何曉清 何繼宏 李遠(yuǎn)珍

反向點(diǎn)雜交法在β-珠蛋白生成障礙性貧血基因診斷中的應(yīng)用

何曉清 何繼宏 李遠(yuǎn)珍

目的 探討反向點(diǎn)雜交法在β-珠蛋白生成障礙性貧血基因診斷中的應(yīng)用價(jià)值。方法 抽取我院2012年10月至2013年10月收治的30例β-珠蛋白生成障礙性貧血患者采用反向點(diǎn)雜交法進(jìn)行β-珠蛋白生成障礙性貧血基因檢測，同時(shí)結(jié)合其相關(guān)臨床資料進(jìn)行回顧性分析。結(jié)果 30例β-珠蛋白生成障礙性貧血患者中，發(fā)生CD41-42突變者13例（43.3%），發(fā)生IVS-2-654者6例（20.0%），發(fā)生TATAbox-28者5例（16.7%），發(fā)生CD17突變者4例（13.3%），發(fā)生CD43和CD26者各1例（3.3%）。結(jié)論 給予β-珠蛋白生成障礙性貧血患者反向點(diǎn)雜交法診斷，能有效診斷患者的基因突變情況，臨床應(yīng)給予足夠重視，并通過合理應(yīng)用該診斷方式，加強(qiáng)產(chǎn)前診斷和防控。

反向點(diǎn)雜交法；β-珠蛋白生成障礙性貧血；基因診斷

在廣東省，珠蛋白生成障礙性貧血是一種較為常見的遺傳病癥，其發(fā)病率具有明顯的地域性，主要以熱帶、亞熱帶等地區(qū)較為多見，并且好發(fā)于地中海沿岸、北非、印度以及東南亞等地區(qū)[1]。一般地中海貧血主要包括兩種類型，即α-地中海貧血和β-珠蛋白生成障礙性貧血，其中以β-珠蛋白生成障礙性貧血在我國南方最為多見[2]。為了加強(qiáng)臨床對β-珠蛋白生成障礙性貧血的基因診斷，以做到盡早診斷和及時(shí)治療，本文就我院2012年10月至2013年10月收治的30例β-珠蛋白生成障礙性貧血患者及其臨床資料進(jìn)行分析，現(xiàn)報(bào)道如下。

1 資料與方法

1.1 一般資料 收集2012年10月至2013年10月到我院確診并接受治療的30例β-珠蛋白生成障礙性貧血住院患者及其臨床資料，其中男17例，女13例，年齡7～64歲，平均年齡（28±5）歲。

1.2 方法

1.2.1 血液學(xué)診斷 所有入選患者均需進(jìn)行血常規(guī)、紅細(xì)胞脆性、血紅蛋白電泳等檢測。血常規(guī)采用ABX pentra DF 120血細(xì)胞分析儀檢測；紅細(xì)胞脆性參照比色一管測定方式[3]；血紅蛋白電泳采用美國海倫娜公司生產(chǎn)的RZP快速電泳儀對其行檢測。

1.2.2 β-珠蛋白生成障礙性貧血基因診斷 β-珠蛋白生成障礙性貧血基因檢測盒由亞能生物技術(shù)公司所提供，嚴(yán)格按照說明書操作。若樣本紅細(xì)胞的平均容積在80 fl以內(nèi)，紅細(xì)胞滲透脆性不超過60%，或者是體檢健康者的δ-HbA2超過3.5%，則認(rèn)為患有β-珠蛋白生成障礙性貧血癥狀。

2 結(jié)果

30例β-珠蛋白生成障礙性貧血患者中，13例有發(fā)生CD41-42基因突變，突變率為43.3%；6例IVS-2-654突變，占20.0%；另外發(fā)生TATAbox-28、CD17、CD43和CD26基因突變者分別有5例、4例、1例和1例，見表1。

3 討論

反向點(diǎn)雜交法是近年來常用于檢測β-珠蛋白生成障礙性貧血的一種基因診斷方式，不過在大部分臨床研究中，該基因診斷方法常與其他檢測手段共同聯(lián)用，以進(jìn)一步確保β-珠蛋白生成障礙性貧血的診斷符合率[4-5]。通常在給予疑為β-珠蛋白生成障礙性貧血患者血液學(xué)診斷時(shí)，可選擇反向點(diǎn)雜交法聯(lián)合血液學(xué)診斷法。血液學(xué)診斷法主要是通過對疑似為β-珠蛋白生成障礙性貧血患者的血紅蛋白、血紅蛋白-A2的表型改變情況進(jìn)行檢查，以此來為病情的診斷提供參考數(shù)據(jù)，同時(shí)，該診斷方法的檢測成本相對低廉，而且操作簡單、安全，診斷速率高，為基層醫(yī)院在診斷β-珠蛋白生成障礙性貧血方面提供了可行性[2,6]。不足的是，該診斷方法無法對β-珠蛋白生成障礙性貧血提供確切診斷，且也無法對其進(jìn)行分型。相對來說，反向點(diǎn)雜交法在該方面則具有這兩方面的優(yōu)勢，并且與其他基因診斷手段類似，具有操作安全、簡單和診斷率高的特點(diǎn)。結(jié)合本研究結(jié)果來看，30例β-珠蛋白生成障礙性貧血患者經(jīng)反向點(diǎn)雜交法檢測后，發(fā)現(xiàn)有接近一半的患者（13例）發(fā)生CD41-42突變，基因突變率為43.3%，有6例發(fā)生IVS-2-654基因突變，另外發(fā)生TATAbox-28者有5例，發(fā)生CD17突變者有4例，發(fā)生CD43和CD26者各有1例。提示反向點(diǎn)雜交法可深入診斷β-珠蛋白生成障礙性貧血疾病，并對其進(jìn)行分型觀察，效果相對令人滿意。

表1 30例β-珠蛋白生成障礙性貧血患者的基因診斷結(jié)果分析

經(jīng)本研究表明，給予β-珠蛋白生成障礙性貧血患者反向點(diǎn)雜交法診斷，能有效診斷患者的基因突變情況，臨床應(yīng)給予足夠重視，并通過合理應(yīng)用該診斷方式，加強(qiáng)產(chǎn)前診斷和防控。

[1] 周永娥,朱衛(wèi)健.地中海貧血的產(chǎn)前診斷及治療進(jìn)展[J].醫(yī)學(xué)綜述,2011,17(21):3306-3308.

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[3] 呂燕波,潘興華,徐慶玲,等.應(yīng)用PCR-反向點(diǎn)雜交法檢測β-地中海貧血基因點(diǎn)突變[J].西南國防醫(yī)藥,2010,20(7):711-713.

[4] 郭廣洲,陳延娥,廖生赟,等.應(yīng)用反向點(diǎn)雜交法檢測α-地中海貧血點(diǎn)突變[J].熱帶醫(yī)學(xué)雜志,2008,8(8):785-787.

[5] Masera N,Tavecchia L,Capra M,et al.Optimal response to thalidomide in a patient with thalassaemia major resistant to conventional therapy[J].Blood Transfus,2010,8(1):63-65.

[6] 鄧俊耀,龍安翼,李惠.桂林市城鎮(zhèn)育齡人群地中海貧血現(xiàn)況調(diào)查[J].中華流行病學(xué)雜志,2009,30(2):156-158.

R556.61

A

1673-5846(2014)07-0180-02

廣東省惠州市第三人民醫(yī)院檢驗(yàn)科，廣東惠州 516002