夏三琴 (廣東省高州市第二人民醫(yī)院耳鼻喉科，廣東 茂名 525200)

ERCC1基因蛋白表達與鼻咽癌順鉑輔助化療耐藥的關系

夏三琴 (廣東省高州市第二人民醫(yī)院耳鼻喉科，廣東 茂名 525200)

目的：探討ERCC1基因蛋白表達與鼻咽癌順鉑輔助化療耐藥的關系。方法：回顧性分析收集的鼻咽癌組織標本38例與正常鼻咽組織30例作為對照來進行了測定以及分析。結(jié)果：對收集的38例鼻咽癌組織中放療加化療耐藥者30例，其中ERCCl陽性表達23例(76.67%);放療加化療敏感者26例，ERCCl陽性表達者為8例(30.77%)，放療加化療耐藥組ERCCl陽性表達率明顯高于敏感組，差異有統(tǒng)計學意義(P=56.6/81.2=0.693，P＜0.05)。結(jié)論：揭示ERCCl與鼻咽癌發(fā)病及耐藥性的關系，實現(xiàn)個體化治療有明顯意義。值得臨床推廣

ERCC1基因蛋白;輔助化療;鼻咽癌

鼻咽癌是我國最常見的惡性腫瘤，據(jù)筆者近年來查閱的資料以及統(tǒng)計發(fā)現(xiàn)鼻咽癌的發(fā)病率明顯增加，況且還有明顯的年輕化趨勢。故而研究該腫瘤的進展也明顯地加快，因此從治療上也發(fā)生了明顯改進，從以往的放療、化療演變成當今的綜合治療——放療加新輔助化療。進而也強調(diào)治療的個性化。目前的新輔助化療治療方案已被證實為行之有效的治療手段［4］，該治療手段可以用于縮小腫瘤瘤體體積，減少腫瘤細胞的浸潤及轉(zhuǎn)移，并可有效消除其他部位的隱性轉(zhuǎn)移。新輔助化療已成為鼻咽癌患者綜合治療的常規(guī)手段之一。順鉑是目前鼻咽癌放療加化療中使用廣泛的化療藥物。但是目前傳統(tǒng)治療鼻咽癌的方法，療效已經(jīng)到了瓶頸，如何利用腫瘤基因標記物預測療效，突破療效瓶頸，成為當今研究熱門。本課題用免疫組織化學技術檢測ERCCl在正常鼻咽組織以及鼻咽癌患者腫瘤組織表達，從基因?qū)W方面來分析鼻咽癌細胞ERCCl表達與順鉑化療耐藥的關系，總結(jié)出ERCCl與鼻咽癌發(fā)病及耐藥性的相關性，來給以指導鼻咽癌患者實現(xiàn)個體化治療。其意義在于可以明顯減少鼻咽癌復發(fā)及轉(zhuǎn)移機會，從而明顯提高鼻咽癌患者的生存率，減少家庭及社會的負擔。

1 資料與方法

1.1 一般資料：選擇收集我院耳鼻喉科2006年3月～2012年3月手術切除并經(jīng)病理證實的鼻咽癌組織標本38例，患者的年齡為21～75歲，平均53歲。按照我國權(quán)威的病理分期標準：I期11例，Ⅱ期6例，Ⅲ期20例，Ⅳ期1例;組織學分類：鱗狀細胞癌27例，腺癌6例，未分化癌5例，泡狀核細胞癌1例;組織學分級：高分化11例，中分化8例，低分化13例，未分化6例。所有組織標本取得后均用甲醛固定，石蠟包埋保存。由兩位病理科專家重新核對了組織標本和切片，復核了診斷，并臨床資料保存完好的病例;另取正常卵巢組織30例作為對照組。

1.2 方法：免疫組化染色。

1.2.1 試劑：采用的試劑有即用型快捷免疫組化MaxvisionTM鼠抗兔，濃縮型鼠抗人ERCCl單克隆抗體(一抗)和HRP(二抗)廣譜的DAB顯色試劑盒以及檢測試劑盒，均購自北京中山金橋生物技術有限公司。

1.2.2 免疫組化染色方法：將采集的組織標本通過專業(yè)切片，常規(guī)脫蠟水化，再置入檸檬酸鹽(一定比例)緩沖液中行抗原修復(必須是通過高溫高壓)，等待冷卻后用自來水沖洗切片，沖洗5 min連續(xù)3次;滴加3%過氧化氫室溫下孵育10 min，放置在4℃的冰箱24 h，PBS沖洗5 min連續(xù)3次;滴an－抗，室溫下孵育15 min，PBS沖洗5 min連續(xù)3次;DAB顯色，蘇木精復染，中性樹膠封片。

1.2.3 染色結(jié)果：采用雙盲法來觀察，在切片各個部位各隨機選取一個約400倍視野，來觀察不同視野中細胞染色的情況來計算陽性細胞百分比。判定結(jié)果：陽性細胞百分比＜10%的代表陰性;10%～30%為弱陽性;30% ～70%為中度陽性;＞70%強陽性。

1.2.4 嚴格、真實、準確做好各項數(shù)據(jù)的記錄、整理。

1.3 統(tǒng)計學處理：使用SPSSl6.0進行分析;2個和3個樣本率的比較用χ2檢驗，生存率的計算用Life Table方法，生存分析用Kaplan－Meier計算法和 Log－rank test時序檢驗;P＜0.05為差異有統(tǒng)計學意義。

2 結(jié)果

2.1 鼻咽癌組織中ERCCl的表達及其與臨床病理特征的關系：ERCCl陽性表達主要定位于細胞核，呈棕黃色顆粒狀［4］。臨床上采集30例正常鼻咽組織，38例中晚期鼻咽癌組織進行比較：對照組38例，陽性表達31例(占81.2%)，正常鼻咽組織30例，陽性表達17例(占56.6%)，差異性P=56.6/81.2=0.693，P＞0.05。

ERCCl表達與中晚期鼻咽癌患者的年齡、組織學類型、組織學分級以及腫瘤發(fā)生的部位等臨床病理特征及發(fā)病率均無明顯的相關性［3］(P＞0.05)。

2.2 鼻咽癌組織ERCCl表達與順鉑化療耐藥的關系：38例鼻咽癌組織中放療加化療耐藥者30例，其中ERCCl陽性表達23例(76.67%);放療加化療敏感者26例，ERCCl陽性表達者為8例(30.77%)，放療加化療耐藥組ERCCl陽性表達率明顯高于敏感組，差異有統(tǒng)計學意義(72～11.87，P＜0.05)。耐藥組積分值為(5.17±3.38)分，敏感組積分值為(2.38±2.26)分，放療加化療耐藥組積分值明顯高于敏感組，差異有統(tǒng)計學意義(t=3.656，P＜0.05)。

3 討論

目前，醫(yī)學界已有共識，對于鼻咽癌治療的難點為鼻咽癌細胞對化療藥物，尤其是對一線化療藥順鉑產(chǎn)生耐藥性，嚴重阻斷了化療藥物的抗腫瘤效應。順鉑是鼻咽癌新輔助、輔助化療中常用的藥物，進入腫瘤細胞后與DNA結(jié)合，形成鉑－DNA加合物(Pt－DNA加合物)，導致DNA鏈內(nèi)或鏈間交鏈，干擾DNA轉(zhuǎn)錄和復制，從而抑制腫瘤細胞的分裂。核苷酸切除修復(NER)能力與鉑類藥物的耐藥密切相關。ERCCl基因蛋白在NER通路中對于識別和去除Pt－DNA，加合物、修復DNA鏈間交鏈、參與DNA再合成過程至關重要，ERCC1過表達可使停滯在G2/M期的損傷DNA迅速修復，尤其是ERCC1能使順鉑誘導的DNA絡合物的清除增加，導致其對順鉑耐藥。鼻咽癌是我國最常見的惡性腫瘤，中晚期近年來鼻咽癌發(fā)病增加，且有年輕化趨勢，腫瘤進展也加快。據(jù)文獻報道，中晚期鼻咽癌患者5年生存率約為20%左右。況且鼻咽癌細胞對化療藥物在中晚期鼻咽癌患者中敏感性漸差，特別是一線化療藥順鉑的耐藥性尤為明顯，故而嚴重影響抗腫瘤藥物的療效。多數(shù)患者由于耐藥或抗藥性，因出現(xiàn)復發(fā)或轉(zhuǎn)移，最終導致治療失敗。本課題用免疫組織化學技術檢測ERCCl在正常鼻咽組織以及鼻咽癌患者的腫瘤細胞組織中的表達，從組織基因水平上了解癌變的細胞ERCCl表達與臨床一線常用規(guī)藥物－順鉑的化療耐藥的相關性，從而揭示ERCCl與鼻咽癌發(fā)病及其耐藥性的相關性，來指導臨床鼻咽癌病人的個體化治療。其意義在于可以明顯減少鼻咽癌復發(fā)及轉(zhuǎn)移機會，從而明顯提高鼻咽癌患者生存率，減少家庭及社會的負擔，減少醫(yī)療資源的浪費.其將產(chǎn)生良好社會及經(jīng)濟效益，故而值得臨床推廣。

［1］蔡永廣，符愛珍，勞 逸.新輔助化療聯(lián)合放療治療中晚期鼻咽癌療效觀察［J］.現(xiàn)代腫瘤醫(yī)學，2007，15(2)：187.

［2］王鳳明，孫 健，朱 莉，等.放化療綜合治療局部晚期鼻咽癌113例療效觀察［J］.實用癌癥雜志，2007，22(1)：77.［3］梁 穎，高劍銘，胡偉漢，等.誘導化療聯(lián)合同期放化療對局部晚期鼻咽癌的遠期療效［J］.癌癥，2007，26(8)：885.

［4］董 云，李志革.ERCC1、BRCA1在非小細胞肺癌的表達與順鉑耐藥的研究進展［J］.現(xiàn)代腫瘤醫(yī)學，2010，18(5)：1037.

［5］李 霞.切除修復交叉互補基因1的研究進展［J］.臨床和實驗醫(yī)學雜志，2010，9(22)：1747.

［6］曹軼林，芩 洪.核苷酸切除修復與鉑類耐藥研究進展［J］. 現(xiàn)代腫瘤醫(yī)學，2008，(11)：122.

2014－01－10 編校：李曉飛］