胰腺癌與慢性胰腺炎的胰液差異蛋白組學(xué)研究

胡和平

胰腺癌與慢性胰腺炎的胰液差異蛋白組學(xué)研究

胡和平

目的 觀察并探討胰腺癌與慢性胰腺炎患者的胰液差異蛋白組學(xué)情況。方法 選取自2012年6月～2013年6月，湖南省郴州市第一人民醫(yī)院消化內(nèi)科所收治的人胰液標(biāo)本共計20例作為研究對象。12例標(biāo)本為慢性胰腺炎患者，劃分為慢性胰腺炎組，8例標(biāo)本為胰腺癌患者，劃分為胰腺癌組。對雙向電泳方法下，慢性胰腺炎、胰腺癌患者所對應(yīng)的可重復(fù)蛋白質(zhì)點數(shù)值進行對比，觀察銀染處理后，表達量較高4個差異蛋白質(zhì)點的質(zhì)譜情況。結(jié)果 胰腺癌患者可重復(fù)性蛋白質(zhì)為81.00%，慢性胰腺炎患者可重復(fù)性蛋白質(zhì)為82.00%，2組患者對比數(shù)據(jù)差異無統(tǒng)計學(xué)意義；胰腺癌患者絲氨酸蛋白酶2前蛋白原、胰腺相關(guān)蛋白反應(yīng)檢出數(shù)值明顯高于慢性胰腺炎患者；彈性蛋白酶3 B前蛋白原、糜蛋白酶原B前體檢出數(shù)值明顯低于慢性胰腺炎患者，差異有統(tǒng)計學(xué)意義（P＜0.05）。結(jié)論 胰腺癌、慢性胰腺炎患者胰液蛋白質(zhì)譜表達存在明顯差異，可將其作為臨床鑒別診斷胰腺癌、慢性胰腺炎疾病的主要依據(jù)。

胰腺癌；慢性胰腺炎；胰液差異蛋白組學(xué)

胰腺癌疾病發(fā)病初期病情相對比較隱匿，惡性程度高，早期診斷不夠精確，從而致使本病患者預(yù)后較差，死亡率高[1-3]。為進一步提高臨床對胰腺癌、慢性胰腺炎疾病的鑒別診斷質(zhì)量，本研究選取自2012年6月～2013年6月湖南省郴州市第一人民醫(yī)院消化內(nèi)科所收治的12例慢性胰腺炎人胰液標(biāo)本以及8例胰腺癌人胰液標(biāo)本作為研究對象，利用蛋白質(zhì)組學(xué)技術(shù)進行對比分析，現(xiàn)報道如下。

1 資料與方法

1.1 一般資料 選取自2012年6月～2013年6月湖南省郴州市第一人民醫(yī)院消化內(nèi)科所收治的人胰液標(biāo)本共計20例作為研究對象。通過臨床指征合并病理學(xué)檢查的方式診斷：12例標(biāo)本為慢性胰腺炎患者的分為慢性胰腺炎組，8例標(biāo)本為胰腺癌患者的分為胰腺癌組。慢性胰腺炎組中，男8例，女4例，年齡41～68周歲，平均年齡為（48.9±2.3）歲，患者病程1～32個月，平均病程為（12.5±1.6）個月；胰腺癌組中，男5例，女3例，患者年齡45～65周歲，平均年齡（47.2±1.9）歲，患者病程1～30個月，平均病程（10.9±0.8）個月。2組患者基本資料對比差異無統(tǒng)計學(xué)意義，具有可比性。

1.2 方法 20例人胰液標(biāo)本均通過逆行胰膽管造影術(shù)中防止鼻胰管引流方式獲取，4.0℃狀態(tài)下進行離心處理，取上清備用，基于Bradford方法進行蛋白質(zhì)濃度測定，分裝后在-80.0℃狀態(tài)下進行保存。雙向凝膠電泳參考膠制備方法為：取胰腺癌患者適量體積胰液進行混合，控制標(biāo)準(zhǔn)為：胰腺癌胰液中單體胰液所對應(yīng)蛋白質(zhì)含量均等。按照同樣方法制備慢性胰腺炎患者所對應(yīng)的雙向凝膠電泳參考膠。取混合胰液（控制標(biāo)準(zhǔn)為150.0 ug蛋白質(zhì)）加入4×混合胰液體積的三氯乙酸/丙酮，充分振蕩后放置12.0 h，并在4.0℃狀態(tài)下進行離心，剔除上清。沉淀物使用冷丙酮單獨離心，真空干燥10.0 min，加入1.0 mmol/L濃度苯甲基磺酰氟，靜置備用。上樣液中對膠條進行水化反應(yīng)，持續(xù)時間為14.0 h，在17.0℃狀態(tài)下進行等電聚焦處理。觀察溴酚藍指示劑達到底部邊緣后停止電泳反應(yīng)，銀染下給予掃描（掃描期間分辨率控制標(biāo)準(zhǔn)為300.0 dpi），進行圖像分析。后取部分表達量較高差異蛋白質(zhì)點進行基質(zhì)輔助激光解析電離飛行時間質(zhì)譜分析，觀察分析結(jié)果。

1.3 觀察指標(biāo) 對雙向電泳方法下，慢性胰腺炎、胰腺癌患者所對應(yīng)的可重復(fù)蛋白質(zhì)點數(shù)值進行對比，觀察銀染處理后，表達量較高4個差異蛋白質(zhì)點的質(zhì)譜情況。

1.4 統(tǒng)計學(xué)方法 本文數(shù)據(jù)使用SPSS 17.0軟件進行分析與計算，正態(tài)計量資料以“x±s”表示，組間比較采用t檢驗；計數(shù)資料以百分比（%）表示，組間比較采用χ2檢驗。P＜0.05為差異有統(tǒng)計學(xué)意義。

2 結(jié)果

2.1 雙向電泳分析結(jié)果對比 本組20例人胰液標(biāo)本均通過逆行胰膽管造影術(shù)中防止鼻胰管引流方式獲取，胰流量取值在38.0～200.0 mL，蛋白質(zhì)濃度取值在0.9～4.5 g/L?；赑D Quest圖像分析軟件，單塊膠條所對應(yīng)蛋白質(zhì)點在272～285個。胰腺癌患者可重復(fù)性蛋白質(zhì)為81.00%，慢性胰腺炎患者可重復(fù)性蛋白質(zhì)為82.00%，2組患者對比數(shù)據(jù)差異無統(tǒng)計學(xué)意義（見表1）。

表1 2組患者等量混合胰液自身比較可重復(fù)性蛋白質(zhì)點數(shù)據(jù)對比

2.2 胰液蛋白質(zhì)差異表達 銀染反應(yīng)下，共檢出表達量較高4個差異蛋白質(zhì)點。胰腺癌患者絲氨酸蛋白酶2前蛋白原、胰腺相關(guān)蛋白反應(yīng)檢出數(shù)值明顯高于慢性胰腺炎患者；彈性蛋白酶3 B前蛋白原、糜蛋白酶原B前體檢出數(shù)值明顯低于慢性胰腺炎患者，差異有統(tǒng)計學(xué)意義（P＜0.05，見表2）。

表2 胰液蛋白質(zhì)差異表達數(shù)據(jù)對比

3 討論

有關(guān)研究證實，慢性胰腺炎可作為胰腺癌疾病的危險因素之一[4-5]。特別是對于病程在10年以上的慢性胰腺炎疾病患者而言，多將其作為誘發(fā)胰腺癌的高風(fēng)險因素。本病患者胰液內(nèi)腫瘤特異性蛋白質(zhì)含量豐富[6]，可能由出現(xiàn)癌變的上皮細胞分泌至胰液當(dāng)中。通過對雙電泳以及基質(zhì)輔助激光解析電離飛行時間質(zhì)譜分析的方式，能夠?qū)σ认侔┗颊咭约奥砸认傺谆颊咴谝纫褐械牟町惐磉_蛋白質(zhì)進行有效的鑒定。本研究中胰腺癌患者絲氨酸蛋白酶2前蛋白原、胰腺相關(guān)蛋白反應(yīng)檢出數(shù)值明顯高于慢性胰腺炎患者；彈性蛋白酶3 B前蛋白原、糜蛋白酶原B前體檢出數(shù)值明顯低于慢性胰腺炎患者，差異有統(tǒng)計學(xué)意義（P＜0.05）。

同時，有關(guān)研究證實，對于胰腺癌患者而言，PRSS 2基因在癌變細胞中的表達異常增高，主要是受K-ras癌變基因激活后的下游目標(biāo)機制影響所致，其在腫瘤的侵潤轉(zhuǎn)移方面中作用表現(xiàn)突出，為此使得該蛋白質(zhì)表達在胰腺癌患者胰液標(biāo)本中增高顯著（多可達到200%以上）[7-8]。

綜上所述，胰腺癌、慢性胰腺炎患者胰液蛋白質(zhì)譜表達存在明顯差異，可將其作為臨床鑒別診斷胰腺癌、慢性胰腺炎疾病的主要依據(jù)。

[1] 朱峰，許國銘，李兆申，等.人胰液蛋白質(zhì)組的雙向電泳方法初步研究[J].中華肝膽外科雜志，2009，15(3):170-172.

[2] 朱峰，李兆申，高軍，等.人胰腺癌胰液蛋白質(zhì)譜差異表達初步分析[J].中華消化雜志，2008，28(3):145-147.

[3] 高飛，張偉化，劉楓，等.胰液中人Hedgehog相互作用蛋白基因CpG島甲基化狀態(tài)及意義[J].中華胰腺病雜志，2009，9(3):190-192.

[4] 高海晉，許翠萍，楊榮，等.惡性腫瘤患者血清骨形態(tài)發(fā)生蛋白2、4、5、6的水平變化與臨床意義[J].當(dāng)代醫(yī)學(xué)，2012，18(24):1-3.

[5] 盧德權(quán).尿胰蛋白酶原-2和C-反應(yīng)蛋白在急性胰腺炎診斷中的意義[J].當(dāng)代醫(yī)學(xué)，2010，16(7):45.

[6] 尹金柱，于豐彥.急性胰腺炎病程中TLR 4/NF-κB炎癥反應(yīng)動態(tài)作用研究[J].中國當(dāng)代醫(yī)藥，2012，19(36):7-9.

[7] 李帥軍,王旺河.外引流膽汁和胰液回輸對胰十二指腸切除術(shù)后患者的影響[J].中國醫(yī)師雜志,2012,14(9):1246-1248.

[8] 王鋒,王興鵬.胰腺癌的蛋白質(zhì)組學(xué)研究進展[J].胃腸病學(xué)和肝病學(xué)雜志,2011,20(4):388-392.

10.3969/j.issn.1009-4393.2014.33.029

湖南 423000 湖南省郴州市第一人民醫(yī)院肝膽外科（胡和平）