王婷，夏春，李麗，張強 李建兵，程莎

高效液相色譜儀蒸發(fā)光散射檢測器校準(zhǔn)用標(biāo)準(zhǔn)物質(zhì)的選擇

王婷，夏春，李麗，張強 李建兵，程莎

（青島市計量測試所，山東青島 266101） （青島市產(chǎn)品質(zhì)量監(jiān)督檢驗所，山東青島 266061）

對高效液相色譜蒸發(fā)光散射檢測器（ELSD）校準(zhǔn)用標(biāo)準(zhǔn)樣品蔗糖-甲醇溶液和對乙酰氨基酚-甲醇溶液進行了研究。實驗表明，用蔗糖-甲醇溶液和對乙酰氨基酚-甲醇溶液校準(zhǔn)具有ELSD的高效液相色譜儀，其保留時間、峰面積、最低檢測濃度3個參數(shù)均符合檢定校準(zhǔn)用標(biāo)準(zhǔn)物質(zhì)要求。但蔗糖-甲醇溶液色譜峰的對稱性差且響應(yīng)值明顯低于對乙酰氨基酚-甲醇溶液，因此用后者作為ELSD檢校用標(biāo)準(zhǔn)物質(zhì)更適合。

高效液相色譜儀；蒸發(fā)光散射檢測器；蔗糖；對乙酰氨基酚

檢測器作為高效液相色譜儀的一個重要組成部分，其發(fā)展在某種意義上決定著HPLC技術(shù)的進步。靈敏度高、性能穩(wěn)定的通用型檢測器的缺乏，在一定程度上制約了HPLC的應(yīng)用［1］。液相色譜儀-蒸發(fā)光散射檢測器(ESLD）是20世紀(jì)90年代開始應(yīng)用的一種新型質(zhì)量檢測器。由于ESLD無需樣品具有光吸收特性，無需帶有發(fā)色團或熒光基團，對高效液相色譜儀現(xiàn)有的傳統(tǒng)檢測器是一個很好的補充。針對磷脂、糖類、未衍生的脂肪酸和氨基酸物質(zhì)的分析和一些抗生物類的藥物分離效果很好，在我國中藥、食品領(lǐng)域有著廣泛應(yīng)用。

2002年實施的國家計量檢定規(guī)程JJG 705-2002 《液相色譜儀》沒有列入ELSD，目前對ELSD的檢校還處于空白狀態(tài)。2005年中國藥典列出了必須使用ELSD檢測的26種藥品，如黃芪、銀杏葉片、地膚子、知母、浙貝母、硫酸卡那霉素等［2］。隨著此類檢測器越來越被廣泛應(yīng)用，相關(guān)計量技術(shù)委員會應(yīng)盡快將其列入規(guī)程規(guī)范的范圍，研究補充現(xiàn)行液相色譜儀檢定規(guī)程的ELSD的檢定方法和標(biāo)準(zhǔn)物質(zhì)，以實現(xiàn)被檢儀器的有效溯源。為此筆者對ELSD檢校時常用標(biāo)準(zhǔn)樣品蔗糖-甲醇溶液和對乙酰氨基酚-甲醇溶液進行了研究。

1 實驗部分

1．1 ELSD檢測原理

ELSD檢測原理是首先將柱洗脫液霧化形成氣溶膠，然后在加熱的漂移管中將溶劑蒸發(fā)，最后余下的不揮發(fā)性溶質(zhì)顆粒在光散射檢測池中得到檢測。全過程主要包括流動相的霧化、流動相的蒸發(fā)、對含有待測物的剩余顆粒的光散射3個步驟。此類檢測器有以下特點：信號響應(yīng)與樣品質(zhì)量相關(guān)，可獲得未知物的質(zhì)量信息；多溶劑梯度可獲得穩(wěn)定的基線，無溶劑峰干擾，受溫度影響小；分離復(fù)雜樣品時，流動相中可適當(dāng)添加改性劑，如乙酸銨、冰乙酸、甲酸、TFA，氨水、三乙胺等。

1．2 ELSD校準(zhǔn)用物質(zhì)的選擇

根據(jù)國內(nèi)外幾家大型公司對ELSD的驗收方法和所用校準(zhǔn)物質(zhì)的比較分析，選擇蔗糖和對乙酰氨基酚進行研究。

1．3 主要儀器與試劑

高效液相色譜儀：LC-3000B型，配UM-5000型ELSD（上海通微儀器有限公司），安徽晥儀科技有限公司；

蔗糖（C12H22O11·H2O）：純度不低于99.0%，美國Sigma公司；

對乙酰氨基酚（C8H9NO2）：純度不低于99.0%，美國Sigma公司；

甲醇：色譜純，美國Sigma公司。

1．4 色譜條件

色譜柱：ENDURO C18(250 mm×4.6 mm ，5μm)；流動相：甲醇，流速為1.0 mL／min；漂移管溫度：30℃；氮氣壓力：3.0×105Pa；進樣體積：20 μL。

1．5 標(biāo)準(zhǔn)溶液配制

分別精確稱取25 mg蔗糖和對乙酰氨基酚于250 mL容量瓶中，加入甲醇溶解并定容至刻度，混勻，即得質(zhì)量濃度為1.0×10-4g／mL的標(biāo)準(zhǔn)溶液。分別精確稱取50 μg蔗糖和對乙酰氨基酚于500 mL容量瓶中，加入甲醇溶解并定容至刻度，混勻，即得質(zhì)量濃度為1.0×10-7g／mL的標(biāo)準(zhǔn)溶液。

2 結(jié)果與討論

2．1 保留時間和峰面積測定

在1.4色譜條件下，分別對1.0×10-4g／mL的蔗糖-甲醇溶液和對乙酰氨基酚-甲醇溶液進行分析，色譜譜圖見圖1、圖2，保留時間、峰面積及相對標(biāo)準(zhǔn)偏差見表1。JJG 705-2002［3］中3.4 節(jié)整機性能要求定性測量重復(fù)性（6次測量結(jié)果的相對標(biāo)準(zhǔn)偏差）不超過1.5%；定量測量重復(fù)性（6次測量結(jié)果的相對標(biāo)準(zhǔn)偏差）不超過3.0%。由表1可知，保留時間、峰面積兩個參數(shù)均符合檢定校準(zhǔn)用標(biāo)準(zhǔn)物質(zhì)的要求。

從圖1、圖2可以看出，蔗糖-甲醇溶液色譜峰的對稱性不如對乙酰氨基酚-甲醇溶液色譜的對稱性好。由表1可知，蔗糖-甲醇溶液和對乙酰氨基酚-甲醇溶液的出峰時間接近，而蔗糖-甲醇溶液稍早些，蔗糖-甲醇溶液的保留時間重復(fù)性優(yōu)于對乙酰氨基酚-甲醇溶液。若參照現(xiàn)行JJG 705-2002《液相色譜儀檢定規(guī)程》，兩者均符合要求，兩種溶液的色譜峰面積重復(fù)性接近，但對乙酰氨基酚-甲醇溶液的響應(yīng)值比蔗糖-甲醇溶液要高。

圖1 蔗糖-甲醇溶液色譜圖

圖2 對乙酰氨基酚-甲醇溶液色譜圖

2．2 最低檢測濃度的測定

在1.4色譜條件下，對1.0×10-7g／mL的蔗糖-甲醇溶液和對乙酰氨基酚-甲醇溶液進行分析，最小檢測濃度按下式計算：

式中：cL——最低檢測濃度，g／mL；

Nd——基線噪聲的峰高，mV；

c——標(biāo)準(zhǔn)溶液質(zhì)量濃度，g／mL；

H——標(biāo)準(zhǔn)溶液色譜峰高，mV；

V——進樣體積，μL。

標(biāo)準(zhǔn)溶液色譜測定數(shù)據(jù)見表2。根據(jù)表2數(shù)據(jù)計算得蔗糖-甲醇溶液最低檢測濃度為3.9×10-10g／mL，對乙酰氨基酚-甲醇溶液的最低檢測濃度為7.5×10-10g／mL，符合JJG 705-2002規(guī)定的各檢測器檢測濃度不超過1.0×10-9～1.0×10-6g／mL的要求，與目前大多數(shù)ELSD的檢測限指標(biāo)處在1.0×10-10～1.0×10-7g／mL范圍內(nèi)［4］相一致。

表2 兩種標(biāo)準(zhǔn)溶液的最低檢測濃度測定結(jié)果

3 結(jié)論

ELSD檢測器是一種通用型檢測器，檢測器信號響應(yīng)與樣品質(zhì)量相關(guān)，可獲得未知物的質(zhì)量信息，是一種質(zhì)量型檢測器，它消除了高效液相色譜儀其它常見檢測器的問題。示差檢測器受溶劑前沿峰的干擾使得分析復(fù)雜化，并且由于對溫度極其敏感使基線不穩(wěn)定，與梯度洗脫不相容。另外示差檢測器的響應(yīng)不如ELSD靈敏。低波長紫外檢測器在急變梯度條件下受基線漂移的困擾，并要求被分析化合物帶有發(fā)色團，而ELSD則不受這些限制，未來在食品、藥品領(lǐng)域的應(yīng)用會越來越廣泛。

經(jīng)研究可知，蔗糖-甲醇溶液和對乙酰氨基酚-甲醇溶液用于標(biāo)準(zhǔn)物質(zhì)進行計量檢定，其保留時間、峰面積、最低檢測濃度這3個參數(shù)均符合檢定校準(zhǔn)用標(biāo)準(zhǔn)物質(zhì)要求。但蔗糖-甲醇溶液色譜峰的對稱性差且響應(yīng)值低于對乙酰氨基酚-甲醇溶液，所以后者作為檢校用標(biāo)準(zhǔn)物質(zhì)更適合。由于不同廠家儀器的設(shè)計理念相差很大［5］，對于所有廠家不同型號的檢測器是否適用還需要做大量實驗進行驗證。

［1］ Brown P R. High-performance liquid chromatography past developments, present status, and future trends［J］.Anal Chem，1990，62(19):995-1 008.

［2］ 國家藥典委員會.中華人民共和國藥典（2005）[M].北京：化學(xué)工業(yè)出版社，2005.

［3］ JJG 705-2002 液相色譜儀檢定規(guī)程［S］.

［4］ 陽金勇.液相色譜用ELSD蒸發(fā)光散射檢測器簡介與校準(zhǔn)方法研究［J］.科教視野，2007，25: 324-325.

［5］ 何海紅.高效液相色譜用蒸發(fā)光散射檢測器檢定方法研究［J］.化學(xué)分析計量，2010，19(2): 78-80.

Selection of Reference Material in Calibrating Evaporative Light Scattering Detector for High Performance Liquid Chromatography

Wang Ting， Xia Chun， Li Li， Zhang Qiang
(Qingdao Institute of Measurement and Testing， Qingdao 266101， China)
Li Jianbing， Chengsha
(Qingdao Supervision and Testing Center of Product Quality， Qingdao 266061， China)

Saccharose methanol solution and acetaminophen methanol solution were studied for verification and calibration of the evaporative light scattering detector (ELSD)used in high performance liquid chromatography. The results showed that both saccharose methanol solution and acetaminophen methanol solution could meet the requirement of verification and calibration on retention time，peak area and the minimum detectable concentration. The peak of acetaminophen methanol solution was better than saccharose methanol solution on symmetry and response.Acetaminophen methanol solution is more suitable to be the reference material for veri fi cation and calibration of ELSD.

high performance liquid chromatography; evaporative light scattering detector; saccharose; acetaminophen

O657.7

A

1008-6145(2014)01-0001-03

聯(lián)系人：王婷；E-mail：249295196@qq.com

2013-10-29

10.3969／j.issn.1008-6145.2014.01.001