張 淼，任 力，胡 蓉，褚曉雨，朱廣卿

Ki67、EGFR在三陰性及非三陰性乳腺癌中的表達與相關性分析

張 淼，任 力，胡 蓉，褚曉雨，朱廣卿

目的 對比Ki67、EGFR在三陰性乳腺癌(triple-negative breast cancer，TNBC)及非三陰性乳腺癌(non triple-negative breast cancer，NTNBC)中的表達，探討Ki67與EGFR基因表達的相關性。方法 免疫組織化學法檢測513例乳腺癌標本中Ki67及EGFR的表達，對比兩者在TNBC和NTNBC中的區(qū)別，應用Spearman法分析Ki67與EGFR基因表達的相關性。結果 TNBC組織中Ki67 陽性表達率(94.32%)明顯高于NTNBC(80.47%)，差異有統計學意義(P<0.05) 。TNBC組織中EGFR表達率(68.18%)明顯高于NTNBC(11.76%)，差異有統計學意義(P<0.05)。結論 Ki67和EGFR在TNBC中均表達升高，但兩者無相關性，兩者均對乳腺癌預后判斷有重要意義。

三陰性乳腺癌；Ki67；表皮生長因子受體

乳腺癌是女性常見惡性腫瘤，其中三陰性乳腺癌(triple-negative breast cancer，TNBC)是指雌激素受體(estrogen receptor，ER)、孕激素受體(progesterone receptor，PR)、表皮生長因子2(human epidermal growth factor receptor 2，HER-2)表達均為陰性的乳腺癌[1]。目前，TNBC無內分泌治療、靶向藥物治療指征，主要依靠化學藥物治療，表現為增殖速度快、容易局部復發(fā)、遠處轉移率高、病死率高、預后較差[2]，故成為臨床研究熱點之一。TNBC的發(fā)生、發(fā)展與細胞的異常增殖有關，而Ki67是評估腫瘤細胞增殖活性的重要標記物，對乳腺癌預后判斷有重要意義[3]。表皮生長因子受體(epidermal growth factor receptor，EGFR)也在細胞增殖過程中起重要作用，EGFR過度表達可促進乳腺惡性腫瘤細胞增殖、加快轉移、抑制凋亡[4]。本研究旨在分析TNBC與NTNBC中Ki67、EGFR表達的差異，探討Ki67與EGFR的相關性。

1 資料與方法

1.1 一般資料 選取我院2008-01-01至2013-06-01共513例乳腺癌患者資料，均為女性。手術方式: 根治術3例，改良根治術453例，保乳術57例。均有病理結果，其中浸潤性導管癌359例，浸潤性小葉癌67例，其他類型87例(包括黏液腺癌9例，髓樣癌9例，大汗腺癌1例，導管內癌26例，硬癌4例，派杰氏病13例，脂質癌3例，單純癌14例，類癌2例，鱗癌3例，腺癌3例) 。

1.2 方法 腫瘤標本經4%甲醛固定，石蠟4 mm厚切片，HE染色，光鏡觀察。免疫組化采用EnVision二部法，試劑盒購自福州邁新生物技術有限公司。ER、PR 結果判斷: ER或PR≥10%腫瘤細胞核棕黃色染色為陽性表達；<10%腫瘤細胞染色為陰性。 HER2結果判斷:0或( + ) 者被判定為HER2 陰性，(++) 及( +++) 者被判定為HER2陽性。如ER、PR、HER2 均陰性即定義為TNBC，有任何一個陽性者即定義為NTNBC。其中TNBC 88例，年齡29～81歲，中位年齡49.8歲；NTNBC 425例，年齡26～89歲，中位年齡54.2歲。

1.3 Ki67、EGFR結果判斷 Ki67陽性細胞為細胞核棕黃色著色，光鏡下觀察，5個高倍鏡視野計數200個細胞，計算陽性細胞所占的細胞總數百分比。陽性細胞數≤5%為陰性(-)，6%～25%為弱陽性(+)，26%～50%為陽性(++)，>50%為強陽性(+++)。EGFR陽性細胞為膜著色，不著色為陰性(-)，著色陽性細胞數<25%為(+)，25%～50%為(++)，>50%為(+++) 。TNBC和NTNBC組均檢測Ki67和EGFR，對比兩組的陰性、弱陽性、陽性、強陽性表達率及相關性。

1.4 統計學處理 采用SPSS17.0 統計軟件進行數據處理，計數資料采用χ2檢驗，應用Spearman法分析Ki67與EGFR基因表達的相關性，P<0.05 為差異有統計學意義。

2 結 果

2.1 Ki67和EGFR在兩組乳腺癌組織中的表達 TNBC組織中Ki67、EGFR陽性表達率均明顯高于NTNBC，差異有統計學意義(P<0.05)，見表1。EGFR和Ki67在乳腺癌組織中表達的免疫組化結果見圖1。

表1 Ki67在TNBC和NTNBC中的表達 (n；%)

注：與NTNBC組比較，①P<0.05

圖1 EGFR和Ki67在乳腺癌組織中表達(SP，×400)

2.2 Ki67和EGFR在TNBC組織中的相關性 88 例TNBC患者中，Ki67陽性率為94.32%(83/88)，EGFR陽性率為68.18%(60/88)，Ki67與EGFR無明顯相關性(χ2=0.193，P>0.05，表2)。

表2 Ki67和EGFR在TNBC中的表達

3 討 論

分子生物學技術的發(fā)展使乳腺癌的分子病理學研究不斷深入，ER、PR 和HER-2已成為乳腺癌病理學常規(guī)檢查項目，內分泌治療和靶向治療已讓大多數乳腺癌患者受益。TNBC作為乳腺癌中的特殊類型，占全部乳腺癌的10%～17%[5]，只能依賴傳統的放化療，且療效欠佳[6]。

Ki67是一種增殖細胞內的核抗原，功能與細胞周期密切相關，半衰期為1 h或更短[7，8]。Ki67抗原是當前較為肯定的核增殖標志物，因其半衰期短，脫離細胞周期后迅速降解，因此成為評估腫瘤細胞增殖活性的重要標記物[9]。Bauer等[10]研究表明，多種惡性實體腫瘤中Ki67的表達率遠高于正常組織，與多種惡性腫瘤的發(fā)展、轉移、預后有關。乳腺癌也是如此，Ki67高表達與原發(fā)腫瘤較大、腋窩淋巴結轉移數目較多、分期較晚有關。本研究表明，Ki67在TNBC組織中的陽性表達率明顯高于NTNBC(P<0.05)，提示Ki67強陽性表達很可能是TNBC預后差的一個重要原因。

EGFR是酪氨酸激酶受體家族，多種腫瘤的發(fā)生發(fā)展與EGFR的異常表達有關，其與乳腺癌的增殖及生長也有密切相關。有研究表明，乳腺腫瘤患者中27%～30%有EGFR過表達[11]，TNBC中高表達概率更高達45%～70%[12]。本研究顯示，TNBC中約68.18%表達EGFR，明顯高于其在NTNBC中(11.76%)的表達，考慮與腫瘤增殖速度快有關。

另外，本研究發(fā)現，TNBC中Ki67和EGFR均為高表達，但兩者無相關性，與有關文獻報道不同，考慮與樣本量小及樣本構成不同有關。EGFR的高表達可能在TNBC的增殖發(fā)展中起重要作用，可以作為靶向藥物治療TNBC的重要突破口。但目前這些實驗入組例數較少，而且酪氨酸激酶抑制藥僅對EGFR基因突變的非小細胞肺癌有效，而并非針對EFGR高表達的肺癌[14]，故在乳腺癌患者中也需尋找酪氨酸激酶抑制藥的療效預測指標。EGFR基因擴增與過表達的關系，仍是今后研究的重點方向。

[1] 趙衛(wèi)紅，徐兵河，李 青，等.70 歲以上老年女性乳腺癌患者的特點和預后分析[J].中華腫瘤雜志，2006，28(2):385-388.

[2] Morris G J, Naidu S, Topham A K,etal. Differences in breast carcinoma characteristics in newly diagnosed African- American and Caucasian patients: a single -institution compilation comparedwith the National Cancer Institute’s Surveillance,Epidemiology,and End Results database [J]. Cancer, 2007, 110(4):876-884.

[3] Tan P H ,Bay B H,Yip G,etal.Immunohistochemical detection of Ki67 in breast cancer correlates with transcriptional regu-Lation of genes related to apoptosis and cell death[J].Mod Pathol,2005,18(3)：374-381.

[4] Nalwoga H, Arnes J B, Wabinga H,etal. Expression of EGFR and ckit is associated with the basal-like phenotype in breast carcinomas of African women [J].APMIS,2008,116(6):515-525.

[5] Dent R，Trudeau M，Pritchard K J，etal. Triple negative breast cancer: clinical features and patterns of recurrence[J]. Clin Cancer Res，2007，13(5):4429-4434.

[6] Reis-Filho J S, Tutt A N. Triple negative tumours: a critical review[J]. Histopathology, 2008, 52(1):108-118.

[7] Ciulla M M, Acquistapace G, Toffetti L,etal. Ki67 cytop lasmic expression: observations in norm a l tissue from heart atr ia l appendages of healthy rats [J]. Cell Cycle, 2009,8(13):2125.

[8] Preusser M, Heinzl H, Gelpi E,etal. Ki67 index in intracran ia l ependymom a: a prom is ing h istopa tho log ical cand idate biom arke r[J]. Histopathology, 2008, 53(1):39-47.

[9] K m D K, Kim D W, Kim S W,etal. Ki67 antigen as a predictive factor for prognosis of sinonasa lmucosal melanoma[J].Clin Exp Otorhino laryngol,2008,1(4):206-210.

[10] Bauer K R，Brown M，Cress R D.Descriptive analysis of estrogen receptor(ER)-negative，progesterone receptor(PR)-negative， andHER2-negative invasive breast cancer， the so-called triple -negative phenotype: a population-based study from the California Cancer Registry[J].Cancer，2007，109:1721-1728.

[11] Montemurro F, Valabrega G, Aglietta M. Lapatinib: a dual inhibitor of EGFR and HER-2 tyrosine kinase activity[J].Expert Opin Biol Ther, 2007,7(2):257-268.

[12] Burness M L, Grushko T A, Olopade O I. Epidermal growth factor receptor in triple-negative and basal-like breast cancer: promising clinical target or only a marker? [J]. Cancer J,2010，16(1)：23-32.

[13] Kim H G, Kassis J, Souto J C,etal. EGF receptor signaling in prostste morphogenesis and tumorigenesis [J]. Histol Histopathol, 1999, 14(4):1175-1182.

[14] Pal S K, Childs B H, Pegram M. Triple negative breast cancer:unmet medical needs [J]. Breast Cancer Res Treat,2011,125(3):627-636.

(2014-07-18收稿 2014-09-06修回)

(責任編輯 尤偉杰)

Expression of Ki67,EGFR in triple negative breast cancer and correlation analysis

ZHANG Miao,REN Li, HU Rong,CHU Xiaoyu,and ZHU Guangqing.

Department of Oncology, Air Force General Hospital of PLA, Beijing 100142,China

Objective To study Ki67, EGFR in non-triple negative and triple negative expression in breast cancer, and to explore the correlation between Ki67 and EGFR gene expression. Methods Immune histochemical method was used to detect Ki67 in specimens of 513 cases of breast cancer and the expression of EGFR, comparing both in triple negative and none triple negative breast cancer, and the correlation was analyzed by chi square and Spearman method. Results Ki67 positive expression rate in triple negative breast cancer tissues (94.32%) was significantly higher than that in triple negative breast cancer (80.47%) (P<0.05). Triple negative rate of EGFR expression in breast cancer tissue (68.18%) was significantly higher than that of non-triple negative breast cancer (11.76%) (P<0.05). Conclusions Ki67 and EGFR expression in triple negative breast cancer increases，but no correlation between both,has important significance in breast cancer prognosis judgement.

triple negative breast cancer；Ki67；EGFR

張 淼，本科學歷，主治醫(yī)師，E-mail:kjzhangmiao@sina.cn

100142北京，空軍總醫(yī)院腫瘤內科

朱廣卿，E-mail: kjzhugq@sina.com

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