，下游引物TTGGGAATCTGA AAGCCCCC；β-actin上游引物TCCTTCCTGGGTA TGGAATCCT，下游引物GCTCAGTAACAGTCCGC CTA。反應(yīng)結(jié)束后，取PCR產(chǎn)物瓊脂糖凝膠電泳，經(jīng)溴化乙錠染色后在分析儀下根據(jù)相對(duì)分子質(zhì)量的大小進(jìn)行結(jié)果判斷，用圖像分析系統(tǒng)分析條帶灰度，計(jì)算Smad3和Smad7與β-actin擴(kuò)增產(chǎn)物的比值并以此比值表示mRNA的表達(dá)水平。

10 統(tǒng)計(jì)學(xué)分析 數(shù)據(jù)均采用SPSS19.0統(tǒng)計(jì)軟件進(jìn)行分析，計(jì)量資料以±s表示，多組間比較采用單因素方差分析，兩組間比較采用q檢驗(yàn)，P＜0.05為差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義。

結(jié) 果

1 各組H/B、LVMI比較 與Sham組相比，模型組大鼠H/B、LVMI顯著升高(P＜0.05)；與模型組相比，Apelin-13組、SB431542組上述比值均顯著降低(P＜0.05)。見表1。

2 血流動(dòng)力學(xué)指標(biāo)比較 與Sham組比較，模型組+dp/dtmax、-dp/dtmax、LVSP均顯著下降(P＜0.05)，LVEDP則顯著升高(P＜0.05)；與模型組比較，Apelin-13及SB431542組+dp/dtmax、-dp/dtmax、LVSP均顯著升高(P＜0.05)，LVEDP則顯著降低(P＜0.05)。見表2。

3 Masson染色膠原含量比較 Masson三色染色光鏡下觀察細(xì)胞核呈藍(lán)褐色，心肌纖維呈紅色，膠原纖維呈藍(lán)色[13]。結(jié)果示：假手術(shù)組大鼠心肌只有血管周圍存在少量的膠原纖維，排列呈條索狀，分布均勻。與假手術(shù)組比較，其余3組心肌組織中膠原含量均明顯增加，呈破碎狀，分布不規(guī)則。與模型組比較，Apelin-13組、SB431542組膠原含量均明顯減少。通過圖像分析系統(tǒng)計(jì)算膠原含量發(fā)現(xiàn)，與假手術(shù)組比較，模型組CVF顯著升高(P＜0.05)；與模型組比較，Apelin-13組、SB431542組CVF顯著降低(P＜0.05)。見圖1、表3。

4 各組大鼠血清TGF-β1水平比較 與Sham組比較，AOB組血清TGF-β1水平明顯升高(P＜0.05)；與AOB組比較，Apelin-13組和SB431542組TGF-β1水平均明顯下降(P＜0.05)。見表3。

表1 各組H/B、LVMI比較Tab. 1 Cardiac index and LVMI in different groups (±s)

表1 各組H/B、LVMI比較Tab. 1 Cardiac index and LVMI in different groups (±s)

aP＜0.05, vs sham group;bP＜0.05, vs AOB group

GroupH/B (mg/g)LVMI (mg/g) Sham (n=10)2.76±0.112.06±0.13 AOB (n=8)4.28±0.13a3.24±0.14aSB431542 (n=8)4.02±0.14b3.04±0.11bApelin-13 (n=8)3.39±0.09b2.56±0.10b

表2 各組大鼠血流動(dòng)力學(xué)指標(biāo)比較Tab. 2 Hemodynamic index of rats in different groups (±s)

表2 各組大鼠血流動(dòng)力學(xué)指標(biāo)比較Tab. 2 Hemodynamic index of rats in different groups (±s)

aP＜0.05, vs sham group;bP＜0.05, vs AOB group

Group+dp/dtmax-dp/dtmaxLVSPLVEDP Sham (n=10)3 278±1083 079±47115±64.7±0.3 AOB (n=8)2 659±97a2 588±34a92±8a8.8±0.4aSB431542 (n=8)2 899±111b2 824±52b103±4b6.7±0.5bApelin-13 (n=8)3 101±84b2 891±29b115±3b5.1±0.5b

表3 各組大鼠CVF、血清TGF-β1水平的比較Tab. 3 CVF and TGF-β1protein expression levels in different groups (±s)

表3 各組大鼠CVF、血清TGF-β1水平的比較Tab. 3 CVF and TGF-β1protein expression levels in different groups (±s)

aP＜0.05, vs sham group;bP＜0.05, vs AOB group

GroupCVF (%)TGF-β1(pg/ml) Sham (n=10) 7.06±0.8339.22±0.96 AOB (n=8) 19.67±0.62a93.61±19.71aSB431542 (n=8)14.24±0.73b64.04±18.03bApelin-13 (n=8) 10.08±0.10b49.46±12.44b

圖 1 心肌組織Masson染色(×200)Fig. 1 Masson staining of myocardial tissue from sham group (A), AOB group (B), SB431542 group (C), apelin-13 group (D)

圖 2 免疫印跡示TGF-β1、Ⅰ型、Ⅲ型膠原表達(dá)水平及量化表Fig. 2 Western-blotting showing expression level of protein TGF-β1, collagen Ⅰ and collagenⅢ(aP＜0.05, vs sham group;bP＜0.05, vs AOB group)

圖 3 各組間Smad3、Smad7 mRNA表達(dá)量比較Fig. 3 Smad3 mRNA, Smad7 mRNA expression levels in different groups (aP＜0.05, vs sham group;bP＜0.05, vs AOB group)

5 TGF-β1、Ⅰ型和Ⅲ型膠原蛋白表達(dá)水平 與Sham組相比，模型組大鼠心肌組織TGF-β1、Ⅰ型和Ⅲ型膠原蛋白含量明顯上升(P＜0.05)。接受Apelin-13或SB431542治療后上述指標(biāo)較模型組則顯著下調(diào)(P＜0.05)。見圖2。

6 各組間大鼠心肌Smads3 mRNA、Smads7 mRNA比較 AOB組的Smad3 mRNA表達(dá)量比Sham組明顯上升，而Smad7 mRNA的表達(dá)量顯著下降(P＜0.05)。與模型組比較，Apelin-13組Smad3 mRNA表達(dá)量下調(diào)而Smad7 mRNA表達(dá)量明顯回升(P＜0.05)；SB431542組Smad3 mRNA較模型組明顯下調(diào)(P＜0.05)，Smad7 mRNA有所回升，但差異無統(tǒng)計(jì)學(xué)意義，Smad3 mRNA在Apelin-13、SB431542兩組間差異無統(tǒng)計(jì)學(xué)意義。見圖3。

討 論

高血壓性心臟病是長(zhǎng)期心臟后負(fù)荷增加導(dǎo)致的心臟結(jié)構(gòu)和功能改變的一種疾病，臨床表現(xiàn)復(fù)雜多樣[14]。心肌纖維化在HHD的發(fā)生和發(fā)展過程中起著至關(guān)重要的作用，表現(xiàn)為心肌細(xì)胞肥大、間質(zhì)和冠狀動(dòng)脈外膜膠原纖維的異常堆積、Ⅰ型和Ⅲ型膠原排列紊亂及比例失調(diào)，成為心臟舒縮功能障礙、惡性心律失常等不良心血管事件的病理學(xué)基礎(chǔ)[15]。本實(shí)驗(yàn)結(jié)果示：與假手術(shù)組相比，壓力超負(fù)荷大鼠的H/B、LVMI明顯升高；心臟收縮和舒張功能下降；Masson染色光鏡下可見心肌纖維增粗、斷裂，心肌膠原成分明顯增多且排列紊亂，CVF值升高；Ⅰ型膠原纖維表達(dá)量亦明顯上調(diào)。上述結(jié)果證實(shí)了本實(shí)驗(yàn)構(gòu)建的壓力超負(fù)荷大鼠存在明顯的心肌纖維化，與前人研究成果相符。

研究表明，血壓升高使血流動(dòng)力學(xué)不穩(wěn)定，致使心臟后負(fù)荷增加，可明顯刺激心肌成纖維細(xì)胞對(duì)TGF-β1的合成與分泌，也可見纖維連接素、膠原纖維蛋白的表達(dá)升高，心肌組織特異性表達(dá)的TGF-β1能導(dǎo)致心肌肥厚和心肌纖維化[16-17]。我們的實(shí)驗(yàn)結(jié)果提示：壓力超負(fù)荷大鼠血清和心肌組織中TGF-β1表達(dá)量均明顯升高，與上述研究結(jié)果相符，驗(yàn)證了壓力超負(fù)荷狀態(tài)下TGF-β1的病理性高表達(dá)。現(xiàn)已證實(shí)，由TGF-β1、TGF-β1受體(TβR)及其下游的Smads蛋白家族構(gòu)成的TGF-β1/Smads信號(hào)轉(zhuǎn)導(dǎo)通路是HHD患者心肌纖維化的最強(qiáng)促發(fā)因素。TGF-β是調(diào)節(jié)多器官細(xì)胞生長(zhǎng)分化的一類多肽，其生物學(xué)效應(yīng)豐富多樣，其中TGF-β1是在哺乳動(dòng)物中含量最高且生物學(xué)活性最強(qiáng)的一種亞型。Smads蛋白是TGF-β1下游的信號(hào)分子，是TGF-β1唯一底物?；罨腡GF-β1首先與TβR結(jié)合形成受體配體復(fù)合物，該復(fù)合物進(jìn)一步磷酸化Smad2、Smad3分別形成p-Smad2、p-Smad3，后兩者再與Smad4形成異源寡聚復(fù)合物，后者轉(zhuǎn)移至胞核內(nèi)，通過編碼相關(guān)調(diào)控基因來介導(dǎo)TGF-β1致心肌纖維化效應(yīng)。Smad7則是TGF-β1/Smads信號(hào)通路中的負(fù)性調(diào)節(jié)蛋白，Smad7由細(xì)胞核轉(zhuǎn)位至胞質(zhì)后可抑制蛋白激酶型受體TβR對(duì)Smad2/Smad3的磷酸化，阻斷信號(hào)向核內(nèi)轉(zhuǎn)導(dǎo)，進(jìn)而負(fù)性調(diào)節(jié)TGF-β1/Smads信號(hào)通路的致纖維化效應(yīng)[18]。

我們的前期研究發(fā)現(xiàn)：Apelin-13可改善壓力超負(fù)荷所致的心肌纖維化，并與劑量相關(guān)，但其抗MF的具體機(jī)制尚不清楚[11]。本實(shí)驗(yàn)在前期研究的基礎(chǔ)上，同樣采用腹主動(dòng)脈縮窄術(shù)構(gòu)建壓力超負(fù)荷大鼠心肌纖維化模型，選用100 μg/(kg·d)濃度的Apelin-13進(jìn)行預(yù)處理，以SB431542抑制TGF-β1/Smads信號(hào)通路的激活為參照，檢測(cè)通路蛋白基因的表達(dá)情況。結(jié)果顯示：模型組大鼠血清和心肌組織中TGF-β1表達(dá)量與假手術(shù)組相比明顯增加，實(shí)時(shí)定量PCR檢測(cè)示模型組大鼠心肌組織中Smad3 mRNA表達(dá)水平亦明顯升高、Smad7 mRNA則下降；Apelin-13、SB431542處理組TGF-β1、Smad3 mRNA較模型組可見明顯下調(diào)，Apelin-13處理組Smad7 mRNA與模型組相比明顯回升，而SB431542處理組組無明顯改變。本研究提示我們：Apelin-13可能通過降低血清TGF-β1的濃度，抑制Smad3的激活，同時(shí)上調(diào)TGF-β1/ Smads信號(hào)通路中纖維化負(fù)反饋調(diào)節(jié)信使Smad7的表達(dá)來抑制心肌纖維化的發(fā)生。

綜上所述，壓力超負(fù)荷致MF可能與心肌細(xì)胞內(nèi)TGF-β1/Smads信號(hào)通路蛋白TGF-β1、Smad3、Smad7的表達(dá)紊亂密切相關(guān)，Apelin-13抗心肌肥厚及纖維化的作用可能是通過減弱此通路的異常激活實(shí)現(xiàn)的。

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Effect of apelin-13 on myocardial fibrosis in rats induced by pressure overload and TGF-β1/ Smads pathway

WANG Xiang-bing1, ZHANG Zhi1, LIN Duo-duo1, HUANG Xiu-yan21Department of Cardiology, Third Affiliated Hospital of Liaoning Medical University, Jinzhou 121001, Liaoning Province, China;
2Department of Obstetrical, ShengJing Hospital of China Medical University, Shenyang 110004, Liaoning Province, China

ZHANG Zhi. Email: ningcheng631@163.com

Objective To study the effect of apelin-13 on myocardial fibrosis in rats induced by pressure overload and clarify its mechanism. Methods Forty SD rats were randomly divided into sham-operation group, model group, apelin-13 group and SB431542 group, 10 in each group. Rats in the sham-operation group were only separated their abdomens aorta. The other three groups were made into the model of myocardial fibrosis successfully. Three days after modeling, rats in different groups were given corresponding medication interventions. 4 weeks later, their cardiac index and left ventricular mass index (LVMI) were estimated. Morphology of collagen in myocardial tissue was observed with Masson staining, collagen volume fraction (CVF) in left ventricular interstitial tissue was measured by image analysis and the serum transforming growth factor β1( TGF-β1) expression was detected using ELISA and expressions of TGF-β1protein, the collagenⅠ,Ⅲ were detected by Western-blotting. The Smad3 and Smad7 mRNA in myocardial tissue expressions were detected using real-time PCR. Results Compared with the Sham group, the cardiac index, LVMI, CVF in left ventricular interstitial tissue and the serum TGF-β1level of the AOB group significantly increased (P＜0.05) and the TGF-β1, the collagenⅠ,Ⅲ protein expression levels were significantly higher than that of the Sham group (P＜0.05). Compared with the AOB group, the cardiac index, LVMI, CVF, the serum TGF-β1level obviously decreased (P＜0.05) and the TGF-β1, the collagen fibersⅠand Ⅲ expression levels significantly declined (P＜0.05) in the Apelin-13 group and the SB431542 group. The Smad7 mRNA expression in each group displayed contrary tendency. Conclusion Apelin-13 can alleviate myocardial fibrosis induced by pressure overload in rats through partially inhibiting TGF-β1-Smads signal pathway.

apelin-13; pressure overload; myocardial fibrosis; transforming growth factorβ1

R 541

A

2095-5227(2014)10-1049-05

10.3969/j.issn.2095-5227.2014.10.021

時(shí)間：2014-07-18 10:17

http://www.cnki.net/kcms/detail/11.3275.R.20140718.1017.002.html

2014-06-09

遼寧省科學(xué)技術(shù)計(jì)劃項(xiàng)目(2012225019)

Supported by the Science and Technology Plan Project of Liaoning Science and Technology Committee(2012225019)

王向兵，男，碩士。研究方向：心肌損傷與修復(fù)。Email: wangbing2423602@163.com

張志，男，博士，主任醫(yī)師，主任。Email: ningcheng631@163.com