孫立春+吳璐璐+許劍鋒

摘要：用濾紙片法評(píng)價(jià)14種植物的水提物和醇提物對(duì)單增李斯特菌、副溶血性弧菌、金黃色葡萄球菌、蠟樣芽孢桿菌、大腸桿菌5種食源性致病菌的抑菌效果。抑菌圈大小表明：植物醇提物的抑菌效果較植物水提物好，其中五倍子的醇提物和石榴皮的醇提物對(duì)5種食源性致病菌具有廣譜抑制作用，并且它們的抑制作用強(qiáng)于同濃度的山梨酸鉀；此外丁香醇提物、甘草水提物、黃芩醇提物、五倍子水提物、拳參醇提物等都對(duì)5種致病菌具有較好的抑制作用。

關(guān)鍵詞：植物提取物；致病菌；抑菌作用；抑菌圈

中圖分類號(hào)： TS205文獻(xiàn)標(biāo)志碼： A文章編號(hào)：1002-1302（2014）02-0275-03

收稿日期：2013-06-24

基金項(xiàng)目：上海市科委工程中心建設(shè)項(xiàng)目（編號(hào)：11DZ2280300）。

作者簡(jiǎn)介：孫立春（1965—），男，山東蓬萊人，碩士，工程師，研究方向?yàn)楹Ｑ笊镏扑幒褪称坊瘜W(xué)。E-mail：lcsun@shou.edu.cn。

通信作者：許劍鋒，男，博士，副教授，研究方向?yàn)楹Ｑ笏幬锖吞烊划a(chǎn)物化學(xué)。Tel：（021）61900388；E-mail：jfxu@shou.edu.cn。近年來，由食源性致病菌引起的食物中毒事件屢見不鮮，輕則會(huì)引起食用者的不適，重則會(huì)導(dǎo)致食物中毒，甚至造成死亡。評(píng)定食品防腐劑抑菌活性的重要指標(biāo)是看它們是否對(duì)食品中常見的致病菌具有抑制作用。在抑菌活性的檢測(cè)方法中，濾紙片抑菌試驗(yàn)法是評(píng)價(jià)物質(zhì)是否具有抑菌活性的常用方法。從天然植物中提取抑菌成分具有來源廣泛、種類繁多、抗菌效果好、抑菌范圍廣、毒性相對(duì)低的特點(diǎn)[1-5]。本研究選擇5種常見的食源性致病菌，初步判定和比較14種天然植物水提物和醇提物的抑菌活性，為研究天然植物提取物對(duì)食品腐敗菌的抑菌作用提供一定的理論基礎(chǔ)。

1材料與方法

1.1試驗(yàn)材料

1.1.1試驗(yàn)菌種單增李斯特菌（Listeria monocytogenes，ATCC19115）；大腸桿菌（Escherichia coli，ATCC25922）；金黃色葡萄球菌（Staphylococcus aureus，ATCC25923）；副溶血性弧菌（Vibrio parahaemolyticus，ATCC17802）；蠟樣芽孢桿菌（Bacillus cereus，實(shí)驗(yàn)室分離）

1.1.2植物材料本研究以14種天然植物作為研究對(duì)象：白芍、拳參、大黃、黃連、黃芩、甘草、菊花、丁香、五倍子、烏梅、金銀花、香附、肉桂、石榴皮。

1.1.3培養(yǎng)基TSB培養(yǎng)基：15 g/L胰蛋白胨，5 g/L大豆胨，5 g/L氯化鈉。TSA培養(yǎng)基：15 g/L胰蛋白胨，5 g/L大豆胨，5 g/L氯化鈉，13 g/L瓊脂。

1.1.4試驗(yàn)試劑氯化鈉（分析純）、95%乙醇均購自國(guó)藥集團(tuán)化學(xué)試劑有限公司；去離子水（上海海洋大學(xué)公共實(shí)驗(yàn)樓提供）。

1.1.5試驗(yàn)儀器RE-52A旋轉(zhuǎn)蒸發(fā)儀，上海青浦滬西儀器廠生產(chǎn)；DRT-TW（調(diào)溫）電熱套，鞏義市予華儀器有限責(zé)任公司生產(chǎn)；HH-S11.6數(shù)顯恒溫水浴鍋，上海博迅實(shí)業(yè)有限公司生產(chǎn)；Esco垂直流超凈工作臺(tái)，新加坡Esco公司生產(chǎn)；MLS-3750全自動(dòng)高壓蒸汽滅菌鍋，日本三洋公司生產(chǎn)；DHG-9053A電熱恒溫鼓風(fēng)干燥箱，上海一恒科學(xué)儀器有限公司生產(chǎn)；GNP9080隔水式培養(yǎng)箱，上海精宏實(shí)驗(yàn)設(shè)備有限公司生產(chǎn)。

1.2試驗(yàn)方法

1.2.114種天然植物水提物和醇提物的制備分別稱取200 g白芍、拳參、大黃、黃芩等14種天然植物材料，粉碎后分別放入500 mL回流瓶中；分別在500 mL回流瓶中加入 200 mL 95%乙醇，于80 ℃回流煮沸5 h；倒出提取液后，再分別向各個(gè)回流瓶中加入200 mL 95%乙醇，回流煮沸5 h后合并提取液。將合并后的粗提取液進(jìn)行減壓抽濾后倒入旋轉(zhuǎn)蒸發(fā)瓶中，在65 ℃條件下進(jìn)行減壓旋轉(zhuǎn)蒸發(fā)，除去溶劑后即得到提取的膏狀物質(zhì)。植物水提法與醇提法相同，但溶劑為200 mL去離子水。得到水提物和醇提物后，分別配置14種濃度為0.001 g/mL的植物醇提物和植物水提物，待用。以山梨酸鉀為對(duì)照，濃度為0.01 g/mL。

1.2.2試驗(yàn)準(zhǔn)備活化菌種：挑取斜面上的菌種，置于 5 mL TSB無菌試管中，在搖床上于180 r/min條件下培養(yǎng)18～22 h（革蘭氏陽性菌的培養(yǎng)溫度為37 ℃，革蘭氏陰性菌的培養(yǎng)溫度為30 ℃），活化2～3代后備用。

無菌濾紙片的制備：先用打孔器制作直徑為6 mm的濾紙片，121 ℃高壓滅菌20 min，烘干3～4 h后備用。

平板的制備：取30 g TSA培養(yǎng)基并加熱溶解于1 L水中，121 ℃高壓滅菌20 min后，冷卻至50 ℃左右時(shí)倒入無菌培養(yǎng)皿中，每個(gè)培養(yǎng)皿中約15～20 mL，置于無菌環(huán)境中備用。

1.2.3天然植物水提物和醇提物的抗菌活性測(cè)定抑菌圈直徑參照Ali等的方法[6-9]，并略有改動(dòng)。將均勻涂菌（菌濃度為107 個(gè)/mL）后的平板置于37 ℃或30 ℃恒溫培養(yǎng)箱中 5 min，使表面干燥；用無菌鑷子將濾紙片貼在培養(yǎng)基表面，輕壓紙片以確保接觸良好，然后吸取10 μL 0.001 g/mL的樣品溶液于濾紙表面并作標(biāo)記；37 ℃或30 ℃恒溫倒置培養(yǎng)18～22 h，觀察抑菌圈大小并測(cè)定提取物與溶劑的抑菌圈的凈直徑。濾紙片試驗(yàn)重復(fù)3次，取平均值。

2結(jié)果與分析

3討論

由研究結(jié)果可知：五倍子、石榴皮的醇提物對(duì)5種食源性致病菌具有廣譜的抑制作用，并且其抑制作用大都強(qiáng)于同濃度的山梨酸鉀；丁香醇提物、甘草水提物、黃芩醇提物、五倍子水提物、拳參醇提物等都對(duì)5種致病菌具有較好的抑制作用。天然的植物提取物對(duì)食源性致病菌具有廣泛的抑制作用，可能的原因是植物提取物中抑菌活性成分多樣且復(fù)雜，許多食endprint

源性致病菌未對(duì)這些活性物質(zhì)產(chǎn)生抗性，因此天然的植物提取物是篩選食品防腐劑的重要來源。

整體看來，14種天然的植物水提物對(duì)金黃色葡萄球菌具有一定的抑制作用，對(duì)其他致病菌沒有較好的抑制作用；植物醇提物對(duì)單增李斯特菌的抑制作用較弱，而對(duì)大腸桿菌、副溶

血性弧菌和蠟樣芽孢桿菌具有較好的抑制作用。整體看來，植物醇提物的抑菌效果強(qiáng)于植物水提物，其可能的原因是植物醇提物中的抑菌活性成分較水提物多，在后續(xù)的關(guān)于從天然食品中提取食品防腐菌的試驗(yàn)中，可選擇植物醇提物作為主要的試驗(yàn)對(duì)象。

天然植物醇提物對(duì)5種食源性致病菌的抑菌效果優(yōu)于水提物，其中五倍子醇提物、石榴皮醇提物、丁香醇提物、黃芩醇提物、拳參醇提物等具有相對(duì)較廣的抑菌范圍。

參考文獻(xiàn)：

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源性致病菌未對(duì)這些活性物質(zhì)產(chǎn)生抗性，因此天然的植物提取物是篩選食品防腐劑的重要來源。

整體看來，14種天然的植物水提物對(duì)金黃色葡萄球菌具有一定的抑制作用，對(duì)其他致病菌沒有較好的抑制作用；植物醇提物對(duì)單增李斯特菌的抑制作用較弱，而對(duì)大腸桿菌、副溶

血性弧菌和蠟樣芽孢桿菌具有較好的抑制作用。整體看來，植物醇提物的抑菌效果強(qiáng)于植物水提物，其可能的原因是植物醇提物中的抑菌活性成分較水提物多，在后續(xù)的關(guān)于從天然食品中提取食品防腐菌的試驗(yàn)中，可選擇植物醇提物作為主要的試驗(yàn)對(duì)象。

天然植物醇提物對(duì)5種食源性致病菌的抑菌效果優(yōu)于水提物，其中五倍子醇提物、石榴皮醇提物、丁香醇提物、黃芩醇提物、拳參醇提物等具有相對(duì)較廣的抑菌范圍。

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源性致病菌未對(duì)這些活性物質(zhì)產(chǎn)生抗性，因此天然的植物提取物是篩選食品防腐劑的重要來源。

整體看來，14種天然的植物水提物對(duì)金黃色葡萄球菌具有一定的抑制作用，對(duì)其他致病菌沒有較好的抑制作用；植物醇提物對(duì)單增李斯特菌的抑制作用較弱，而對(duì)大腸桿菌、副溶

血性弧菌和蠟樣芽孢桿菌具有較好的抑制作用。整體看來，植物醇提物的抑菌效果強(qiáng)于植物水提物，其可能的原因是植物醇提物中的抑菌活性成分較水提物多，在后續(xù)的關(guān)于從天然食品中提取食品防腐菌的試驗(yàn)中，可選擇植物醇提物作為主要的試驗(yàn)對(duì)象。

天然植物醇提物對(duì)5種食源性致病菌的抑菌效果優(yōu)于水提物，其中五倍子醇提物、石榴皮醇提物、丁香醇提物、黃芩醇提物、拳參醇提物等具有相對(duì)較廣的抑菌范圍。

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