王帥　胡建軍　陳根元　張玲　馬春暉

摘要：探討了小花棘豆對(duì)家兔血清蛋白含量的影響，進(jìn)一步揭示了小花棘豆對(duì)家兔的毒性作用機(jī)理。結(jié)果表明，各試驗(yàn)組家兔的血清總蛋白、α球蛋白含量無(wú)明顯變化（P>0.05）；血清球蛋白、β球蛋白含量均顯著高于對(duì)照（P<005）；血清γ球蛋白含量呈先升高后降低趨勢(shì)；血清白蛋白含量低于對(duì)照（P<0.05），試驗(yàn)組家兔血清白蛋白與球蛋白含量的比值（A/G）在試驗(yàn)期間均呈降低的趨勢(shì)；小花棘豆對(duì)試驗(yàn)家兔的肝臟具有損害作用。

關(guān)鍵詞：小花棘豆；血清蛋白；家兔

中圖分類號(hào)：S859.87文獻(xiàn)標(biāo)志碼： A文章編號(hào)：1002-1302（2014）01-0164-02

收稿日期：2013-05-08

基金項(xiàng)目：國(guó)家自然科學(xué)基金（編號(hào)：31160049）；新疆生產(chǎn)建設(shè)兵團(tuán)博士基金專項(xiàng)（編號(hào)：2008JC07）；新疆生產(chǎn)建設(shè)兵團(tuán)塔里木畜牧科技重點(diǎn)實(shí)驗(yàn)室開(kāi)放課題（編號(hào)：HS201207）。

作者簡(jiǎn)介：王帥（1985—），男，山西長(zhǎng)治人，碩士，實(shí)驗(yàn)師，主要從事牧草資源開(kāi)發(fā)利用研究。E-mail：wangshuaidky@126.com。

通信作者：馬春暉，教授，主要從事牧草生產(chǎn)與加工研究。Tel：（0993）2055868；E-mail：chunhuima@126.com。小花棘豆為豆科棘豆屬植物，屬于瘋草類有毒植物，廣泛分布于新疆和田、阿克蘇等地區(qū)，苦馬豆素是其主要毒性成分。在牧草缺乏的冬季和初春，當(dāng)家畜大量采食小花棘豆，就會(huì)中毒甚至死亡，這對(duì)畜牧業(yè)生產(chǎn)造成了嚴(yán)重危害[1]。國(guó)內(nèi)外學(xué)者在對(duì)甘肅棘豆[2-3]、黃花棘豆[4]、冰川棘豆[5]等瘋草的毒性試驗(yàn)研究中，通過(guò)非特異性酯酶染色、E-玫瑰花環(huán)試驗(yàn)以及血清蛋白電泳試驗(yàn)證實(shí)，中毒動(dòng)物的細(xì)胞免疫功能降低；但也有研究表明，在低于中毒劑量的情況下，苦馬豆素不僅有抗腫瘤效果，而且能增強(qiáng)機(jī)體的免疫功能[6-7]。小花棘豆在新疆南疆地區(qū)分布較廣，在塔里木河中下游天然草地有分布，蓋度最高達(dá)95%[1]。目前對(duì)家畜小花棘豆中毒方面的研究較多，但未見(jiàn)小花棘豆對(duì)動(dòng)物血清蛋白影響的報(bào)道。本研究探討小花棘豆中毒對(duì)家兔細(xì)胞免疫功能的影響，以期為全面認(rèn)識(shí)小花棘豆的毒性作用，合理利用小花棘豆資源提供依據(jù)。

1材料與方法

1.1材料

小花棘豆于2012年8月采集于和田地區(qū)策勒縣，由塔里木大學(xué)動(dòng)物科學(xué)學(xué)院草業(yè)科學(xué)學(xué)科組鑒定。取植株地上部分陰干、粉碎，過(guò)20目篩后備用。

總蛋白和白蛋白試劑盒購(gòu)自長(zhǎng)春匯力生物技術(shù)公司；醋酸纖維素薄膜購(gòu)自浙江黃巖曙光化工廠；其他試劑均為國(guó)產(chǎn)分析純。

Carry 100型紫外-可見(jiàn)分光光度計(jì)，澳大利亞；BS124型精密電子天平，德國(guó)賽多力斯；Direct-Q3型超純水系統(tǒng)，美國(guó)Millipore；DYY-6型電泳儀，北京六一儀器廠；DK-8D型電熱恒溫水槽，上海精宏實(shí)驗(yàn)設(shè)備有限公司。

1.2試驗(yàn)動(dòng)物

4～5月齡家兔24只，雌雄各半，體重（2.0±0.1） kg，購(gòu)自塔里木大學(xué)動(dòng)物科學(xué)學(xué)院實(shí)驗(yàn)站。家兔購(gòu)回后內(nèi)服左旋咪唑 3 mg/kg 體重驅(qū)蟲，臨床觀察2周，確認(rèn)臨床健康后將其隨機(jī)分為對(duì)照組、試驗(yàn)Ⅰ組、試驗(yàn)Ⅱ組、試驗(yàn)Ⅲ組，每組6只，分籠飼養(yǎng)。對(duì)照組飼喂青干草和少量精料，試驗(yàn)Ⅰ組、試驗(yàn)Ⅱ組、試驗(yàn)Ⅲ組分別按照5、10、20 g/kg體重的劑量飼喂小花棘豆，待采食完畢后再添加青干草和精料，自由飲水。

1.3測(cè)定指標(biāo)

試驗(yàn)前后每隔7 d空腹耳緣靜脈采血1次，共采血 11次，迅速分離血清，檢測(cè)血清總蛋白、白蛋白、球蛋白含量，并利用醋酸纖維薄膜電泳法進(jìn)行血清蛋白電泳分析，計(jì)算總蛋白中白蛋白、α球蛋白、β球蛋白、γ球蛋白所占百分率及各自含量，計(jì)算白蛋白（A）與球蛋白（G）含量的比值（A/G）。

1.4數(shù)據(jù)分析

使用SPSS 11.5軟件的One-Way ANOVA進(jìn)行單因素方差分析及Duncans多重比較，檢驗(yàn)誤差為5%、1%。

2結(jié)果與分析

2.1家兔血清總蛋白、白蛋白、球蛋白含量的變化

所有攻毒家兔在試驗(yàn)期內(nèi)血清總蛋白含量均與對(duì)照組差異不顯著（P>0.05），但攻毒家兔血清白蛋白含量呈下降趨勢(shì)，球蛋白含量呈上升趨勢(shì)（圖1、圖2、圖3）。其中試驗(yàn)Ⅱ組、試驗(yàn)Ⅲ組在試驗(yàn)21 d時(shí)血清白蛋白含量顯著低于對(duì)照組（P<0.05），試驗(yàn)Ⅰ組在28 d時(shí)血清白蛋白含量顯著低于對(duì)照組（P<0.05）。從試驗(yàn)49 d起攻毒家兔血清白蛋白含量趨于穩(wěn)定。試驗(yàn)Ⅱ組、試驗(yàn)Ⅲ組血清球蛋白含量在 28 d 時(shí)顯著高于對(duì)照組（P<0.05），試驗(yàn)Ⅰ組血清白蛋白含量在42 d時(shí)顯著高于對(duì)照組（P<0.05）。

2.2家兔血清α球蛋白、β球蛋白、γ球蛋白含量的變化

試驗(yàn)期內(nèi)攻毒家兔血清α球蛋白含量與對(duì)照組差異不顯著（P>0.05）， 而β球蛋白含量呈升高趨勢(shì)，γ球蛋白含量呈先上升后降低的趨勢(shì)（圖4、圖5、圖6）。試驗(yàn) 21 d 試驗(yàn)Ⅲ組血清β球蛋白含量顯著高于對(duì)照組（P<005），35d時(shí)試

驗(yàn)Ⅰ組、試驗(yàn)Ⅱ組血清β球蛋白含量均顯著高于對(duì)照組（P<0.05）。所有攻毒家兔血清γ球蛋白含量在14 d時(shí)均顯著高于對(duì)照組（P<0.05），其中試驗(yàn)Ⅲ組、試驗(yàn)Ⅱ組血清γ球蛋白含量在35 d時(shí)開(kāi)始下降，試驗(yàn)Ⅲ組血清γ球蛋白含量在70 d時(shí)顯著低于對(duì)照組（P<0.05）；試驗(yàn)Ⅰ組血清γ球蛋白含量從49 d起開(kāi)始降低，并在第63天時(shí)低于對(duì)照組。

2.3家兔血清白蛋白與球蛋白比值的變化

由圖7可見(jiàn)，3個(gè)試驗(yàn)組血清白蛋白與球蛋白比值（A/G）均呈下降趨勢(shì)。其中35 d時(shí)試驗(yàn)Ⅲ組A/G值顯著低于對(duì)照組（P<0.05），49d時(shí)試驗(yàn)Ⅱ組A/G值顯著低于對(duì)照

3結(jié)論與討論

本研究通過(guò)小花棘豆對(duì)家兔的攻毒試驗(yàn)，發(fā)現(xiàn)小花棘豆可導(dǎo)致家兔血清白蛋白含量顯著下降，β球蛋白含量顯著升高，γ球蛋白含量呈先升高后降低的趨勢(shì)，說(shuō)明小花棘豆中的有毒成分可導(dǎo)致家兔肝損傷。

肝臟是合成蛋白質(zhì)的重要器官，血液中的白蛋白、α球蛋白、β球蛋白等均由肝臟合成。如果發(fā)生肝臟損傷，蛋白質(zhì)合成就有可能出現(xiàn)障礙，從而導(dǎo)致血液中蛋白含量的變化。目前血液中蛋白含量的變化是臨床判斷肝臟是否病變的重要指標(biāo)[8]。 其中β球蛋白含量的升高與自身免疫性疾病、膽汁郁積性肝病和慢性肝病有關(guān)；γ球蛋白幾乎都是免疫性抗體，與動(dòng)物機(jī)體的免疫能力密切相關(guān)；白蛋白含量降低多見(jiàn)于營(yíng)養(yǎng)不良、蛋白吸收合成障礙、肝功能疾病、腎病綜合征等因素。本研究表明，攻毒家兔血清總蛋白含量在試驗(yàn)期內(nèi)無(wú)明顯變化，而白蛋白含量明顯下降；攻毒家兔的α球蛋白與對(duì)照組

差異不顯著（P>0.05），β球蛋白和試驗(yàn)前期γ球蛋白均出現(xiàn)升高趨勢(shì)，與莫重輝等關(guān)于家兔甘肅棘豆中毒的報(bào)道[3]一致，可能是因?yàn)榧彝眯』怪卸緦?dǎo)致肝臟受到損傷，從而引起白蛋白合成功能的障礙。試驗(yàn)后期攻毒家兔血清γ球蛋白含量開(kāi)始下降，說(shuō)明動(dòng)物體液免疫功能降低，淋巴結(jié)、脾臟及骨髓的網(wǎng)狀內(nèi)皮系統(tǒng)開(kāi)始受到損害。本研究中試驗(yàn)家兔球蛋白含量的變化與耿果霞等[5]、顧百群等[9]的報(bào)道有明顯差異，可能與攻毒草類差異、受試動(dòng)物種類不同及肝臟受損程度有關(guān)，有待于進(jìn)一步研究。

正常情況下，白蛋白與球蛋白的比值應(yīng)在一定范圍內(nèi)波動(dòng)。白蛋白由肝細(xì)胞合成，當(dāng)肝臟嚴(yán)重受損時(shí)白蛋白合成量減少，其降低程度與肝臟損傷程度呈正相關(guān)[10]。球蛋白由機(jī)體免疫器官合成，當(dāng)外來(lái)毒素侵入體內(nèi)時(shí)，球蛋白合成量增加，造成A/G值下降。本研究中攻毒家兔血清A/G值下降明顯，且與小花棘豆的飼喂量呈明顯的時(shí)間-劑量效應(yīng)關(guān)系，說(shuō)明小花棘豆的毒性成分可導(dǎo)致家兔的肝、腎損傷，這與莫重輝等[3]、耿果霞等[5]的報(bào)道一致。

參考文獻(xiàn)：

[1]王帥，陳根元，胡建軍，等. 南疆地區(qū)小花棘豆化學(xué)成分的初步研究[J]. 江蘇農(nóng)業(yè)科學(xué)，2011，39（2）：453-454.

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[8]劉立昌，張磊，鄧毅峰，等. 愈肝片對(duì)D-氨基半乳糖小鼠急性肝損傷的保護(hù)作用[J]. 廣州中醫(yī)藥大學(xué)學(xué)報(bào)，2003，20（1）：57-58.

[9]顧百群，段得賢，崔中林，等. 山羊甘肅棘豆中毒臨床病理學(xué)研究[J]. 西北農(nóng)林科技大學(xué)學(xué)報(bào)：自然科學(xué)版，1990，18（3）：62-67.

[10]劉宗平.獸醫(yī)臨床癥狀鑒別診斷學(xué)[M]. 北京：中國(guó)農(nóng)業(yè)出版社，2008.焦鳳超，李迎曉，陳宏智，等. 河南省信陽(yáng)市鴨疫里默氏桿菌的分離鑒定和血清型分析[J]. 江蘇農(nóng)業(yè)科學(xué)，2014，42（1）：166-167.

本研究通過(guò)小花棘豆對(duì)家兔的攻毒試驗(yàn)，發(fā)現(xiàn)小花棘豆可導(dǎo)致家兔血清白蛋白含量顯著下降，β球蛋白含量顯著升高，γ球蛋白含量呈先升高后降低的趨勢(shì)，說(shuō)明小花棘豆中的有毒成分可導(dǎo)致家兔肝損傷。

肝臟是合成蛋白質(zhì)的重要器官，血液中的白蛋白、α球蛋白、β球蛋白等均由肝臟合成。如果發(fā)生肝臟損傷，蛋白質(zhì)合成就有可能出現(xiàn)障礙，從而導(dǎo)致血液中蛋白含量的變化。目前血液中蛋白含量的變化是臨床判斷肝臟是否病變的重要指標(biāo)[8]。 其中β球蛋白含量的升高與自身免疫性疾病、膽汁郁積性肝病和慢性肝病有關(guān)；γ球蛋白幾乎都是免疫性抗體，與動(dòng)物機(jī)體的免疫能力密切相關(guān)；白蛋白含量降低多見(jiàn)于營(yíng)養(yǎng)不良、蛋白吸收合成障礙、肝功能疾病、腎病綜合征等因素。本研究表明，攻毒家兔血清總蛋白含量在試驗(yàn)期內(nèi)無(wú)明顯變化，而白蛋白含量明顯下降；攻毒家兔的α球蛋白與對(duì)照組

差異不顯著（P>0.05），β球蛋白和試驗(yàn)前期γ球蛋白均出現(xiàn)升高趨勢(shì)，與莫重輝等關(guān)于家兔甘肅棘豆中毒的報(bào)道[3]一致，可能是因?yàn)榧彝眯』怪卸緦?dǎo)致肝臟受到損傷，從而引起白蛋白合成功能的障礙。試驗(yàn)后期攻毒家兔血清γ球蛋白含量開(kāi)始下降，說(shuō)明動(dòng)物體液免疫功能降低，淋巴結(jié)、脾臟及骨髓的網(wǎng)狀內(nèi)皮系統(tǒng)開(kāi)始受到損害。本研究中試驗(yàn)家兔球蛋白含量的變化與耿果霞等[5]、顧百群等[9]的報(bào)道有明顯差異，可能與攻毒草類差異、受試動(dòng)物種類不同及肝臟受損程度有關(guān)，有待于進(jìn)一步研究。

正常情況下，白蛋白與球蛋白的比值應(yīng)在一定范圍內(nèi)波動(dòng)。白蛋白由肝細(xì)胞合成，當(dāng)肝臟嚴(yán)重受損時(shí)白蛋白合成量減少，其降低程度與肝臟損傷程度呈正相關(guān)[10]。球蛋白由機(jī)體免疫器官合成，當(dāng)外來(lái)毒素侵入體內(nèi)時(shí)，球蛋白合成量增加，造成A/G值下降。本研究中攻毒家兔血清A/G值下降明顯，且與小花棘豆的飼喂量呈明顯的時(shí)間-劑量效應(yīng)關(guān)系，說(shuō)明小花棘豆的毒性成分可導(dǎo)致家兔的肝、腎損傷，這與莫重輝等[3]、耿果霞等[5]的報(bào)道一致。

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本研究通過(guò)小花棘豆對(duì)家兔的攻毒試驗(yàn)，發(fā)現(xiàn)小花棘豆可導(dǎo)致家兔血清白蛋白含量顯著下降，β球蛋白含量顯著升高，γ球蛋白含量呈先升高后降低的趨勢(shì)，說(shuō)明小花棘豆中的有毒成分可導(dǎo)致家兔肝損傷。

肝臟是合成蛋白質(zhì)的重要器官，血液中的白蛋白、α球蛋白、β球蛋白等均由肝臟合成。如果發(fā)生肝臟損傷，蛋白質(zhì)合成就有可能出現(xiàn)障礙，從而導(dǎo)致血液中蛋白含量的變化。目前血液中蛋白含量的變化是臨床判斷肝臟是否病變的重要指標(biāo)[8]。 其中β球蛋白含量的升高與自身免疫性疾病、膽汁郁積性肝病和慢性肝病有關(guān)；γ球蛋白幾乎都是免疫性抗體，與動(dòng)物機(jī)體的免疫能力密切相關(guān)；白蛋白含量降低多見(jiàn)于營(yíng)養(yǎng)不良、蛋白吸收合成障礙、肝功能疾病、腎病綜合征等因素。本研究表明，攻毒家兔血清總蛋白含量在試驗(yàn)期內(nèi)無(wú)明顯變化，而白蛋白含量明顯下降；攻毒家兔的α球蛋白與對(duì)照組

差異不顯著（P>0.05），β球蛋白和試驗(yàn)前期γ球蛋白均出現(xiàn)升高趨勢(shì)，與莫重輝等關(guān)于家兔甘肅棘豆中毒的報(bào)道[3]一致，可能是因?yàn)榧彝眯』怪卸緦?dǎo)致肝臟受到損傷，從而引起白蛋白合成功能的障礙。試驗(yàn)后期攻毒家兔血清γ球蛋白含量開(kāi)始下降，說(shuō)明動(dòng)物體液免疫功能降低，淋巴結(jié)、脾臟及骨髓的網(wǎng)狀內(nèi)皮系統(tǒng)開(kāi)始受到損害。本研究中試驗(yàn)家兔球蛋白含量的變化與耿果霞等[5]、顧百群等[9]的報(bào)道有明顯差異，可能與攻毒草類差異、受試動(dòng)物種類不同及肝臟受損程度有關(guān)，有待于進(jìn)一步研究。

正常情況下，白蛋白與球蛋白的比值應(yīng)在一定范圍內(nèi)波動(dòng)。白蛋白由肝細(xì)胞合成，當(dāng)肝臟嚴(yán)重受損時(shí)白蛋白合成量減少，其降低程度與肝臟損傷程度呈正相關(guān)[10]。球蛋白由機(jī)體免疫器官合成，當(dāng)外來(lái)毒素侵入體內(nèi)時(shí)，球蛋白合成量增加，造成A/G值下降。本研究中攻毒家兔血清A/G值下降明顯，且與小花棘豆的飼喂量呈明顯的時(shí)間-劑量效應(yīng)關(guān)系，說(shuō)明小花棘豆的毒性成分可導(dǎo)致家兔的肝、腎損傷，這與莫重輝等[3]、耿果霞等[5]的報(bào)道一致。

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