金曉輝

（朝陽(yáng)市種子管理站，遼寧 朝陽(yáng) 122000）

隨著生活水平的不斷提高，人們對(duì)食品質(zhì)量提出了越來(lái)越高的要求，食品安全成了大家關(guān)注的問題，而準(zhǔn)確檢測(cè)農(nóng)藥殘留是保障食品質(zhì)量安全的關(guān)鍵所在。本文所討論的農(nóng)藥殘留快速檢測(cè)法GB/T5009.199-2003是我國(guó)現(xiàn)行推廣應(yīng)用較多的，依據(jù)酶抑制原理建立的農(nóng)藥殘留速測(cè)法。在農(nóng)藥殘留的快速檢測(cè)中，為了保障檢驗(yàn)結(jié)果的準(zhǔn)確性，在日常工作中要注意開展質(zhì)量控制，實(shí)驗(yàn)室的質(zhì)量控制包括室間質(zhì)量控制和室內(nèi)質(zhì)量控制。本文主要探討室內(nèi)質(zhì)量控制。實(shí)驗(yàn)室內(nèi)部質(zhì)量控制簡(jiǎn)稱“內(nèi)部控制”。內(nèi)部控制是實(shí)驗(yàn)室自我控制質(zhì)量的常規(guī)程序，它能反映分析質(zhì)量穩(wěn)定性狀況，以便及時(shí)發(fā)現(xiàn)分析中異常情況，隨時(shí)采取相應(yīng)的校正措施。

質(zhì)控的好壞直接影響著平日的檢測(cè)工作。影響質(zhì)控主要有以下幾個(gè)因素：技術(shù)人員在質(zhì)量上的控制、對(duì)樣品以及試劑的控制、對(duì)檢測(cè)儀器的控制和實(shí)驗(yàn)室內(nèi)環(huán)境的控制等。

1 檢測(cè)人員的質(zhì)量控制

在這一環(huán)節(jié)上應(yīng)該重點(diǎn)落實(shí)檢測(cè)人員對(duì)所需理論知識(shí)、實(shí)際操作和判斷的熟練程度。每個(gè)人都應(yīng)該積極參加上級(jí)部門組織的培訓(xùn)，不斷充實(shí)理論知識(shí)，提高檢測(cè)水平。此外，實(shí)驗(yàn)室內(nèi)應(yīng)該把檢測(cè)方法進(jìn)行必要的統(tǒng)一，按照國(guó)家的的標(biāo)準(zhǔn)、規(guī)章制度等做好各級(jí)人員的職責(zé)以及權(quán)限。

2 試劑及樣品的質(zhì)量控制

2.1 試劑的一般質(zhì)量要求

2.1.1 速測(cè)試劑的環(huán)境控制

速測(cè)試劑放置環(huán)境的溫度一定要控制在規(guī)定范圍之內(nèi)。酶抑制率測(cè)試法中用到的試劑基本都是生化試劑，所以，它們的保存環(huán)境比較特殊。對(duì)于粉劑化的酶及底物應(yīng)該放于-18℃的環(huán)境中。對(duì)于已被配制成溶液的藥劑，適應(yīng)保存的環(huán)境溫度為0-4℃之間。而浸提劑在任何環(huán)境下都可以保存。

2.1.2 速測(cè)試劑配制注意事項(xiàng)

速測(cè)試劑在配制的時(shí)候一定要注意標(biāo)記和配制的日期。在制配樣液的時(shí)候，浸提是否充分，直接影響著結(jié)果的好壞。酶試劑和樣品液之間產(chǎn)生反應(yīng)后持續(xù)10分鐘，時(shí)間長(zhǎng)短不同，產(chǎn)生的結(jié)果也是不一樣的。反應(yīng)完之后，在冰箱中取出試劑，待其緩解到與室內(nèi)溫度平衡的時(shí)候，搖勻使用。這時(shí)候，在保證液體試劑清澈的環(huán)境下，按照標(biāo)準(zhǔn)加入一定量的酶、顯色劑和底物，漏加或多加都會(huì)對(duì)實(shí)驗(yàn)造成壞的影響。實(shí)驗(yàn)中，還要保證試劑在瓶中吸出后不得再注射回試劑瓶。

2.1.3 注意保質(zhì)和生產(chǎn)日期

認(rèn)真核對(duì)試劑的生產(chǎn)日期和保質(zhì)期，一定要保證沒有變質(zhì)的情況下使用。所以，為了防止變質(zhì)，不論哪種試劑，用一瓶開一瓶，直到用完后才可以打開下一瓶。

2.2 樣品的質(zhì)量控制

檢驗(yàn)結(jié)果是否準(zhǔn)確要看樣品是否合格，因此，樣品的正確采集、保存和處理是非常重要的。

2.2.1 取樣注意事項(xiàng)

取樣時(shí)要注意的是，最好選用沒有水洗過、有代表性的蔬菜，按照隨機(jī)抽取的方式分樣分裝，然后在1天內(nèi)送到實(shí)驗(yàn)室。

2.2.2 不同樣品的處理方法

菜葉的取樣要用到專門的菜葉取樣器，分別取8-10片不同的植株葉片；果菜的樣品要用取樣器在其表面取約1厘米的樣本，然后再用專用剪刀切成1厘米左右的塊狀。

2.2.3 特殊樣品的處理方法

有些果蔬中含有大量植物次生質(zhì)，這些對(duì)酶是有直接影響的。例如：蔥、蒜、香菜、芹菜等，其中有些蔬菜中含有很高的葉綠素，彼此之間產(chǎn)生比色反應(yīng)，并且容易出現(xiàn)假陽(yáng)性，果蔬的辛辣味越濃，出現(xiàn)這種現(xiàn)象的頻率越高。因此，對(duì)于這些性質(zhì)特殊的果蔬來(lái)說(shuō)，最好是采用整體浸提的方法來(lái)消除干擾。

3 檢測(cè)儀器設(shè)備的質(zhì)量控制

3.1 電子天平使用

電子天平的工作環(huán)境應(yīng)無(wú)大的振動(dòng)及電源干擾，無(wú)腐蝕氣體及液體。天平在每次使用前都必須預(yù)熱（15分鐘以上）。較長(zhǎng)時(shí)間未使用，則應(yīng)對(duì)其校正。

3.2 儀器使用

農(nóng)藥殘毒快速檢測(cè)儀在使用前，最好要把儀器預(yù)熱5-10分鐘，使儀器穩(wěn)定一下。儀器要保證在正常的環(huán)境條件下工作。

3.3 器具使用原則

器具專用，轉(zhuǎn)移徹底，振蕩均勻。在加提取液振蕩提取殘留農(nóng)藥這一過程中，各種移液管和加液管要分門別類,不可用同一器具盛用不同液體,因?yàn)榧词顾⒏蓛袅?也會(huì)對(duì)結(jié)果有不同程度的影響；轉(zhuǎn)移或滴加液體要確保液面對(duì)準(zhǔn)刻度線，釋放液體要徹底；有條件的話最好選用振蕩器，以消除人為因素的干擾。

3.4 準(zhǔn)確調(diào)零，掌握好速度

檢測(cè)設(shè)備之前的預(yù)熱調(diào)零是非常必要的，調(diào)整好之后準(zhǔn)備比色皿進(jìn)行檢測(cè)，此時(shí)一定要正置；此外，在加酶試劑產(chǎn)生顯色反應(yīng)的時(shí)候，對(duì)照并分析樣品的加入量。

4 實(shí)驗(yàn)室的環(huán)境條件質(zhì)量控制

4.1 具備的設(shè)施

為了保障實(shí)驗(yàn)室的安全，應(yīng)該具備的設(shè)施有：帶有排風(fēng)系統(tǒng)的試劑柜、防火設(shè)施、實(shí)驗(yàn)人員所需的防毒面具和急救藥品箱等。

4.2 保證實(shí)驗(yàn)室空氣環(huán)境

為了實(shí)驗(yàn)室內(nèi)的氣體排出室外，應(yīng)該裝有排風(fēng)機(jī)，排氣次數(shù)最好在5次以上。還可以設(shè)置空調(diào)機(jī)，將溫度控制在20℃以內(nèi)，過高或者過低都會(huì)影響酶的活性，從而影響實(shí)驗(yàn)結(jié)果。

5 檢測(cè)結(jié)果質(zhì)量控制

在快速檢測(cè)儀中放入要檢測(cè)的樣品，3分鐘之后讀出并記錄檢測(cè)數(shù)據(jù)，分析檢測(cè)結(jié)果的數(shù)據(jù)來(lái)確定檢測(cè)過程的準(zhǔn)確性。

5.1 空白試驗(yàn)

判定標(biāo)準(zhǔn)：空白測(cè)試3min得吸光度差值0.4≤Ac≤0.8。Ac＜0.4的原因：一是，酶的活性不夠；二是，溫度太低。

解決辦法：適當(dāng)增加酶的用量或更換酶；保證反應(yīng)溫度37℃-38℃。

5.2 農(nóng)藥標(biāo)準(zhǔn)品加標(biāo)試驗(yàn)

加標(biāo)合格率達(dá)100%。

5.3 平行樣測(cè)定

取測(cè)定樣品數(shù)量的10%-15%做平行，5個(gè)樣品以下，應(yīng)增加到100%。

5.4 檢測(cè)結(jié)果中抑制率出現(xiàn)負(fù)值原因分析

檢測(cè)結(jié)果中抑制率出現(xiàn)負(fù)值，是指在計(jì)算中樣本的△A。(3分鐘后與3分鐘前吸光值的差)比空白值的△A。(空白3分鐘后與3分鐘前吸光值的差)要大。造成的原因：一是，操作中的系統(tǒng)誤差，如果操作中不夠熟練就會(huì)產(chǎn)生人為的系統(tǒng)誤差。較小的負(fù)值誤差(－10%)以下，則是在允許范圍之內(nèi)。否則必須進(jìn)行兩次重復(fù)檢測(cè)；二是，試劑從冰箱取出后，未恢復(fù)到室溫進(jìn)行對(duì)照測(cè)試；對(duì)照測(cè)試時(shí)間與樣品測(cè)試時(shí)間相隔太久，導(dǎo)致光照與樣品測(cè)試溫度條件相差較大；三是，被測(cè)樣品色素干擾較嚴(yán)重；反應(yīng)試劑取用量是否準(zhǔn)確。另外，其他非測(cè)試孔空白的孔位可能也會(huì)出現(xiàn)負(fù)值。儀器操作時(shí)，注意托盤上的孔位不能有頭發(fā)、棉絲等其他異物，如有污物或液體可用過濾紙擦干凈，以免影響光路測(cè)量。

總之，在農(nóng)殘實(shí)驗(yàn)室的質(zhì)量控制方面一定要嚴(yán)格并長(zhǎng)期執(zhí)行。實(shí)驗(yàn)室人員要通過相互探討整理出日常中不可缺少的實(shí)驗(yàn)操作手冊(cè)，并堅(jiān)持執(zhí)行，不得松懈，只有這樣，才能體現(xiàn)出質(zhì)量控制的重要性。其目的主要是把誤差控制到最小，來(lái)保證檢測(cè)數(shù)據(jù)的準(zhǔn)確。此外，在檢測(cè)蔬菜樣品的過程中，態(tài)度一定要嚴(yán)肅認(rèn)真，按照程序一步步的進(jìn)行，建議對(duì)抑制率≥50%以上的菜樣，應(yīng)進(jìn)一步采用色譜或質(zhì)譜方法定性定量分析，以確定其農(nóng)藥殘留是否真的超標(biāo)，更客觀地為政府工作提供依據(jù)。S

［1］王傳新,王國(guó)禮.現(xiàn)代檢驗(yàn)醫(yī)學(xué)技術(shù)及質(zhì)量控制[M].濟(jì)南：山東科學(xué)技術(shù)出版社,2004：139.

［2］葉小君,藍(lán)萍.農(nóng)藥殘留速測(cè)儀在蔬菜農(nóng)殘檢測(cè)中的應(yīng)用[J].農(nóng)技服務(wù),2010(1)：138.