朱名毅，姚金光，劉津

（右江民族醫(yī)學(xué)院，廣西 百色 533000 E－mail：zhumingyi2009＠163.com）

MicroRNA（縮寫為miRNA 或miR）是一類新發(fā)現(xiàn)的非編碼單鏈RNA，由約22個(gè)核苷酸組成。它們廣泛存在于動(dòng)植物的真核細(xì)胞中，主要通過降解靶mRNA 或者抑制其翻譯，從而調(diào)節(jié)細(xì)胞分化、增殖和凋亡，參與胚胎發(fā)育、機(jī)體代謝和腫瘤發(fā)生發(fā)展等過程。越來越多的證據(jù)證明miRNA 在不同腫瘤組織間存在異常表達(dá)，而且miRNA 的表達(dá)與腫瘤的發(fā)生、發(fā)展、轉(zhuǎn)移和預(yù)后等有關(guān)。miR－200c作為miR－200家族中重要成員之一，主 要 調(diào) 控 上 皮 間 質(zhì) 轉(zhuǎn) 化（epithelial mesenchymal transition，EMT）過程，在多數(shù)腫瘤的發(fā)生及轉(zhuǎn)移過程中發(fā)揮重要的作用?，F(xiàn)將miR－200c在腫瘤發(fā)生發(fā)展中的研究進(jìn)展做一綜述。

1 miR－200c的生物學(xué)特性

miR－200家族有5個(gè)成員，包括miR－200a、miR－200b、miR－200c、miR－429 和miR－141，其中miR－200a、miR－200b和miR－429位于人類1號(hào)染色體的1p36.33，而miR－200c和miR－141位于人類12號(hào)染色體的12p13.31。miR－200家族的5個(gè)miRNA 有相似的核心序列，miR－200a／200b／429的核心序列AAUACU 和miR－200c／141的AACACU 僅相差一個(gè)堿基，所以又可以從功能方面分為兩個(gè)子家族。盡管基因靶點(diǎn)預(yù)測(cè)方法預(yù)測(cè)兩個(gè)群的靶基因譜不同，但芯片檢測(cè)結(jié)果發(fā)現(xiàn)兩者有很高的重疊，預(yù)示著miR－200家族各個(gè)成員都可能參與相同或相關(guān)的生理過程［1］。miR－200c的表達(dá)異常與腫瘤的發(fā)生發(fā)展有密切的聯(lián)系，但其具體機(jī)制目前尚不明確。有研究證實(shí)miR－200c低表達(dá)與DNA 的異常甲基化相關(guān)。有學(xué)者研究發(fā)現(xiàn)在正常成纖維細(xì)胞和miR－200c低表達(dá)的腫瘤細(xì)胞中發(fā)現(xiàn)miR－200c轉(zhuǎn)錄起始位點(diǎn)上游區(qū)CpG 島存在高度DNA 甲基化，而miR－200c高表達(dá)的腫瘤細(xì)胞和正常上皮細(xì)胞中CpG 島不存在DNA 甲基化；腫瘤細(xì)胞受到DNA 甲基轉(zhuǎn)移酶抑制劑刺激后，可以恢復(fù)miR－200c的表達(dá)，表明DNA 甲基化可以誘導(dǎo)miR－200c基因的沉默［2］。還有學(xué)者［3］發(fā)現(xiàn)，p53可以通過直接結(jié)合miR－200c的啟動(dòng)子區(qū)從而激活miR－200c；而miR－200c在p53缺失的上皮細(xì)胞癌中的表達(dá)是下調(diào)的，p53通過調(diào)控miR－200c的表達(dá)來調(diào)節(jié)EMT 過程。Zhang等［4］將PPARalpha／LRH－1siRNAs轉(zhuǎn)染到子宮內(nèi)膜癌MHCC97H 細(xì)胞內(nèi)可以下調(diào)miR－200c的表達(dá)，而轉(zhuǎn)染SHPsiRNAs則可以上調(diào)miR－200c的表達(dá)；同時(shí)氧化應(yīng)激也可以上調(diào)miR－200c在腫瘤細(xì)胞中的表達(dá)從而誘導(dǎo)細(xì)胞凋亡［5］。此外，Burk等［6］在乳腺癌、胰腺癌和結(jié)直腸癌中的研究發(fā)現(xiàn)，ZEB1也可以直接抑制miR－200c的轉(zhuǎn)錄，ZEB1與miR－200c之間存在雙重負(fù)反饋回路，共同參與調(diào)節(jié)腫瘤的侵襲轉(zhuǎn)移和EMT。

2 miR－200c在腫瘤中的表達(dá)

近年來國(guó)內(nèi)外大量研究表明，miR－200c在胰腺癌、黑色素瘤、腎透明細(xì)胞癌、肝癌和膀胱癌等多種腫瘤中的表達(dá)顯著低于相應(yīng)的正常組織。Yu等［7］檢測(cè)99例胰腺癌組織標(biāo)本中miR－200c的表達(dá)，結(jié)果顯示miR－200c高表達(dá)的患者術(shù)后生存率明顯高于低表達(dá)患者。齊天偉等［8］應(yīng)用實(shí)時(shí)熒光定量PCR 方法檢測(cè)miR－200c在76例食管鱗癌和配對(duì)癌旁組織中的表達(dá)情況，發(fā)現(xiàn)與癌旁組織相比，食管鱗癌組織中miR－200c的表達(dá)顯著減少；而且在中晚期食管癌組織中miR－200c的表達(dá)較早期食管鱗癌組織降低更為顯著。然而在少數(shù)腫瘤中miR－200c的表達(dá)高于其相應(yīng)的正常組織，如卵巢癌、子宮內(nèi)膜癌和結(jié)腸癌。Xi等［9］研究發(fā)現(xiàn)miR－200c高表達(dá)的患者術(shù)后存活率較低。張鵬等［10］也發(fā)現(xiàn)相對(duì)于正常黏膜組織，miR－200c在直腸癌組織中表達(dá)上調(diào)，而且miR－200c的表達(dá)與患者血清癌胚抗原（CEA）水平有關(guān)。此外，Cochrane等［11］研究發(fā)現(xiàn)相對(duì)于低分化腫瘤，高分化的子宮內(nèi)膜癌、乳腺癌和卵巢癌中miR－200c的表達(dá)水平顯著增高，提示miR－200c與腫瘤的惡性程度有關(guān)。李林霞等［12］采用Real－timeRT－PCR 技術(shù)比較正常卵巢、交界性卵巢腫瘤及上皮性卵巢癌組織miR－200c的表達(dá)，在正常卵巢組織、交界性卵巢腫瘤、上皮性卵巢癌中miR－200c表達(dá)依次上升，而在低分化卵巢癌、透明細(xì)胞卵巢癌及轉(zhuǎn)移性卵巢癌中miR－200c表達(dá)下降；患者組織中miR－200c表達(dá)越高，其預(yù)后越好。miR－200c在腫瘤中表達(dá)有下調(diào)或上升，在惡性程度高和侵襲性強(qiáng)的腫瘤中，其發(fā)揮腫瘤抑癌基因的作用，因此miR－200c可以作為判斷腫瘤預(yù)后的重要標(biāo)志物之一。

3 miR－200c在腫瘤發(fā)生發(fā)展中的作用

3.1 miR－200c與腫瘤侵襲轉(zhuǎn)移 EMT 是指上皮細(xì)胞在形態(tài)學(xué)上發(fā)生向間質(zhì)細(xì)胞轉(zhuǎn)化，同時(shí)間質(zhì)細(xì)胞的標(biāo)志物表達(dá)增強(qiáng)，細(xì)胞的侵襲遷移能力也增加。EMT 多發(fā)生在胚胎發(fā)育過程，而成熟細(xì)胞的EMT 可以促進(jìn)腫瘤細(xì)胞的侵襲轉(zhuǎn)移。EMT 的過程中出現(xiàn)上皮鈣黏蛋白（E－cadherin）表達(dá)下降，從而降低細(xì)胞間連接的穩(wěn)定性，上皮鈣黏蛋白的表達(dá)水平與EMT 的發(fā)生和腫瘤的侵襲能力呈負(fù)相關(guān)。轉(zhuǎn)錄因子（Snail、ZEB1和ZEB2）可下調(diào)上皮鈣黏蛋白的表達(dá)，促進(jìn)EMT 的發(fā)生，促進(jìn)腫瘤細(xì)胞的侵襲和轉(zhuǎn)移。目前的研究發(fā)現(xiàn)miR－200c能夠直接靶向抑制轉(zhuǎn)錄因子ZEB1／2，使上皮鈣黏蛋白的表達(dá)上調(diào)，抑制EMT的發(fā)生，從而達(dá)到抑制腫瘤侵襲和轉(zhuǎn)移的目的［13］。周洋等［14］利用基因轉(zhuǎn)染技術(shù)將miR－200c轉(zhuǎn)染至外陰鱗癌A－431 細(xì)胞，檢測(cè)發(fā)現(xiàn)A－431細(xì)胞轉(zhuǎn)染miR－200c后E－鈣黏蛋白的表達(dá)上調(diào)，而miR－200c高表達(dá)能夠顯著抑制A－431細(xì)胞侵襲和遷移能力。Burk等［6］發(fā)現(xiàn)TGF－β和TNF－a可以通過上調(diào)ZEB1，誘導(dǎo)結(jié)直腸癌細(xì)胞、胰腺癌細(xì)胞和乳癌細(xì)胞EMT的形成；而miR－200c的過表達(dá)，或者沉默ZEB1可以部分抑制EMT 過程，降低腫瘤細(xì)胞的轉(zhuǎn)移能力。actin 調(diào)節(jié)蛋白（FHOD1和PPM1F）也是miR－200c的調(diào)控靶點(diǎn)，miR－200c能夠抑制actin調(diào)節(jié)蛋白的表達(dá)，從而抑制乳癌細(xì)胞的的侵襲和轉(zhuǎn)移［15］。有學(xué)者發(fā)現(xiàn)在胰導(dǎo)管癌中，miR－200c在轉(zhuǎn)移癌中的表達(dá)高于原位癌，抑制基因EP300也可以抑制miR－200c的表達(dá)［16］。以上研究結(jié)果說明miR－200c能同時(shí)作用于多個(gè)靶基因以調(diào)節(jié)腫瘤細(xì)胞的侵襲遷移能力。

3.2 miR－200c與腫瘤耐藥 臨床治療過程中腫瘤細(xì)胞很容易對(duì)化療藥物產(chǎn)生耐藥性，研究發(fā)現(xiàn)耐藥機(jī)制非常復(fù)雜，藥物靶點(diǎn)的改變、藥物的給藥方式、細(xì)胞死亡通路和細(xì)胞修復(fù)等均與之密切相關(guān)［17］。miRNA 對(duì)某些關(guān)鍵基因的轉(zhuǎn)錄后調(diào)控是腫瘤細(xì)胞產(chǎn)生耐藥性的主要機(jī)制之一。崔秀英等［18］使用microRNA 芯片和RT－PCR 方法比較MCF－7乳腺癌細(xì)胞株及其阿霉素耐藥細(xì)胞株MCF－7／ADR 的microRNA 表達(dá)譜，發(fā)現(xiàn)耐藥株與親本細(xì)胞系相比有16個(gè)microRNA 表達(dá)增高，20個(gè)microRNA 表達(dá)降低；RT－PCR 方法也證實(shí)miR－200c在耐藥株中表達(dá)顯著下降。Cochrane等［11］還發(fā)現(xiàn)miR－200c可以直接靶向抑制3型β－微管蛋白基因（TUBB3，它被認(rèn)為是以微管為靶點(diǎn)的化療藥物產(chǎn)生耐藥的主要機(jī)制）的表達(dá)。在對(duì)子宮內(nèi)膜癌Hec50細(xì)胞給予紫杉醇治療前，上調(diào)miR－200c的表達(dá)可以增加腫瘤細(xì)胞對(duì)紫杉醇的敏感性。而在對(duì)非小細(xì)胞肺癌（NCI－H1299細(xì)胞）的研究中發(fā)現(xiàn)miR－200c過表達(dá)可以增加其對(duì)順氯氨鉑和西妥昔單抗的敏感性［19］。同時(shí)也可以通過上調(diào)乳腺癌細(xì)胞的miR－200c的表達(dá)以增加其對(duì)化療藥物阿霉素的敏感性［20］。但是在少數(shù)腫瘤中，miR－200c過表達(dá)反而容易引起腫瘤細(xì)胞的耐藥性。還有學(xué)者［21］發(fā)現(xiàn)對(duì)順氯氨鉑耐受的食管癌細(xì)胞其miR－200c表達(dá)是增加的，抑制miR－200c的表達(dá)則可以增加其對(duì)順氯氨鉑的藥物敏感性，其調(diào)控機(jī)制可能是通過上調(diào)蛋白質(zhì)磷酸酶2調(diào)節(jié)亞基1B（PPP2R1B）蛋白，減少磷酸化AKT 的表達(dá)。所以，miR－200c主要通過靶向抑制不同基因的表達(dá)來調(diào)節(jié)腫瘤細(xì)胞對(duì)化療藥物的敏感性，也可能增加腫瘤細(xì)胞的耐藥性。

3.3 miR－200c與腫瘤標(biāo)志物 腫瘤標(biāo)志物對(duì)臨床診療過程有很大的幫助和應(yīng)用價(jià)值，其可用于腫瘤篩選普查、診斷、預(yù)后判斷、療效評(píng)價(jià)和隨訪觀察等方面。miRNA 在人血清中是穩(wěn)定存在的，某些miRNA 的表達(dá)在腫瘤患者血清中呈現(xiàn)顯著增高或者降低，所以可以把miRNA 作為一種特異性較高的腫瘤標(biāo)志物。林國(guó)友等［22］采用實(shí)時(shí)熒光定量PCR 方法檢測(cè)miR－200c在50例胃癌患者和50例健康人的血清中的表達(dá)情況，結(jié)果顯示胃癌患者血清中miR－200c水平顯著高于健康人，通過ROC曲線分析發(fā)現(xiàn)miR－200c診斷胃癌的特異度和敏感度分別為78.5%和67.5%。但是張學(xué)營(yíng)等［23］在檢測(cè)31例乳腺癌患者血清中miR－200c的表達(dá)水平時(shí)，發(fā)現(xiàn)miR－200c在乳腺癌患者血清中的表達(dá)是下降的，miR－200c的表達(dá)情況與乳腺癌的大小、臨床病理分期、淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移和ER 表達(dá)狀態(tài)等都有一定的關(guān)系。Liu等［24］也對(duì)6例非小細(xì)胞肺癌組織標(biāo)本進(jìn)行檢測(cè)，miR－200c表達(dá)低于相應(yīng)的正常組織，而77例肺癌患者血清中的miR－200c表達(dá)也顯著低于正常人水平，統(tǒng)計(jì)學(xué)分析發(fā)現(xiàn)miR－200c的高表達(dá)與肺癌低存活率有關(guān)。此外miR－200c也可用于判斷膀胱癌、胰腺癌、腎癌、肝癌和卵巢癌等患者的預(yù)后和轉(zhuǎn)歸［2］。這些研究結(jié)果說明，miR－200c可以作為腫瘤標(biāo)志物在腫瘤診斷、預(yù)后判斷與轉(zhuǎn)歸、治療效果評(píng)價(jià)等方面發(fā)揮重要的作用。

4 展望

miR－200c作為miR－200 家族重要成員之一，在腫瘤發(fā)生發(fā)展、轉(zhuǎn)移、耐藥和轉(zhuǎn)歸等方面起重要的作用。在大多數(shù)腫瘤中miR－200c 表達(dá)下調(diào)，可以通過直接靶向抑制BMI1、ZEB1／2和FAP－1等基因，從而抑制腫瘤細(xì)胞增殖，促進(jìn)細(xì)胞凋亡。目前的研究側(cè)重于miR－200c在腫瘤中表達(dá)水平的改變以及其靶點(diǎn)的發(fā)現(xiàn)。環(huán)境和遺傳等因素對(duì)miR－200c表達(dá)的影響及其調(diào)控機(jī)制，miR－200c對(duì)腫瘤生物特性變化的影響，以及miR－200c如何參與腫瘤轉(zhuǎn)移、藥物耐受的機(jī)制等方面都還有待進(jìn)一步的研究。

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