王東升等

甘肅省新獸藥工程重點(diǎn)實(shí)驗(yàn)室，甘肅蘭州 730050；2.甘肅農(nóng)業(yè)大學(xué)動(dòng)物醫(yī)學(xué)院，甘肅蘭州 730070）

摘要：為了研究大腸桿菌感染對(duì)豬血液生化指標(biāo)的影響，將16頭1月齡的仔豬隨機(jī)分為對(duì)照組和試驗(yàn)組，分別肌內(nèi)注射0.045 mL/kg生理鹽水和4.5億CFU/kg大腸桿菌，并于接種后第24小時(shí)從豬前腔靜脈采血，分離血清，用全自動(dòng)生化分析儀測(cè)定血清生化指標(biāo)。結(jié)果可以看出，與對(duì)照組豬相比，試驗(yàn)組豬血清中AST、γ-GT、ALP、GLB和LDH含量顯著升高（P<0.05），CREA極顯著升高（P<0.01），而ALB含量和A/G極顯著降低（P<0.01），鈣含量、LT/ST和鈣/磷的值顯著減小（P<0.05）。說明大腸桿菌感染可引起豬肝、腎和心功能的異常。

關(guān)鍵詞：豬；大腸桿菌；血液生化指標(biāo)

中圖分類號(hào)： S858.285.1+2 文獻(xiàn)標(biāo)志碼： A 文章編號(hào)：1002-1302（2014）04-0172-03

收稿日期：2013-08-23

基金項(xiàng)目：國(guó)家科技支撐計(jì)劃（編號(hào)：2008BADB4B01-2）。

作者簡(jiǎn)介：王東升（1979—），男，甘肅臨洮人，碩士，助理研究員，主要從事中藥藥理與奶牛疾病的研究。E-mail：lzmyswds@126.com。

通信作者：嚴(yán)作廷，博士，研究員。E-mail：yanzuoting@caas.cn。仔豬大腸桿菌病是由大腸桿菌引起的仔豬腸道感染的傳染性疾病，由發(fā)病日齡和臨床癥狀的差異可將該病分為仔豬黃痢、仔豬白痢和豬水腫病3種，以發(fā)生腸炎、腸毒血癥為特征[1]。這些疾病在世界各地均有發(fā)生，常常造成新生仔豬的大批死亡或生長(zhǎng)發(fā)育不良，從而嚴(yán)重阻礙養(yǎng)豬業(yè)的發(fā)展。目前對(duì)大腸桿菌C83-1的研究主要集中在體外抑菌[2]、藥物對(duì)其殺滅作用[3]及疫苗開發(fā)研究[4]等方面，但尚未見關(guān)于該菌感染后豬血液生化指標(biāo)變化的報(bào)道。血液通過在機(jī)體的循環(huán)參與機(jī)體營(yíng)養(yǎng)物質(zhì)和氧氣的運(yùn)輸，從而將代謝廢物轉(zhuǎn)運(yùn)至排泄器官或移除，此外還參與抵抗細(xì)菌、病毒等病原微生物的感染等多種功能活動(dòng)，對(duì)維持動(dòng)物機(jī)體的正常新陳代謝發(fā)揮重要作用。血液生化指標(biāo)是動(dòng)物機(jī)體新陳代謝過程的內(nèi)在反映，也是研究動(dòng)物病理學(xué)、生理學(xué)、毒理學(xué)和探討疾病發(fā)病機(jī)理的重要參考指標(biāo)，可以作為判斷動(dòng)物機(jī)體健康狀況的重要依據(jù)[5]。因此通過研究大腸桿菌感染后豬血液相關(guān)生化指標(biāo)的變化，可以為臨床診斷和治療該病提供理論依據(jù)。

1材料與方法

1.1試驗(yàn)菌種

大腸桿菌C83-1，購(gòu)自中國(guó)獸醫(yī)藥品監(jiān)察所。攻毒前接種于普通肉湯管中，37 ℃ 下培養(yǎng)18～20 h后鏡檢，純粹后吸取0.5 mL接種于營(yíng)養(yǎng)瓊脂平板上，使平板全部浸潤(rùn)后置于37 ℃培養(yǎng)20 h；用生理鹽水將菌苔洗下，將洗下的菌液混合后進(jìn)行平板計(jì)數(shù)，結(jié)果濃度為100億CFU/mL；將菌液置于 4 ℃ 保存過夜。

1.2試驗(yàn)動(dòng)物分組與處理

選擇健康狀況良好、日齡相近的16頭雜交豬，體重 8.0～10.0 kg，雌、雄兼有，均購(gòu)自蘭州市某養(yǎng)豬場(chǎng)。隨機(jī)均分為對(duì)照組和試驗(yàn)組，于對(duì)照組肌內(nèi)注射0.045 mL/kg生理鹽水，試驗(yàn)組肌內(nèi)注射4.5億CFU/kg體重的大腸桿菌。在接種后第24小時(shí)從豬前腔靜脈采10～15 mL血，分離血清并于-80 ℃保存。

1.3生化指標(biāo)測(cè)定

用邁瑞B(yǎng)S-420全自動(dòng)生化分析儀（深圳邁瑞生物醫(yī)療電子股份有限公司）測(cè)定血清生化指標(biāo)，主要包括天門冬氨酸氨基轉(zhuǎn)移酶（AST）、丙氨酸氨基轉(zhuǎn)移酶（ALT）、γ-谷氨酸轉(zhuǎn)肽酶（γ-GT）、堿性磷酸酶（ALP）、總蛋白（TP）、白蛋白（ALB）、球蛋白（GLB）、總膽固醇（TC）、總血紅素（TBiL）、直接血紅素（DBiL）、肌酐（CREA）、尿素（UREA）、尿酸（UA）、肌酸激酶（CK）、乳酸脫氫酶（LDH）、血糖（GLU）、鈣（Ca）、磷（P）和鎂（Mg）等19項(xiàng)生化指標(biāo)。計(jì)算ALB與GLB的比值（A/G）、ALT與AST的比值（LT/ST）、鈣磷比（鈣/磷）。試驗(yàn)所用試劑盒均為深圳邁瑞生物醫(yī)療電子股份有限公司的產(chǎn)品。

1.4數(shù)據(jù)處理

試驗(yàn)數(shù)據(jù)以“平均數(shù)±標(biāo)準(zhǔn)差”表示，采用SPSS 17.0軟件進(jìn)行統(tǒng)計(jì)分析，組間數(shù)據(jù)差異性比較采用獨(dú)立樣本t檢驗(yàn)。

2結(jié)果與分析

大腸桿菌感染對(duì)豬血液生化指標(biāo)的影響見表1。其中AST、γ-GT、ALP、GLB、ALB、A/G、LT/ST、TC、TBiL、DBiL、ALT、TP、GLU為肝功能相關(guān)指標(biāo)，CREA、UREA、UA為腎功能相關(guān)指標(biāo)，血清鈣含量、鈣/磷比、血清磷含量、血清鎂含量為血清離子的變化指標(biāo)，LDH、CK為心功能相關(guān)指標(biāo)。

2.1肝功能相關(guān)指標(biāo)的變化

3結(jié)論與討論

肝臟是動(dòng)物機(jī)體中含酶最豐富的器官，其酶含量約占肝臟總蛋白含量的2/3。血液中的ALT與AST是動(dòng)物體內(nèi)2種重要的轉(zhuǎn)氨酶，是反映動(dòng)物肝臟功能的重要指標(biāo)[6]。當(dāng)肝組織發(fā)生病變或受到損傷后，肝細(xì)胞內(nèi)的ALT、AST釋放入血漿，致使血清中的ALT、AST酶活性增強(qiáng)，但其增強(qiáng)幅度不一定與肝細(xì)胞的損傷程度成正比[7-8]。表現(xiàn)為在輕、中度肝細(xì)胞損害時(shí)，ALT漏出率大于AST；在重度肝細(xì)胞損害時(shí)線粒體遭到破壞，AST漏出增加[9]，因此醫(yī)學(xué)上常將ALT、AST作為診斷肝臟疾病的酶學(xué)指標(biāo)。血清中的γ-GT主要來自肝臟，因此具有較強(qiáng)的特異性，當(dāng)肝膽系統(tǒng)有疾病時(shí)，γ-GT升高，因此常以此酶作為病畜能否恢復(fù)到正常狀態(tài)的標(biāo)志[10]。當(dāng)動(dòng)物肝臟發(fā)生疾病時(shí)，肝細(xì)胞過度產(chǎn)生ALP，并經(jīng)淋巴管和肝竇進(jìn)入血液，同時(shí)由于肝內(nèi)膽管膽汁排泄障礙，過度的ALP反流入血液而引起血清ALP明顯升高。本試驗(yàn)中，與對(duì)照組相比，試驗(yàn)組AST、γ-GT、ALP均顯著升高，LT/ST顯著降低，說明大腸桿菌可以引起豬的肝損傷、肝細(xì)胞膜通透性增加，進(jìn)而引起肝細(xì)胞中AST釋放入血液中，γ-GT和過度產(chǎn)生的ALP也進(jìn)入血液中，進(jìn)而導(dǎo)致血清中AST、γ-GT、ALP升高。endprint

肝臟參與蛋白質(zhì)的合成與分解代謝，血清TP含量和ALB含量是反映肝功能的重要指標(biāo)，ALB由肝臟產(chǎn)生，是血漿蛋白的主要組成成分，在血液膠體滲透壓維持和體內(nèi)代謝物質(zhì)轉(zhuǎn)運(yùn)及營(yíng)養(yǎng)等方面發(fā)揮重要作用，當(dāng)肝功能受損時(shí)，ALB的分泌減少[11]。GLB與機(jī)體免疫功能密切相關(guān)，當(dāng)機(jī)體發(fā)生應(yīng)激反應(yīng)及各種原因造成的肝損傷時(shí)，ALB含量降低，GLB含量升高[12-13]。本試驗(yàn)中試驗(yàn)組GLB顯著高于對(duì)照組，而ALB、A/G顯著低于對(duì)照組，說明大腸桿菌可以引起豬肝臟對(duì)蛋白質(zhì)代謝功能異常，這可能與豬感染大腸桿菌后，肝細(xì)胞功能受損、合成ALB減少，但由于大腸桿菌刺激機(jī)體的免疫系統(tǒng)而產(chǎn)生的免疫球蛋白增多有關(guān)。

腎臟是動(dòng)物的主要泌尿器官和排泄器官，血液中的UREA來源于肝臟，而去路是通過腎臟隨尿排出。當(dāng)腎實(shí)質(zhì)受損時(shí)，腎小球?yàn)V過率下降，濾過增多，導(dǎo)致血液中UREA濃度升高。UA主要產(chǎn)生于肝臟，在腎臟中與白蛋白結(jié)合，大部分被腎小管重吸收并轉(zhuǎn)變?yōu)槟蚰宜仉S尿排出，腎臟嚴(yán)重?fù)p傷時(shí)，血液中的UA升高。CREA為體內(nèi)物質(zhì)代謝過程的中間產(chǎn)物，當(dāng)腎實(shí)質(zhì)損害、腎小球?yàn)V過率降低到臨界點(diǎn)后，血中的CREA濃度就會(huì)急劇上升，但是由于腎臟的儲(chǔ)備力和代償力很大，因此在腎小球受損的早期或輕度損害時(shí)，血液中的CREA濃度可能是正常的，但當(dāng)血液中的CREA含量明顯增高時(shí)，常表現(xiàn)出腎臟功能嚴(yán)重受損[14]。本試驗(yàn)中試驗(yàn)組CREA極顯著升高，UA有上升趨勢(shì)，UREA無顯著異常，說明豬感染大腸桿菌可引起腎功能異常。

體液的主要成分是水和電解質(zhì)，電解質(zhì)在維持體液滲透壓和細(xì)胞內(nèi)外的水及酸堿平衡中發(fā)揮著重要作用。機(jī)體主要通過腎臟維持體液的平衡和保持內(nèi)環(huán)境穩(wěn)定，腎功能異常時(shí)體液中的離子發(fā)生變化。鈣是動(dòng)物機(jī)體中含量最多的常量金屬元素，嚴(yán)重的全身感染性疾病可引起低鈣血癥，而且病情越嚴(yán)重，血鈣水平越低[15]，腎病綜合征可引起血鈣水平降低[16]。腎臟發(fā)生疾病時(shí)，對(duì)磷的排泄功能下降，可引起血液磷的濃度升高。本試驗(yàn)中試驗(yàn)組血清鈣含量和鈣/磷降低，血清磷含量顯著升高，這表明大腸桿菌感染可引起豬的鈣、磷代謝紊亂，這可能腎功能異常有關(guān)。

血清中的CK和LDH是肌細(xì)胞損傷的重要指標(biāo)，臨床上常用于心肌損害的輔助診斷。LDH活性可反映細(xì)胞內(nèi)無氧酵解的活躍程度，在一定程度上能夠反映機(jī)體的應(yīng)激能力[17]。AST在一定程度上也可反映心肌細(xì)胞的損傷。本試驗(yàn)中，與對(duì)照組相比，試驗(yàn)組LDH顯著升高，表明豬感染大腸桿菌后，心肌細(xì)胞膜通透性增加，造成LDH的泄漏；而AST升高，LT/ST顯著減小，表明感染引起心肌細(xì)胞受損嚴(yán)重，這可能與大腸桿菌感染導(dǎo)致豬呼吸困難而導(dǎo)致的機(jī)體缺氧、心臟代償功能增強(qiáng)有關(guān)。

本試驗(yàn)采用肌內(nèi)注射大腸桿菌C83-1感染豬，通過對(duì)豬血清生化指標(biāo)變化的分析，研究了大腸桿菌感染對(duì)豬肝、腎和心功能的影響。試驗(yàn)結(jié)果表明，大腸桿菌感染可使豬血清中AST、γ-GT、ALP、GLB和LDH含量顯著升高（P<0.05），CREA極顯著升高（P<0.01），而ALB含量和A/G極顯著降低（P<0.01），鈣含量、LT/ST和鈣/磷的值顯著降低（P<005）。這說明大腸桿菌感染可引起豬肝、腎和心功能的異常。

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肝臟參與蛋白質(zhì)的合成與分解代謝，血清TP含量和ALB含量是反映肝功能的重要指標(biāo)，ALB由肝臟產(chǎn)生，是血漿蛋白的主要組成成分，在血液膠體滲透壓維持和體內(nèi)代謝物質(zhì)轉(zhuǎn)運(yùn)及營(yíng)養(yǎng)等方面發(fā)揮重要作用，當(dāng)肝功能受損時(shí)，ALB的分泌減少[11]。GLB與機(jī)體免疫功能密切相關(guān)，當(dāng)機(jī)體發(fā)生應(yīng)激反應(yīng)及各種原因造成的肝損傷時(shí)，ALB含量降低，GLB含量升高[12-13]。本試驗(yàn)中試驗(yàn)組GLB顯著高于對(duì)照組，而ALB、A/G顯著低于對(duì)照組，說明大腸桿菌可以引起豬肝臟對(duì)蛋白質(zhì)代謝功能異常，這可能與豬感染大腸桿菌后，肝細(xì)胞功能受損、合成ALB減少，但由于大腸桿菌刺激機(jī)體的免疫系統(tǒng)而產(chǎn)生的免疫球蛋白增多有關(guān)。

腎臟是動(dòng)物的主要泌尿器官和排泄器官，血液中的UREA來源于肝臟，而去路是通過腎臟隨尿排出。當(dāng)腎實(shí)質(zhì)受損時(shí)，腎小球?yàn)V過率下降，濾過增多，導(dǎo)致血液中UREA濃度升高。UA主要產(chǎn)生于肝臟，在腎臟中與白蛋白結(jié)合，大部分被腎小管重吸收并轉(zhuǎn)變?yōu)槟蚰宜仉S尿排出，腎臟嚴(yán)重?fù)p傷時(shí)，血液中的UA升高。CREA為體內(nèi)物質(zhì)代謝過程的中間產(chǎn)物，當(dāng)腎實(shí)質(zhì)損害、腎小球?yàn)V過率降低到臨界點(diǎn)后，血中的CREA濃度就會(huì)急劇上升，但是由于腎臟的儲(chǔ)備力和代償力很大，因此在腎小球受損的早期或輕度損害時(shí)，血液中的CREA濃度可能是正常的，但當(dāng)血液中的CREA含量明顯增高時(shí)，常表現(xiàn)出腎臟功能嚴(yán)重受損[14]。本試驗(yàn)中試驗(yàn)組CREA極顯著升高，UA有上升趨勢(shì)，UREA無顯著異常，說明豬感染大腸桿菌可引起腎功能異常。

體液的主要成分是水和電解質(zhì)，電解質(zhì)在維持體液滲透壓和細(xì)胞內(nèi)外的水及酸堿平衡中發(fā)揮著重要作用。機(jī)體主要通過腎臟維持體液的平衡和保持內(nèi)環(huán)境穩(wěn)定，腎功能異常時(shí)體液中的離子發(fā)生變化。鈣是動(dòng)物機(jī)體中含量最多的常量金屬元素，嚴(yán)重的全身感染性疾病可引起低鈣血癥，而且病情越嚴(yán)重，血鈣水平越低[15]，腎病綜合征可引起血鈣水平降低[16]。腎臟發(fā)生疾病時(shí)，對(duì)磷的排泄功能下降，可引起血液磷的濃度升高。本試驗(yàn)中試驗(yàn)組血清鈣含量和鈣/磷降低，血清磷含量顯著升高，這表明大腸桿菌感染可引起豬的鈣、磷代謝紊亂，這可能腎功能異常有關(guān)。

血清中的CK和LDH是肌細(xì)胞損傷的重要指標(biāo)，臨床上常用于心肌損害的輔助診斷。LDH活性可反映細(xì)胞內(nèi)無氧酵解的活躍程度，在一定程度上能夠反映機(jī)體的應(yīng)激能力[17]。AST在一定程度上也可反映心肌細(xì)胞的損傷。本試驗(yàn)中，與對(duì)照組相比，試驗(yàn)組LDH顯著升高，表明豬感染大腸桿菌后，心肌細(xì)胞膜通透性增加，造成LDH的泄漏；而AST升高，LT/ST顯著減小，表明感染引起心肌細(xì)胞受損嚴(yán)重，這可能與大腸桿菌感染導(dǎo)致豬呼吸困難而導(dǎo)致的機(jī)體缺氧、心臟代償功能增強(qiáng)有關(guān)。

本試驗(yàn)采用肌內(nèi)注射大腸桿菌C83-1感染豬，通過對(duì)豬血清生化指標(biāo)變化的分析，研究了大腸桿菌感染對(duì)豬肝、腎和心功能的影響。試驗(yàn)結(jié)果表明，大腸桿菌感染可使豬血清中AST、γ-GT、ALP、GLB和LDH含量顯著升高（P<0.05），CREA極顯著升高（P<0.01），而ALB含量和A/G極顯著降低（P<0.01），鈣含量、LT/ST和鈣/磷的值顯著降低（P<005）。這說明大腸桿菌感染可引起豬肝、腎和心功能的異常。

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肝臟參與蛋白質(zhì)的合成與分解代謝，血清TP含量和ALB含量是反映肝功能的重要指標(biāo)，ALB由肝臟產(chǎn)生，是血漿蛋白的主要組成成分，在血液膠體滲透壓維持和體內(nèi)代謝物質(zhì)轉(zhuǎn)運(yùn)及營(yíng)養(yǎng)等方面發(fā)揮重要作用，當(dāng)肝功能受損時(shí)，ALB的分泌減少[11]。GLB與機(jī)體免疫功能密切相關(guān)，當(dāng)機(jī)體發(fā)生應(yīng)激反應(yīng)及各種原因造成的肝損傷時(shí)，ALB含量降低，GLB含量升高[12-13]。本試驗(yàn)中試驗(yàn)組GLB顯著高于對(duì)照組，而ALB、A/G顯著低于對(duì)照組，說明大腸桿菌可以引起豬肝臟對(duì)蛋白質(zhì)代謝功能異常，這可能與豬感染大腸桿菌后，肝細(xì)胞功能受損、合成ALB減少，但由于大腸桿菌刺激機(jī)體的免疫系統(tǒng)而產(chǎn)生的免疫球蛋白增多有關(guān)。

腎臟是動(dòng)物的主要泌尿器官和排泄器官，血液中的UREA來源于肝臟，而去路是通過腎臟隨尿排出。當(dāng)腎實(shí)質(zhì)受損時(shí)，腎小球?yàn)V過率下降，濾過增多，導(dǎo)致血液中UREA濃度升高。UA主要產(chǎn)生于肝臟，在腎臟中與白蛋白結(jié)合，大部分被腎小管重吸收并轉(zhuǎn)變?yōu)槟蚰宜仉S尿排出，腎臟嚴(yán)重?fù)p傷時(shí)，血液中的UA升高。CREA為體內(nèi)物質(zhì)代謝過程的中間產(chǎn)物，當(dāng)腎實(shí)質(zhì)損害、腎小球?yàn)V過率降低到臨界點(diǎn)后，血中的CREA濃度就會(huì)急劇上升，但是由于腎臟的儲(chǔ)備力和代償力很大，因此在腎小球受損的早期或輕度損害時(shí)，血液中的CREA濃度可能是正常的，但當(dāng)血液中的CREA含量明顯增高時(shí)，常表現(xiàn)出腎臟功能嚴(yán)重受損[14]。本試驗(yàn)中試驗(yàn)組CREA極顯著升高，UA有上升趨勢(shì)，UREA無顯著異常，說明豬感染大腸桿菌可引起腎功能異常。

體液的主要成分是水和電解質(zhì)，電解質(zhì)在維持體液滲透壓和細(xì)胞內(nèi)外的水及酸堿平衡中發(fā)揮著重要作用。機(jī)體主要通過腎臟維持體液的平衡和保持內(nèi)環(huán)境穩(wěn)定，腎功能異常時(shí)體液中的離子發(fā)生變化。鈣是動(dòng)物機(jī)體中含量最多的常量金屬元素，嚴(yán)重的全身感染性疾病可引起低鈣血癥，而且病情越嚴(yán)重，血鈣水平越低[15]，腎病綜合征可引起血鈣水平降低[16]。腎臟發(fā)生疾病時(shí)，對(duì)磷的排泄功能下降，可引起血液磷的濃度升高。本試驗(yàn)中試驗(yàn)組血清鈣含量和鈣/磷降低，血清磷含量顯著升高，這表明大腸桿菌感染可引起豬的鈣、磷代謝紊亂，這可能腎功能異常有關(guān)。

血清中的CK和LDH是肌細(xì)胞損傷的重要指標(biāo)，臨床上常用于心肌損害的輔助診斷。LDH活性可反映細(xì)胞內(nèi)無氧酵解的活躍程度，在一定程度上能夠反映機(jī)體的應(yīng)激能力[17]。AST在一定程度上也可反映心肌細(xì)胞的損傷。本試驗(yàn)中，與對(duì)照組相比，試驗(yàn)組LDH顯著升高，表明豬感染大腸桿菌后，心肌細(xì)胞膜通透性增加，造成LDH的泄漏；而AST升高，LT/ST顯著減小，表明感染引起心肌細(xì)胞受損嚴(yán)重，這可能與大腸桿菌感染導(dǎo)致豬呼吸困難而導(dǎo)致的機(jī)體缺氧、心臟代償功能增強(qiáng)有關(guān)。

本試驗(yàn)采用肌內(nèi)注射大腸桿菌C83-1感染豬，通過對(duì)豬血清生化指標(biāo)變化的分析，研究了大腸桿菌感染對(duì)豬肝、腎和心功能的影響。試驗(yàn)結(jié)果表明，大腸桿菌感染可使豬血清中AST、γ-GT、ALP、GLB和LDH含量顯著升高（P<0.05），CREA極顯著升高（P<0.01），而ALB含量和A/G極顯著降低（P<0.01），鈣含量、LT/ST和鈣/磷的值顯著降低（P<005）。這說明大腸桿菌感染可引起豬肝、腎和心功能的異常。

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