枳椇多糖體外抗氧化活性研究

魏丕偉　熊俐　王凌云等

摘要：以維生素C作為陽性對(duì)照，采用羥自由基體系（·OH）、二苯代苦味?；杂苫w系（DPPH·）和超氧陰離子自由基體系（ O-2· ），對(duì)枳椇多糖的體外抗氧化活性進(jìn)行研究。試驗(yàn)結(jié)果顯示：枳椇粗多糖和精制多糖都具有一定的抗氧化活性，在一定濃度范圍內(nèi)，其抗氧化活性與濃度呈線性關(guān)系?？傮w上說，當(dāng)濃度達(dá)到2.50 mg/mL時(shí)，枳椇粗多糖對(duì)羥自由基的清除率高達(dá)68.32%，精制多糖對(duì)羥自由基的清除率高達(dá)81.43%；當(dāng)濃度達(dá)到1.00 mg/mL時(shí)，枳椇粗多糖和精制多糖對(duì)DPPH自由基清除率都較高，可達(dá)80%左右，與維生素C接近；對(duì)超氧陰離子自由基的清除能力較前兩者小，當(dāng)濃度達(dá)到1.00 mg/mL時(shí)，枳椇粗多糖的清除率為48.24%，精制多糖的清除率為14.79%。

關(guān)鍵詞：枳椇；多糖；抗氧化

中圖分類號(hào)： R284.1 文獻(xiàn)標(biāo)志碼： A 文章編號(hào)：1002-1302（2014）07-0316-03

收稿日期：2014-05-20

基金項(xiàng)目：四川理工學(xué)院大學(xué)生創(chuàng)新基金（編號(hào)：cx20120407）。

作者簡(jiǎn)介：魏丕偉（1983—），男，博士，講師，主要從事生物技術(shù)方面的研究。Tel：（0813）5505979；E-mail：weipiwei2004@163.com。

通信作者：王凌云。E-mail： wanglingyun2004@163.com。枳椇（Hovenia acerba Lindl.）俗稱拐棗，是一種遍布我國除東北、新疆、西藏以外大部分省區(qū)的鼠李科落葉喬木。枳椇果柄中含有豐富的多糖類化合物，其活性還未見報(bào)道。隨著番茄紅素抗氧化性的報(bào)道，番茄紅素的保健品備受青睞，具有抗氧化活性的天然化合物的研究成為熱潮?？寡趸缘脑u(píng)價(jià)有化學(xué)方法和生物學(xué)方法?；瘜W(xué)方法可通過自由基的清除來表示，簡(jiǎn)單便捷，準(zhǔn)確率高。自由基是生物體氧化過程中產(chǎn)生的中間代謝產(chǎn)物，當(dāng)其過多時(shí)，會(huì)作用于生物膜磷脂不飽和脂肪酸、膜蛋白、代謝酶，影響細(xì)胞代謝的有序性和自調(diào)節(jié)能力，甚至使DNA分子變得不穩(wěn)定，造成DNA損傷從而引起基因突變等[1]。盡管活的有機(jī)體一定程度上具有清除自由基的能力，但是適當(dāng)補(bǔ)充外源性抗氧化劑仍然是有必要的。事實(shí)上，超氧陰離子自由基（ O-2· ）、二苯代苦味?；杂苫―PPH·）和羥自由基（OH·）等與衰老、癌癥、心腦血管疾病和炎癥的發(fā)生與發(fā)展密切相關(guān)。某些人工合成的抗氧化劑如BHT、BHA及PG等有一定的毒性，會(huì)對(duì)人體呼吸酶的活性造成不利的影響，甚至還有不同程度的致畸、致癌效應(yīng)，這也引起了人們對(duì)人工化學(xué)合成抗氧化劑的擔(dān)憂[2]。鑒于此，天然抗氧化劑的開發(fā)和使用，正成為現(xiàn)代食品工業(yè)發(fā)展所關(guān)注的焦點(diǎn)之一，具有廣闊的應(yīng)用前景。本試驗(yàn)對(duì)枳椇多糖的抗氧化活性進(jìn)行測(cè)定，以期為枳椇的深入開發(fā)利用提供參考。

1材料與方法

1.1試驗(yàn)原料

枳椇購自安國藥材市場(chǎng)，產(chǎn)地湖北。去除種子，取其果梗，蒸餾水清洗，置于烘箱55 ℃烘干，粉碎，過60目篩，粉末備用。

1.2試劑

二苯代苦味酰基自由基（DPPH·），Sigma公司；鄰二氮菲，上海中秦化學(xué)試劑有限公司；維生素C，天津市恒興化學(xué)試劑制造有限公司；Tris（別名三羥甲基氨基甲烷、緩血酸胺），成都化學(xué)試劑廠；透析袋，成都奧克生物技術(shù)有限公司；甲醇、無水乙醇、鹽酸、鄰苯三酚、氯仿、正丁醇、過氧化氫、七水合硫酸亞鐵、磷酸氫二鈉、磷酸二氫鈉、葡萄糖、蒽酮等均為國產(chǎn)分析純。

1.3主要儀器設(shè)備

UV1000紫外可見分光光度計(jì)，上海天美科學(xué)儀器有限公司；Alpha1-2 LD plus冷凍干燥機(jī)，德國CHRIST；JD100-4G電子天平，沈陽龍騰電子有限公司； RE-52A旋轉(zhuǎn)蒸發(fā)器，上海紅葉儀器設(shè)備公司；SHB-III循環(huán)水式真空泵，鞏義市宇翔儀器有限公司；TDL-5C低速臺(tái)式大容量離心機(jī)，上海安亭科學(xué)儀器廠；粉碎機(jī)、電熱鼓風(fēng)干燥箱、恒溫水浴鍋等。

1.4試驗(yàn)方法

1.4.1枳椇粗多糖及精制多糖的制備由四川理工學(xué)院食品質(zhì)量與安全實(shí)驗(yàn)室制備，方法參照文獻(xiàn)[3]。

1.4.2枳椇多糖對(duì)羥自由基的清除試驗(yàn)枳椇多糖對(duì)羥自由基的清除是通過Fenton反應(yīng)模型實(shí)現(xiàn)的，F(xiàn)e2+與 鄰二氮菲在 pH值2～9 的范圍內(nèi)可形成穩(wěn)定的橙紅色絡(luò)合物，其最大吸收波長(zhǎng)為510 nm[4]。Fenton體系中產(chǎn)生的羥自由基，可使Fe2+氧化為Fe3+，從而使在510 nm處的最大吸收峰消失，據(jù)此可推知系統(tǒng)中羥自由基的量的變化。當(dāng)加入抗氧化劑時(shí)，枳椇多糖能清除溶液中游離的·OH，因而可以通過測(cè)量吸光度間接計(jì)算出樣品對(duì)·OH 的清除率。精確稱取一定量的枳椇粗多糖、枳椇精制多糖和維生素C，均配制成0.50、1.00、150、2.00、2.50 mg/mL等5個(gè)濃度的待測(cè)液。試驗(yàn)分成5個(gè)平行組：調(diào)空白、空白組、對(duì)照組、樣品組、本底組。取 0.75 mmol/L 鄰二氮菲溶液1.0 mL于試管中，加入 0.2 mol/L 磷酸鹽緩沖液（PBS，pH值7.4）2.0 mL和蒸餾水10 mL，充分混勻后，依次加入1.0 mL新配制的0.75 mmol/L硫酸亞鐵溶液，混勻，加入1.0 mL新配制的0.01%雙氧水（H2O2），37 ℃下溫浴60 min后，在510 nm處測(cè)吸光度，所測(cè)得的數(shù)據(jù)為損傷管的吸光度D損傷；未損傷管以1.0 mL蒸餾水代替損傷管中1.0 mL 0.01%雙氧水（H2O2），操作方法同損傷管，可測(cè)得510 nm未損傷管的吸光度D未損；樣品管以1.0 mL樣品代替損傷管中的1.0 mL 蒸餾水，操作方法同損傷管，可測(cè)得510 nm樣品管的吸光度D樣 ；將樣品組中除樣品不變，其余以對(duì)應(yīng)體積蒸餾水代替，可測(cè)得510 nm樣品管的吸光度D本底（詳細(xì)加樣量如表1）。記錄數(shù)據(jù)，分別計(jì)算枳椇粗多糖、枳椇精制多糖和維生素C對(duì)羥自由基的清除率。清除率（P）的計(jì)算公式為：P=（D樣-D本底-D損傷）/（D未損-D損傷）×100%。式中的吸光度D詳見表1。endprint

2結(jié)果與分析

2.1枳椇多糖對(duì)羥自由基的清除作用

羥自由基毒性強(qiáng)、危害大，往往很難消除[7]。它的清除率是反映樣品抗氧化活性的重要指標(biāo)。枳椇粗多糖、枳椇精制多糖和維生素C 3種樣品溶液清除羥自由基的效果如圖1所示。由圖1可以看出，在試驗(yàn)濃度范圍0.50～2.50 mg/mL，清除率與樣品濃度有良好的線性關(guān)系。三者清除羥自由基的能力大小是維生素C>枳椇精制多糖>枳椇粗多糖。在濃度為0.50 mg/mL時(shí)，枳椇粗多糖對(duì)羥自由基的清除率為1089%，枳椇精制多糖對(duì)羥自由基的清除率為38.44%；隨著樣品濃度逐漸增大，枳椇粗多糖、枳椇精制多糖、維生素C清除羥自由基的能力都是逐漸增大，當(dāng)濃度達(dá)到2.50 mg/mL時(shí)，枳椇粗多糖對(duì)羥自由基的清除率高達(dá)68.32%，枳椇精制多糖對(duì)羥自由基的清除率高達(dá)81.43%?？梢婅讞憾嗵怯忻黠@的清除羥自由基的作用。

2.2枳椇多糖對(duì)DPPH自由基清除作用

二苯代苦味酰基自由基（DPPH·）是一種很穩(wěn)定的以氮為中心的自由基，其結(jié)構(gòu)中含有3個(gè)苯環(huán)，1個(gè)氮原子上有1個(gè)孤對(duì)電子，在517 nm有強(qiáng)吸收，其甲醇溶液呈紫色，當(dāng)在其甲醇溶液中加入自由基清除劑時(shí)，DPPH·的單電子被配對(duì)，溶液的顏色會(huì)變淺，517 nm處的吸光度變小，而且顏色變淺的程度可以反映清除效果的大小[8]。枳椇粗多糖、枳椇精制多糖和維生素C 3種樣品溶液清除DPPH自由基的效果比較見圖2。由圖2可以看出，在試驗(yàn)濃度范圍0.20～1.00 mg/mL，隨著樣品濃度逐漸增大，枳椇粗多糖和維生素C對(duì)DPPH自由基的清除率逐漸升高，而枳椇精制多糖對(duì)DPPH自由基的清除率變化不大，略有升高。當(dāng)濃度為 0.20 mg/mL 時(shí)，枳椇粗多糖的清除率為43.58%，枳椇精制多糖的清除率達(dá)到67.57%，甚至高于維生素C的清除率（6081%），這說明在較小濃度范圍內(nèi)枳椇多糖就具有清除DPPH自由基的能力。當(dāng)濃度為1.00 mg/mL時(shí)枳椇粗多糖、枳椇精制多糖與維生素C的清除能力相當(dāng)，達(dá)到了80%左右。

2.3枳椇多糖對(duì)超氧陰離子自由基的清除作用

超氧陰離子性質(zhì)活潑，具有很強(qiáng)的氧化性和還原性，過量生成可致組織損傷，在體內(nèi)主要通過超氧歧化酶清除[9]。本試驗(yàn)以鄰苯三酚自氧化反應(yīng)產(chǎn)生超氧陰離子自由基為模型。鄰苯三酚在堿性條件下自氧化產(chǎn)生超氧陰離子自由基，超氧陰離子在體系中不斷增加，生成有顏色的中間代謝產(chǎn)物，加入清除劑，可清除超氧陰離子自由基，阻止產(chǎn)物積累，使325 nm下的吸光度變小。故將枳椇多糖樣品溶液及陽性對(duì)照物維生素C作為抑制劑加入到超氧陰離子自由基發(fā)生體系中，測(cè)定其吸光度的變化來判斷樣品對(duì)超氧陰離子自由基的清除效果。

枳椇粗多糖、枳椇精制多糖和維生素C 3種樣品溶液對(duì)超氧陰離子自由基的清除效果比較見圖3。由圖3可以看出，在試驗(yàn)濃度范圍0.20～1.00 mg/mL，隨著樣品濃度逐漸增大，維生素C的清除率穩(wěn)定，均高于90%，枳椇粗多糖的清除率略有上升，維持在30%～50%之間，枳椇精制多糖的清除率隨濃度上升，但均低于15%。當(dāng)濃度達(dá)到1.00 mg/mL時(shí)，枳椇粗多糖的清除率為48.24%，枳椇精制多糖的清除率僅為14.79%?？梢娫趯?duì)超氧陰離子自由基清除效果方面，枳椇粗多糖要優(yōu)于枳椇精制多糖，而維生素C又明顯高于二者，說明枳椇多糖對(duì)超氧陰離子自由基有一定的清除作用。

3結(jié)論

本試驗(yàn)通過羥自由基體系（·OH）、二苯代苦味?；杂苫w系（DPPH·）和超氧陰離子自由基體系（ O-2· ），對(duì)枳椇多糖的體外抗氧化活性進(jìn)行研究，以維生素C作為陽性對(duì)照，比較枳椇粗多糖、枳椇精制多糖對(duì)3種自由基的清除效果。研究表明，對(duì)Fenton體系產(chǎn)生的羥自由基，枳椇精制多糖有較好清除作用，清除能力大小為：維生素C>枳椇精制多糖>枳椇粗多糖。在濃度為0.50 mg/mL時(shí)，枳椇粗多糖對(duì)羥自由基的清除率為10.89%，枳椇精制多糖對(duì)羥自由基的清除率為38.44%；當(dāng)濃度達(dá)到2.50 mg/mL時(shí)，枳椇粗多糖對(duì)羥自由基的清除率高達(dá)68.32%，枳椇精制多糖對(duì)羥自由基的清除率高達(dá)81.43%。在DPPH自由基體系中，枳椇多糖在較低濃度就表現(xiàn)出對(duì)DPPH自由基很高的清除能力，在濃度為1.00 mg/mL時(shí)枳椇粗多糖、枳椇精制多糖和維生素C的清除能力接近，高達(dá)80%左右。枳椇多糖對(duì)超氧陰離子有一定清除作用，但清除效果不明顯，枳椇粗多糖的清除率在30%～50%之間，枳椇精制多糖的清除率隨濃度略有上升，但低于15%；清除作用大小為：維生素C>枳椇粗多糖>枳椇精制多糖。枳椇粗多糖與枳椇精制多糖比較，對(duì)羥自由基體系、DPPH自由基的清除效果，是枳椇精制多糖優(yōu)于枳椇粗多糖，但對(duì)超氧陰離子自由基的清除效果是枳椇粗多糖優(yōu)于枳椇精制多糖，可能是枳椇粗多糖中未除凈的色素等雜質(zhì)也起到了一定的清除超氧陰離子自由基的作用，使得枳椇粗多糖的清除率大于枳椇精制多糖?？梢姡⒉皇菢悠返募兌仍礁?，清除自由基的效果越好。總之，枳椇粗多糖、枳椇精制多糖對(duì)羥自由基、DPPH自由基和超氧陰離子自由基都有不同程度的清除作用，可以開發(fā)成枳椇多糖抗氧化作用的功能性食品。

參考文獻(xiàn)：

[1]方允中，李文杰. 自由基與酶[M]. 北京：科學(xué)出版社，1989：244.

[2]閻果蘭，靳利娥. 食品中抗氧化劑的發(fā)展趨勢(shì)[J]. 山西食品工業(yè)，2005（3）：20-22.

[3]魏丕偉，王凌云，熊俐，等. 枳椇多糖提取工藝研究[J]. 江蘇農(nóng)業(yè)科學(xué)，2012，40（8）：272-274.

[4]凌關(guān)庭. 抗氧化食品與健康[M]. 北京：化學(xué)工業(yè)出版社，2005：340.

[5]索有瑞，王洪倫，汪漢卿. 柴達(dá)木盆地唐古特白刺果實(shí)降血脂和抗氧化作用研究[J]. 天然產(chǎn)物研究與開發(fā)，2004，16（1）：54-58.

[6]施建敏，俞志雄，龐會(huì)忠，等.華木蓮葉黃酮類化合物抗氧化作用[J]. 江西農(nóng)業(yè)大學(xué)學(xué)報(bào)，2006，28（5）：693-697.

[7]梁引庫，吳三橋，李新生. 硫酸酯化黃精多糖抗氧化活性研究[J]. 江蘇農(nóng)業(yè)科學(xué)，2013，41（2）：254-256.

[8]朱利娜，強(qiáng)偉，史俊友，等. 唐古特白刺果粉的抗氧化作用研究[J]. 中國野生植物資源，2010，29（2）：41-43， 47.

[9]索有瑞. 柴達(dá)木盆地白刺研究與開發(fā)[M]. 北京：科學(xué)出版社，2010：323-330.endprint

2結(jié)果與分析

2.1枳椇多糖對(duì)羥自由基的清除作用

羥自由基毒性強(qiáng)、危害大，往往很難消除[7]。它的清除率是反映樣品抗氧化活性的重要指標(biāo)。枳椇粗多糖、枳椇精制多糖和維生素C 3種樣品溶液清除羥自由基的效果如圖1所示。由圖1可以看出，在試驗(yàn)濃度范圍0.50～2.50 mg/mL，清除率與樣品濃度有良好的線性關(guān)系。三者清除羥自由基的能力大小是維生素C>枳椇精制多糖>枳椇粗多糖。在濃度為0.50 mg/mL時(shí)，枳椇粗多糖對(duì)羥自由基的清除率為1089%，枳椇精制多糖對(duì)羥自由基的清除率為38.44%；隨著樣品濃度逐漸增大，枳椇粗多糖、枳椇精制多糖、維生素C清除羥自由基的能力都是逐漸增大，當(dāng)濃度達(dá)到2.50 mg/mL時(shí)，枳椇粗多糖對(duì)羥自由基的清除率高達(dá)68.32%，枳椇精制多糖對(duì)羥自由基的清除率高達(dá)81.43%?？梢婅讞憾嗵怯忻黠@的清除羥自由基的作用。

2.2枳椇多糖對(duì)DPPH自由基清除作用

二苯代苦味?；杂苫―PPH·）是一種很穩(wěn)定的以氮為中心的自由基，其結(jié)構(gòu)中含有3個(gè)苯環(huán)，1個(gè)氮原子上有1個(gè)孤對(duì)電子，在517 nm有強(qiáng)吸收，其甲醇溶液呈紫色，當(dāng)在其甲醇溶液中加入自由基清除劑時(shí)，DPPH·的單電子被配對(duì)，溶液的顏色會(huì)變淺，517 nm處的吸光度變小，而且顏色變淺的程度可以反映清除效果的大小[8]。枳椇粗多糖、枳椇精制多糖和維生素C 3種樣品溶液清除DPPH自由基的效果比較見圖2。由圖2可以看出，在試驗(yàn)濃度范圍0.20～1.00 mg/mL，隨著樣品濃度逐漸增大，枳椇粗多糖和維生素C對(duì)DPPH自由基的清除率逐漸升高，而枳椇精制多糖對(duì)DPPH自由基的清除率變化不大，略有升高。當(dāng)濃度為 0.20 mg/mL 時(shí)，枳椇粗多糖的清除率為43.58%，枳椇精制多糖的清除率達(dá)到67.57%，甚至高于維生素C的清除率（6081%），這說明在較小濃度范圍內(nèi)枳椇多糖就具有清除DPPH自由基的能力。當(dāng)濃度為1.00 mg/mL時(shí)枳椇粗多糖、枳椇精制多糖與維生素C的清除能力相當(dāng)，達(dá)到了80%左右。

2.3枳椇多糖對(duì)超氧陰離子自由基的清除作用

超氧陰離子性質(zhì)活潑，具有很強(qiáng)的氧化性和還原性，過量生成可致組織損傷，在體內(nèi)主要通過超氧歧化酶清除[9]。本試驗(yàn)以鄰苯三酚自氧化反應(yīng)產(chǎn)生超氧陰離子自由基為模型。鄰苯三酚在堿性條件下自氧化產(chǎn)生超氧陰離子自由基，超氧陰離子在體系中不斷增加，生成有顏色的中間代謝產(chǎn)物，加入清除劑，可清除超氧陰離子自由基，阻止產(chǎn)物積累，使325 nm下的吸光度變小。故將枳椇多糖樣品溶液及陽性對(duì)照物維生素C作為抑制劑加入到超氧陰離子自由基發(fā)生體系中，測(cè)定其吸光度的變化來判斷樣品對(duì)超氧陰離子自由基的清除效果。

枳椇粗多糖、枳椇精制多糖和維生素C 3種樣品溶液對(duì)超氧陰離子自由基的清除效果比較見圖3。由圖3可以看出，在試驗(yàn)濃度范圍0.20～1.00 mg/mL，隨著樣品濃度逐漸增大，維生素C的清除率穩(wěn)定，均高于90%，枳椇粗多糖的清除率略有上升，維持在30%～50%之間，枳椇精制多糖的清除率隨濃度上升，但均低于15%。當(dāng)濃度達(dá)到1.00 mg/mL時(shí)，枳椇粗多糖的清除率為48.24%，枳椇精制多糖的清除率僅為14.79%?？梢娫趯?duì)超氧陰離子自由基清除效果方面，枳椇粗多糖要優(yōu)于枳椇精制多糖，而維生素C又明顯高于二者，說明枳椇多糖對(duì)超氧陰離子自由基有一定的清除作用。

3結(jié)論

本試驗(yàn)通過羥自由基體系（·OH）、二苯代苦味?；杂苫w系（DPPH·）和超氧陰離子自由基體系（ O-2· ），對(duì)枳椇多糖的體外抗氧化活性進(jìn)行研究，以維生素C作為陽性對(duì)照，比較枳椇粗多糖、枳椇精制多糖對(duì)3種自由基的清除效果。研究表明，對(duì)Fenton體系產(chǎn)生的羥自由基，枳椇精制多糖有較好清除作用，清除能力大小為：維生素C>枳椇精制多糖>枳椇粗多糖。在濃度為0.50 mg/mL時(shí)，枳椇粗多糖對(duì)羥自由基的清除率為10.89%，枳椇精制多糖對(duì)羥自由基的清除率為38.44%；當(dāng)濃度達(dá)到2.50 mg/mL時(shí)，枳椇粗多糖對(duì)羥自由基的清除率高達(dá)68.32%，枳椇精制多糖對(duì)羥自由基的清除率高達(dá)81.43%。在DPPH自由基體系中，枳椇多糖在較低濃度就表現(xiàn)出對(duì)DPPH自由基很高的清除能力，在濃度為1.00 mg/mL時(shí)枳椇粗多糖、枳椇精制多糖和維生素C的清除能力接近，高達(dá)80%左右。枳椇多糖對(duì)超氧陰離子有一定清除作用，但清除效果不明顯，枳椇粗多糖的清除率在30%～50%之間，枳椇精制多糖的清除率隨濃度略有上升，但低于15%；清除作用大小為：維生素C>枳椇粗多糖>枳椇精制多糖。枳椇粗多糖與枳椇精制多糖比較，對(duì)羥自由基體系、DPPH自由基的清除效果，是枳椇精制多糖優(yōu)于枳椇粗多糖，但對(duì)超氧陰離子自由基的清除效果是枳椇粗多糖優(yōu)于枳椇精制多糖，可能是枳椇粗多糖中未除凈的色素等雜質(zhì)也起到了一定的清除超氧陰離子自由基的作用，使得枳椇粗多糖的清除率大于枳椇精制多糖?？梢?，并不是樣品的純度越高，清除自由基的效果越好?？傊讞捍侄嗵?、枳椇精制多糖對(duì)羥自由基、DPPH自由基和超氧陰離子自由基都有不同程度的清除作用，可以開發(fā)成枳椇多糖抗氧化作用的功能性食品。

參考文獻(xiàn)：

[1]方允中，李文杰. 自由基與酶[M]. 北京：科學(xué)出版社，1989：244.

[2]閻果蘭，靳利娥. 食品中抗氧化劑的發(fā)展趨勢(shì)[J]. 山西食品工業(yè)，2005（3）：20-22.

[3]魏丕偉，王凌云，熊俐，等. 枳椇多糖提取工藝研究[J]. 江蘇農(nóng)業(yè)科學(xué)，2012，40（8）：272-274.

[4]凌關(guān)庭. 抗氧化食品與健康[M]. 北京：化學(xué)工業(yè)出版社，2005：340.

[5]索有瑞，王洪倫，汪漢卿. 柴達(dá)木盆地唐古特白刺果實(shí)降血脂和抗氧化作用研究[J]. 天然產(chǎn)物研究與開發(fā)，2004，16（1）：54-58.

[6]施建敏，俞志雄，龐會(huì)忠，等.華木蓮葉黃酮類化合物抗氧化作用[J]. 江西農(nóng)業(yè)大學(xué)學(xué)報(bào)，2006，28（5）：693-697.

[7]梁引庫，吳三橋，李新生. 硫酸酯化黃精多糖抗氧化活性研究[J]. 江蘇農(nóng)業(yè)科學(xué)，2013，41（2）：254-256.

[8]朱利娜，強(qiáng)偉，史俊友，等. 唐古特白刺果粉的抗氧化作用研究[J]. 中國野生植物資源，2010，29（2）：41-43， 47.

[9]索有瑞. 柴達(dá)木盆地白刺研究與開發(fā)[M]. 北京：科學(xué)出版社，2010：323-330.endprint

2結(jié)果與分析

2.1枳椇多糖對(duì)羥自由基的清除作用

羥自由基毒性強(qiáng)、危害大，往往很難消除[7]。它的清除率是反映樣品抗氧化活性的重要指標(biāo)。枳椇粗多糖、枳椇精制多糖和維生素C 3種樣品溶液清除羥自由基的效果如圖1所示。由圖1可以看出，在試驗(yàn)濃度范圍0.50～2.50 mg/mL，清除率與樣品濃度有良好的線性關(guān)系。三者清除羥自由基的能力大小是維生素C>枳椇精制多糖>枳椇粗多糖。在濃度為0.50 mg/mL時(shí)，枳椇粗多糖對(duì)羥自由基的清除率為1089%，枳椇精制多糖對(duì)羥自由基的清除率為38.44%；隨著樣品濃度逐漸增大，枳椇粗多糖、枳椇精制多糖、維生素C清除羥自由基的能力都是逐漸增大，當(dāng)濃度達(dá)到2.50 mg/mL時(shí)，枳椇粗多糖對(duì)羥自由基的清除率高達(dá)68.32%，枳椇精制多糖對(duì)羥自由基的清除率高達(dá)81.43%?？梢婅讞憾嗵怯忻黠@的清除羥自由基的作用。

2.2枳椇多糖對(duì)DPPH自由基清除作用

二苯代苦味?；杂苫―PPH·）是一種很穩(wěn)定的以氮為中心的自由基，其結(jié)構(gòu)中含有3個(gè)苯環(huán)，1個(gè)氮原子上有1個(gè)孤對(duì)電子，在517 nm有強(qiáng)吸收，其甲醇溶液呈紫色，當(dāng)在其甲醇溶液中加入自由基清除劑時(shí)，DPPH·的單電子被配對(duì)，溶液的顏色會(huì)變淺，517 nm處的吸光度變小，而且顏色變淺的程度可以反映清除效果的大小[8]。枳椇粗多糖、枳椇精制多糖和維生素C 3種樣品溶液清除DPPH自由基的效果比較見圖2。由圖2可以看出，在試驗(yàn)濃度范圍0.20～1.00 mg/mL，隨著樣品濃度逐漸增大，枳椇粗多糖和維生素C對(duì)DPPH自由基的清除率逐漸升高，而枳椇精制多糖對(duì)DPPH自由基的清除率變化不大，略有升高。當(dāng)濃度為 0.20 mg/mL 時(shí)，枳椇粗多糖的清除率為43.58%，枳椇精制多糖的清除率達(dá)到67.57%，甚至高于維生素C的清除率（6081%），這說明在較小濃度范圍內(nèi)枳椇多糖就具有清除DPPH自由基的能力。當(dāng)濃度為1.00 mg/mL時(shí)枳椇粗多糖、枳椇精制多糖與維生素C的清除能力相當(dāng)，達(dá)到了80%左右。

2.3枳椇多糖對(duì)超氧陰離子自由基的清除作用

超氧陰離子性質(zhì)活潑，具有很強(qiáng)的氧化性和還原性，過量生成可致組織損傷，在體內(nèi)主要通過超氧歧化酶清除[9]。本試驗(yàn)以鄰苯三酚自氧化反應(yīng)產(chǎn)生超氧陰離子自由基為模型。鄰苯三酚在堿性條件下自氧化產(chǎn)生超氧陰離子自由基，超氧陰離子在體系中不斷增加，生成有顏色的中間代謝產(chǎn)物，加入清除劑，可清除超氧陰離子自由基，阻止產(chǎn)物積累，使325 nm下的吸光度變小。故將枳椇多糖樣品溶液及陽性對(duì)照物維生素C作為抑制劑加入到超氧陰離子自由基發(fā)生體系中，測(cè)定其吸光度的變化來判斷樣品對(duì)超氧陰離子自由基的清除效果。

枳椇粗多糖、枳椇精制多糖和維生素C 3種樣品溶液對(duì)超氧陰離子自由基的清除效果比較見圖3。由圖3可以看出，在試驗(yàn)濃度范圍0.20～1.00 mg/mL，隨著樣品濃度逐漸增大，維生素C的清除率穩(wěn)定，均高于90%，枳椇粗多糖的清除率略有上升，維持在30%～50%之間，枳椇精制多糖的清除率隨濃度上升，但均低于15%。當(dāng)濃度達(dá)到1.00 mg/mL時(shí)，枳椇粗多糖的清除率為48.24%，枳椇精制多糖的清除率僅為14.79%。可見在對(duì)超氧陰離子自由基清除效果方面，枳椇粗多糖要優(yōu)于枳椇精制多糖，而維生素C又明顯高于二者，說明枳椇多糖對(duì)超氧陰離子自由基有一定的清除作用。

3結(jié)論

本試驗(yàn)通過羥自由基體系（·OH）、二苯代苦味?；杂苫w系（DPPH·）和超氧陰離子自由基體系（ O-2· ），對(duì)枳椇多糖的體外抗氧化活性進(jìn)行研究，以維生素C作為陽性對(duì)照，比較枳椇粗多糖、枳椇精制多糖對(duì)3種自由基的清除效果。研究表明，對(duì)Fenton體系產(chǎn)生的羥自由基，枳椇精制多糖有較好清除作用，清除能力大小為：維生素C>枳椇精制多糖>枳椇粗多糖。在濃度為0.50 mg/mL時(shí)，枳椇粗多糖對(duì)羥自由基的清除率為10.89%，枳椇精制多糖對(duì)羥自由基的清除率為38.44%；當(dāng)濃度達(dá)到2.50 mg/mL時(shí)，枳椇粗多糖對(duì)羥自由基的清除率高達(dá)68.32%，枳椇精制多糖對(duì)羥自由基的清除率高達(dá)81.43%。在DPPH自由基體系中，枳椇多糖在較低濃度就表現(xiàn)出對(duì)DPPH自由基很高的清除能力，在濃度為1.00 mg/mL時(shí)枳椇粗多糖、枳椇精制多糖和維生素C的清除能力接近，高達(dá)80%左右。枳椇多糖對(duì)超氧陰離子有一定清除作用，但清除效果不明顯，枳椇粗多糖的清除率在30%～50%之間，枳椇精制多糖的清除率隨濃度略有上升，但低于15%；清除作用大小為：維生素C>枳椇粗多糖>枳椇精制多糖。枳椇粗多糖與枳椇精制多糖比較，對(duì)羥自由基體系、DPPH自由基的清除效果，是枳椇精制多糖優(yōu)于枳椇粗多糖，但對(duì)超氧陰離子自由基的清除效果是枳椇粗多糖優(yōu)于枳椇精制多糖，可能是枳椇粗多糖中未除凈的色素等雜質(zhì)也起到了一定的清除超氧陰離子自由基的作用，使得枳椇粗多糖的清除率大于枳椇精制多糖?？梢?，并不是樣品的純度越高，清除自由基的效果越好?？傊讞捍侄嗵?、枳椇精制多糖對(duì)羥自由基、DPPH自由基和超氧陰離子自由基都有不同程度的清除作用，可以開發(fā)成枳椇多糖抗氧化作用的功能性食品。

參考文獻(xiàn)：

[1]方允中，李文杰. 自由基與酶[M]. 北京：科學(xué)出版社，1989：244.

[2]閻果蘭，靳利娥. 食品中抗氧化劑的發(fā)展趨勢(shì)[J]. 山西食品工業(yè)，2005（3）：20-22.

[3]魏丕偉，王凌云，熊俐，等. 枳椇多糖提取工藝研究[J]. 江蘇農(nóng)業(yè)科學(xué)，2012，40（8）：272-274.

[4]凌關(guān)庭. 抗氧化食品與健康[M]. 北京：化學(xué)工業(yè)出版社，2005：340.

[5]索有瑞，王洪倫，汪漢卿. 柴達(dá)木盆地唐古特白刺果實(shí)降血脂和抗氧化作用研究[J]. 天然產(chǎn)物研究與開發(fā)，2004，16（1）：54-58.

[6]施建敏，俞志雄，龐會(huì)忠，等.華木蓮葉黃酮類化合物抗氧化作用[J]. 江西農(nóng)業(yè)大學(xué)學(xué)報(bào)，2006，28（5）：693-697.

[7]梁引庫，吳三橋，李新生. 硫酸酯化黃精多糖抗氧化活性研究[J]. 江蘇農(nóng)業(yè)科學(xué)，2013，41（2）：254-256.

[8]朱利娜，強(qiáng)偉，史俊友，等. 唐古特白刺果粉的抗氧化作用研究[J]. 中國野生植物資源，2010，29（2）：41-43， 47.

[9]索有瑞. 柴達(dá)木盆地白刺研究與開發(fā)[M]. 北京：科學(xué)出版社，2010：323-330.endprint