于濱　左增艷　孔維佳

[摘要] 目的 觀察天麻細(xì)粉片在實(shí)驗(yàn)動物中的毒性和安全性。 方法 急性毒性試驗(yàn)采用昆明種小鼠和SD大鼠各20只，雌雄各半，天麻細(xì)粉片劑量為15.0 g/kg體重，觀察14 d，記錄中毒表現(xiàn)。Ames試驗(yàn)采用了菌株TA97、TA98、TA100和TA102，在加S9與不加S9的條件下加入天麻細(xì)粉片，劑量分別為8、40、200、1000、5000 μg/皿。小鼠骨髓細(xì)胞微核試驗(yàn)和精子畸變試驗(yàn)均采用昆明種小鼠，天麻細(xì)粉片劑量為1.25、2.50、5.00 g/kg體重，用環(huán)磷酰胺40 mg/kg體重為陽性對照。30 d喂養(yǎng)試驗(yàn)采用SD大鼠，雌、雄各40只，天麻細(xì)粉片劑量為2.81、5.62、11.25 g/kg體重，連續(xù)給予30 d，觀察動物一般狀況和體重，測定血液學(xué)及血液生化學(xué)指標(biāo)、臟器系數(shù)，并進(jìn)行組織病理學(xué)檢查。 結(jié)果 急性毒性試驗(yàn)結(jié)果顯示天麻細(xì)粉片在小鼠和大鼠中的最大耐受劑量（MTD）均>15.0 g/kg體重，屬無毒級。天麻細(xì)粉片的Ames試驗(yàn)、小鼠骨髓細(xì)胞微核試驗(yàn)和精子畸變試驗(yàn)結(jié)果均為陰性。30 d喂養(yǎng)試驗(yàn)顯示動物一般狀況良好，各劑量天麻細(xì)粉片對動物的體重、進(jìn)食量、食物利用率以及臟器重量和臟器系數(shù)均無明顯影響，對動物的血常規(guī)和血清生化指標(biāo)也無明顯影響。病理檢查顯示高劑量天麻細(xì)粉片對動物的肝、腎、胃腸、脾、卵巢（睪丸）等組織無明顯毒性。 結(jié)論 本實(shí)驗(yàn)條件下天麻細(xì)粉片未見明顯毒性或致畸和致突變作用。

[關(guān)鍵詞] 天麻細(xì)粉片；毒性；安全性

[中圖分類號] R282.71 [文獻(xiàn)標(biāo)識碼] A [文章編號] 1674-4721（2014）07（c）-0006-05

天麻（Gastrodia elata）為蘭科植物，《中國藥典》記載，天麻味甘，性微濕，入肝經(jīng)，具有平肝熄風(fēng)，祛風(fēng)定驚的功效。天麻中含有多種成分，如天麻素（gastrodin）、香莢蘭醛（vanilline）、香莢蘭醇（vanillyl alcohol）、維生素A類、對羥基苯甲醛（P-hydroxybenzaldehyde）、對羥基苯甲醇（P-hydroxybenzyl alcohol）、琥珀酸（succinic acid）、胡蘿卜苷、谷甾醇、枸櫞酸、抗真菌蛋白和許多微量元素如鐵、氟、錳、鋅、碘等[1-2]。有研究表明，天麻粉及天麻細(xì)粉制成的片劑具有降血脂、降膽固醇、降低密度脂蛋白、降血糖等作用[3-6]。有報(bào)道表明，天麻粉在脂肪乳劑灌胃的大鼠中具有顯著的降血脂、減少肝臟脂肪蓄積、減輕肝臟脂肪變性及改善肝功能的作用[6]。但天麻細(xì)粉片劑型的毒理學(xué)實(shí)驗(yàn)研究未見報(bào)道，本文針對天麻細(xì)粉片進(jìn)行毒性及安全性評價(jià)的實(shí)驗(yàn)研究。

1 材料與方法[7]

1.1 樣品

天麻細(xì)粉片由北京永康格林科技有限公司提供，批號090720，0.75 g/片[5]。

1.2 急性毒性試驗(yàn)

昆明種小鼠（合格證號：0157223，體重18～22 g）和SD大鼠（合格證號：0157222，體重180～220 g）均由北京維通利華實(shí)驗(yàn)動物技術(shù)有限公司提供，雌雄各10只，SPF級。實(shí)驗(yàn)動物房許可證號：SYXK（豫）2007-0008，屏障環(huán)境。實(shí)驗(yàn)方法為最大耐受劑量（MTD）法，天麻細(xì)粉片劑量為15.0 g/kg體重。具體試驗(yàn)方法參考文獻(xiàn)報(bào)道[8]。觀察周期為14 d，期間記錄各組動物的中毒表現(xiàn)或死亡時(shí)間。

1.3 Ames試驗(yàn)

菌株TA97、TA98、TA100和TA102由天津市疾控中心提供，S9活化系統(tǒng)由河南省疾病預(yù)防控制中心毒理室制備，具體試驗(yàn)方法均參考文獻(xiàn)報(bào)道[8]。劑量選擇：天麻細(xì)粉片分為5個(gè)劑量組，分別為8、40、200、1000、5000 μg/皿。陽性對照分別為3-硝基9-芴酮、甲基甲烷磺酸酯、2-氨基芴或1，8-二羥基蒽醌[8]，均購自Sigma-Aldrich公司。本試驗(yàn)在加S9與不加S9的條件下均各重復(fù)2次，每次3個(gè)平行板。

1.4 骨髓細(xì)胞微核試驗(yàn)

采用昆明種小鼠（合格證號：0157223，體重25～30 g），由北京維通利華實(shí)驗(yàn)動物技術(shù)有限公司提供，SPF級，雌雄各25只。具體試驗(yàn)方法參考文獻(xiàn)報(bào)道[8]，小鼠分為5個(gè)組，即溶劑對照組、天麻細(xì)粉片3個(gè)劑量組（分別為1.25、2.50、5.00 g/kg體重）和陽性對照組（環(huán)磷酰胺40 mg/kg體重，由南通精華制藥有限公司提供，批號H32020796）。

1.5 小鼠精子畸變試驗(yàn)

采用昆明種小鼠（合格證號：0157223，體重25～35 g），由北京維通利華實(shí)驗(yàn)動物技術(shù)有限公司提供，雄性38只，SPF級。具體試驗(yàn)方法參考文獻(xiàn)報(bào)道[8]。天麻細(xì)粉片和環(huán)磷酰胺（由南通精華制藥有限公司提供，批號H32020796）劑量同骨髓細(xì)胞微核試驗(yàn)。

1.6 30 d喂養(yǎng)試驗(yàn)

1.6.1 動物 采用SD大鼠（合格證號：0157222），由北京維通利華實(shí)驗(yàn)動物技術(shù)有限公司提供，SPF級，雌、雄各40只，分別按體重隨機(jī)分為4組，每組10只。

1.6.2 劑量 天麻細(xì)粉片分低、中、高3個(gè)劑量組，分別為人體推薦量[5]的25、50、100倍，即2.81、5.62、11.25 g/kg體重。受試物采用摻入飼料法給予，用去除輔料乳糖、預(yù)膠化淀粉、硬脂酸鎂的樣品作為受試物（相當(dāng)于去除50%輔料）。分別稱取受試物98.44、196.88、393.75 g，酪蛋白（北京維通利華實(shí)驗(yàn)動物技術(shù)有限公司提供）19.69、39.38、78.75 g加粉飼料至7 kg混勻即成低、中、高3種不同樣品含量的飼料，連續(xù)給予30 d。

1.6.3 觀察指標(biāo) 分別觀察動物的一般狀況、生長發(fā)育指標(biāo)、血液學(xué)及血液生化學(xué)檢查、臟器系數(shù)，并進(jìn)行病理組織學(xué)檢查，具體試驗(yàn)方法均參考文獻(xiàn)報(bào)道[8]。

1.7 統(tǒng)計(jì)學(xué)分析

采用SPSS 11.0統(tǒng)計(jì)軟件進(jìn)行數(shù)據(jù)分析，計(jì)量資料采用t檢驗(yàn)，以P<0.05為差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義。

2 結(jié)果

2.1 急性毒性試驗(yàn)

天麻細(xì)粉片對小鼠和大鼠的急性毒性試驗(yàn)結(jié)果見表1。雌、雄小鼠和大鼠經(jīng)天麻細(xì)粉片空腹灌胃后觀察14 d均未見中毒癥狀，無死亡。本試驗(yàn)中天麻細(xì)粉片經(jīng)口急性毒性試驗(yàn)的MTD>15.0 g/kg體重，屬無毒級。

2.2 Ames試驗(yàn)

Ames試驗(yàn)的結(jié)果見表2，陽性對照組在加S9或不加S9條件下均導(dǎo)致回復(fù)突變菌落數(shù)明顯增加，與空白對照組比較，差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P<0.01）；天麻細(xì)粉片各劑量組在加S9或不加S9條件下均未引起回復(fù)突變菌落數(shù)增加，與空白對照組比較，差異無統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P>0.05），提示天麻細(xì)粉片Ames試驗(yàn)結(jié)果為陰性。

2.3 小鼠骨髓細(xì)胞微核試驗(yàn)

環(huán)磷酰胺導(dǎo)致小鼠骨髓細(xì)胞微核率顯著增加（P<0.01），天麻細(xì)粉片各劑量組微核率與溶劑對照組比較，差異無統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P>0.05）（表3），提示天麻細(xì)粉片小鼠骨髓細(xì)胞微核試驗(yàn)陰性。

2.4 小鼠精子畸變試驗(yàn)

環(huán)磷酰胺處理小鼠后精子畸形率顯著增加，與溶劑對照組比較，差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P<0.01）；天麻細(xì)粉片各劑量組精子畸形率未見明顯變化，與溶劑對照組比較，差異無統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P>0.05）（表4），提示天麻細(xì)粉片小鼠精子畸變試驗(yàn)陰性。

2.5 30 d喂養(yǎng)試驗(yàn)

2.5.1 動物一般狀況 試驗(yàn)期間各組動物的一般狀況未見明顯異常。

2.5.2 天麻細(xì)粉片對大鼠體重、進(jìn)食量和臟器系數(shù)的影響 試驗(yàn)期間各劑量天麻細(xì)粉片對動物的體重未造成明顯影響，與對照組比較，差異無統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P>0.05）。各劑量天麻細(xì)粉片對動物的進(jìn)食量、食物利用率以及肝、腎、脾、性腺等臟器的重量和系數(shù)無明顯影響（數(shù)據(jù)未顯示）（表5）。

2.5.3 血液學(xué)和血清生化檢查結(jié)果 各劑量天麻細(xì)粉片對動物的血常規(guī)指標(biāo)以及血清生化指標(biāo)無明顯影響（表6）。

2.5.4 病理組織學(xué)檢查 各劑量天麻細(xì)粉片給藥后肉眼觀察動物臟器顏色、形狀、大小等均未見明顯病變。病理檢查標(biāo)本為對照組和天麻細(xì)粉片高劑量組的肝、腎、胃、腸、脾、卵巢（睪丸）。標(biāo)本系甲醛固定，經(jīng)水洗、修塊、脫水、石蠟包埋、切片、HE染色。結(jié)果（表7）顯示，對照組20只大鼠中有2例動物肝小葉有少量炎性細(xì)胞浸潤，1例動物肝臟匯管區(qū)有少量炎性細(xì)胞浸潤；天麻細(xì)粉片高劑量組20只大鼠中有2例動物肝臟匯管區(qū)有少量炎性細(xì)胞浸潤；其他臟器均未觀察到明顯病理改變。高劑量天麻細(xì)粉片對動物的肝、腎、胃腸、脾、卵巢（睪丸）等組織無明顯毒性。

3 討論

天麻作為天然藥物在我國已有超過一千年的應(yīng)用歷史。目前，天麻及其制劑在臨床上主要用于治療神經(jīng)系統(tǒng)疾病如癲癇、眩暈等[9]。此外，天麻還具有代謝調(diào)節(jié)[3-6]、抗炎[10-11]和抗血小板聚集[12]等藥理作用，具有廣闊的臨床應(yīng)用前景。盡管大部分報(bào)道顯示天麻安全性好，毒副作用小[3-6]，但對其片劑進(jìn)行系統(tǒng)性的毒理學(xué)研究尚未見報(bào)道。

本文實(shí)驗(yàn)結(jié)果顯示，天麻細(xì)粉片在小鼠和大鼠中的口服MTD>15.0 g/kg體重，屬無毒級。天麻細(xì)粉片的Ames試驗(yàn)、骨髓細(xì)胞微核試驗(yàn)及小鼠精子畸變試驗(yàn)結(jié)果均為陰性，提示無致畸和致突變的作用。大鼠30 d喂養(yǎng)試驗(yàn)顯示天麻細(xì)粉片在雌、雄大鼠中劑量為11.25 g/kg體重（相當(dāng)于人體推薦量的100倍）時(shí)對血液學(xué)和組織器官病理學(xué)檢測指標(biāo)無明顯影響。

有關(guān)天麻制成的其他劑型的毒性研究也有報(bào)道。如天麻軟膠囊的毒性研究顯示[13]，對小鼠經(jīng)口MTD>15.0 g/kg體重，大鼠30 d喂養(yǎng)試驗(yàn)未觀察到中毒表現(xiàn)，給藥組動物的體重、食物利用率、血液學(xué)和血液生化等指標(biāo)值、各臟器的臟/體比值與空白對照組比較，差異無統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P>0.05）。天麻鎮(zhèn)眩顆粒毒理學(xué)實(shí)驗(yàn)研究顯示，其在小鼠中的MTD>140 g/kg體重，且長期連續(xù)口服給藥安全[14]。SD大鼠連續(xù)30 d給予天麻藥材粉5.845 g/kg體重未觀察到有害作用[15]。妊娠期SD大鼠給予天麻藥材粉6.16 g/kg體重對胚胎及胎仔發(fā)育無明顯毒性作用[16]。

綜上所述，本研究為天麻片劑的臨床應(yīng)用提供了安全性數(shù)據(jù)，結(jié)合本實(shí)驗(yàn)研究與文獻(xiàn)報(bào)道[13-16]，天麻制劑無論是片劑、膠囊還是粉劑，在動物中均未觀察到明顯毒副作用以及致畸和致突變作用。由于動物實(shí)驗(yàn)中天麻的劑量遠(yuǎn)高于人體推薦量，提示天麻在臨床推薦劑量下應(yīng)用安全可靠。

[參考文獻(xiàn)]

[1] 陰健，郭力弓.中藥現(xiàn)代研究與臨床應(yīng)用[M].北京：學(xué)苑出版社，1993：140-145.

[2] 李青，趙冰清.天麻微量元素測定研究[J].湖南中醫(yī)雜志，1998，14（4）：75-78.

[3] 于濱，左增艷，蔣建東.天麻細(xì)粉和天麻素降血脂作用的實(shí)驗(yàn)研究[J].中國醫(yī)藥生物技術(shù)，2010，5（6）：415-418.

[4] 于濱，李永利，左增艷，等.天麻細(xì)粉片在高血脂大鼠模型中的降血脂實(shí)驗(yàn)研究[J].中國醫(yī)藥導(dǎo)報(bào)，2012，9（36）：5-6.

[5] 張聰恪，于濱，李永利，等.天麻細(xì)粉片治療高脂血癥的臨床療效和安全性觀察[J].中國醫(yī)藥導(dǎo)報(bào)，2013，10（15）：109-110.

[6] 耿亞娜，于濱，左增艷，等.天麻粉改善脂肪乳劑灌胃大鼠肝臟脂肪變性的實(shí)驗(yàn)研究[J].中國醫(yī)藥導(dǎo)報(bào)，2013，10（30）：11-15.

[7] 衛(wèi)生部衛(wèi)生法制與監(jiān)督司.保健食品檢驗(yàn)與評價(jià)規(guī)范[Z].2003.

[8] 徐冰，張炎，王海玉，等.氨糖膠囊的安全性毒理學(xué)試驗(yàn)[J].實(shí)用預(yù)防醫(yī)學(xué)，2011，18（12）：2384-2387.

[9] 陶云海.天麻藥理研究新進(jìn)展[J].中國中藥雜志，2008， 33（1）：108-110.

[10] Dai JN，Zong Y，Zhong LM，et al.Gastrodin inhibits expression of inducible NO synthase，cyclooxygenase-2 and proinflammatory cytokines in cultured LPS-stimulated microglia via MAPK pathways[J].PLoS One，2011，6（7）：e21891.

[11] Yang P，Han Y，Gui L，et al.Gastrodin attenuation of the inflammatory response in H9c2 cardiomyocytes involves inhibition of NF-κB and MAPKs activation via the phosphatidylinositol 3-kinase signaling[J].Biochem Pharmacol，2013，85（8）：1124-1133.

[12] 孟保華，李文軍，淤澤溥，等.天麻素對家兔體外血小板聚集的影響[J].中藥藥理與臨床，2006，22（3-4）：46-47.

[13] 梁堅(jiān)，趙鵬，李彬，等.天麻軟膠囊的毒性研究研究[J].中國熱帶醫(yī)學(xué)，2005，5（9）：1986-1988.

[14] 胡瓊力，陳寶田，崔桂梅.天麻鎮(zhèn)眩顆粒毒理學(xué)實(shí)驗(yàn)研究[J].中浙江中醫(yī)藥大學(xué)學(xué)報(bào)，2008，32（1）：96-99.

[15] 毛勇，蘇敏，那敏，等.天麻粉喂養(yǎng)大鼠30d毒性試驗(yàn)[J].中國藥理學(xué)與毒理學(xué)雜志，2013，27（3）：561.

[16] 袁芳，馮玉茹，李勇，等.天麻藥材粉對SD大鼠的胚胎發(fā)育毒性[J].中國藥理學(xué)與毒理學(xué)雜志，2013，27（3）：604-605.

（收稿日期：2014-04-02 本文編輯：郭靜娟）

1.7 統(tǒng)計(jì)學(xué)分析

采用SPSS 11.0統(tǒng)計(jì)軟件進(jìn)行數(shù)據(jù)分析，計(jì)量資料采用t檢驗(yàn)，以P<0.05為差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義。

2 結(jié)果

2.1 急性毒性試驗(yàn)

天麻細(xì)粉片對小鼠和大鼠的急性毒性試驗(yàn)結(jié)果見表1。雌、雄小鼠和大鼠經(jīng)天麻細(xì)粉片空腹灌胃后觀察14 d均未見中毒癥狀，無死亡。本試驗(yàn)中天麻細(xì)粉片經(jīng)口急性毒性試驗(yàn)的MTD>15.0 g/kg體重，屬無毒級。

2.2 Ames試驗(yàn)

Ames試驗(yàn)的結(jié)果見表2，陽性對照組在加S9或不加S9條件下均導(dǎo)致回復(fù)突變菌落數(shù)明顯增加，與空白對照組比較，差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P<0.01）；天麻細(xì)粉片各劑量組在加S9或不加S9條件下均未引起回復(fù)突變菌落數(shù)增加，與空白對照組比較，差異無統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P>0.05），提示天麻細(xì)粉片Ames試驗(yàn)結(jié)果為陰性。

2.3 小鼠骨髓細(xì)胞微核試驗(yàn)

環(huán)磷酰胺導(dǎo)致小鼠骨髓細(xì)胞微核率顯著增加（P<0.01），天麻細(xì)粉片各劑量組微核率與溶劑對照組比較，差異無統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P>0.05）（表3），提示天麻細(xì)粉片小鼠骨髓細(xì)胞微核試驗(yàn)陰性。

2.4 小鼠精子畸變試驗(yàn)

環(huán)磷酰胺處理小鼠后精子畸形率顯著增加，與溶劑對照組比較，差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P<0.01）；天麻細(xì)粉片各劑量組精子畸形率未見明顯變化，與溶劑對照組比較，差異無統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P>0.05）（表4），提示天麻細(xì)粉片小鼠精子畸變試驗(yàn)陰性。

2.5 30 d喂養(yǎng)試驗(yàn)

2.5.1 動物一般狀況 試驗(yàn)期間各組動物的一般狀況未見明顯異常。

2.5.2 天麻細(xì)粉片對大鼠體重、進(jìn)食量和臟器系數(shù)的影響 試驗(yàn)期間各劑量天麻細(xì)粉片對動物的體重未造成明顯影響，與對照組比較，差異無統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P>0.05）。各劑量天麻細(xì)粉片對動物的進(jìn)食量、食物利用率以及肝、腎、脾、性腺等臟器的重量和系數(shù)無明顯影響（數(shù)據(jù)未顯示）（表5）。

2.5.3 血液學(xué)和血清生化檢查結(jié)果 各劑量天麻細(xì)粉片對動物的血常規(guī)指標(biāo)以及血清生化指標(biāo)無明顯影響（表6）。

2.5.4 病理組織學(xué)檢查 各劑量天麻細(xì)粉片給藥后肉眼觀察動物臟器顏色、形狀、大小等均未見明顯病變。病理檢查標(biāo)本為對照組和天麻細(xì)粉片高劑量組的肝、腎、胃、腸、脾、卵巢（睪丸）。標(biāo)本系甲醛固定，經(jīng)水洗、修塊、脫水、石蠟包埋、切片、HE染色。結(jié)果（表7）顯示，對照組20只大鼠中有2例動物肝小葉有少量炎性細(xì)胞浸潤，1例動物肝臟匯管區(qū)有少量炎性細(xì)胞浸潤；天麻細(xì)粉片高劑量組20只大鼠中有2例動物肝臟匯管區(qū)有少量炎性細(xì)胞浸潤；其他臟器均未觀察到明顯病理改變。高劑量天麻細(xì)粉片對動物的肝、腎、胃腸、脾、卵巢（睪丸）等組織無明顯毒性。

3 討論

天麻作為天然藥物在我國已有超過一千年的應(yīng)用歷史。目前，天麻及其制劑在臨床上主要用于治療神經(jīng)系統(tǒng)疾病如癲癇、眩暈等[9]。此外，天麻還具有代謝調(diào)節(jié)[3-6]、抗炎[10-11]和抗血小板聚集[12]等藥理作用，具有廣闊的臨床應(yīng)用前景。盡管大部分報(bào)道顯示天麻安全性好，毒副作用小[3-6]，但對其片劑進(jìn)行系統(tǒng)性的毒理學(xué)研究尚未見報(bào)道。

本文實(shí)驗(yàn)結(jié)果顯示，天麻細(xì)粉片在小鼠和大鼠中的口服MTD>15.0 g/kg體重，屬無毒級。天麻細(xì)粉片的Ames試驗(yàn)、骨髓細(xì)胞微核試驗(yàn)及小鼠精子畸變試驗(yàn)結(jié)果均為陰性，提示無致畸和致突變的作用。大鼠30 d喂養(yǎng)試驗(yàn)顯示天麻細(xì)粉片在雌、雄大鼠中劑量為11.25 g/kg體重（相當(dāng)于人體推薦量的100倍）時(shí)對血液學(xué)和組織器官病理學(xué)檢測指標(biāo)無明顯影響。

有關(guān)天麻制成的其他劑型的毒性研究也有報(bào)道。如天麻軟膠囊的毒性研究顯示[13]，對小鼠經(jīng)口MTD>15.0 g/kg體重，大鼠30 d喂養(yǎng)試驗(yàn)未觀察到中毒表現(xiàn)，給藥組動物的體重、食物利用率、血液學(xué)和血液生化等指標(biāo)值、各臟器的臟/體比值與空白對照組比較，差異無統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P>0.05）。天麻鎮(zhèn)眩顆粒毒理學(xué)實(shí)驗(yàn)研究顯示，其在小鼠中的MTD>140 g/kg體重，且長期連續(xù)口服給藥安全[14]。SD大鼠連續(xù)30 d給予天麻藥材粉5.845 g/kg體重未觀察到有害作用[15]。妊娠期SD大鼠給予天麻藥材粉6.16 g/kg體重對胚胎及胎仔發(fā)育無明顯毒性作用[16]。

綜上所述，本研究為天麻片劑的臨床應(yīng)用提供了安全性數(shù)據(jù)，結(jié)合本實(shí)驗(yàn)研究與文獻(xiàn)報(bào)道[13-16]，天麻制劑無論是片劑、膠囊還是粉劑，在動物中均未觀察到明顯毒副作用以及致畸和致突變作用。由于動物實(shí)驗(yàn)中天麻的劑量遠(yuǎn)高于人體推薦量，提示天麻在臨床推薦劑量下應(yīng)用安全可靠。

[參考文獻(xiàn)]

[1] 陰健，郭力弓.中藥現(xiàn)代研究與臨床應(yīng)用[M].北京：學(xué)苑出版社，1993：140-145.

[2] 李青，趙冰清.天麻微量元素測定研究[J].湖南中醫(yī)雜志，1998，14（4）：75-78.

[3] 于濱，左增艷，蔣建東.天麻細(xì)粉和天麻素降血脂作用的實(shí)驗(yàn)研究[J].中國醫(yī)藥生物技術(shù)，2010，5（6）：415-418.

[4] 于濱，李永利，左增艷，等.天麻細(xì)粉片在高血脂大鼠模型中的降血脂實(shí)驗(yàn)研究[J].中國醫(yī)藥導(dǎo)報(bào)，2012，9（36）：5-6.

[5] 張聰恪，于濱，李永利，等.天麻細(xì)粉片治療高脂血癥的臨床療效和安全性觀察[J].中國醫(yī)藥導(dǎo)報(bào)，2013，10（15）：109-110.

[6] 耿亞娜，于濱，左增艷，等.天麻粉改善脂肪乳劑灌胃大鼠肝臟脂肪變性的實(shí)驗(yàn)研究[J].中國醫(yī)藥導(dǎo)報(bào)，2013，10（30）：11-15.

[7] 衛(wèi)生部衛(wèi)生法制與監(jiān)督司.保健食品檢驗(yàn)與評價(jià)規(guī)范[Z].2003.

[8] 徐冰，張炎，王海玉，等.氨糖膠囊的安全性毒理學(xué)試驗(yàn)[J].實(shí)用預(yù)防醫(yī)學(xué)，2011，18（12）：2384-2387.

[9] 陶云海.天麻藥理研究新進(jìn)展[J].中國中藥雜志，2008， 33（1）：108-110.

[10] Dai JN，Zong Y，Zhong LM，et al.Gastrodin inhibits expression of inducible NO synthase，cyclooxygenase-2 and proinflammatory cytokines in cultured LPS-stimulated microglia via MAPK pathways[J].PLoS One，2011，6（7）：e21891.

[11] Yang P，Han Y，Gui L，et al.Gastrodin attenuation of the inflammatory response in H9c2 cardiomyocytes involves inhibition of NF-κB and MAPKs activation via the phosphatidylinositol 3-kinase signaling[J].Biochem Pharmacol，2013，85（8）：1124-1133.

[12] 孟保華，李文軍，淤澤溥，等.天麻素對家兔體外血小板聚集的影響[J].中藥藥理與臨床，2006，22（3-4）：46-47.

[13] 梁堅(jiān)，趙鵬，李彬，等.天麻軟膠囊的毒性研究研究[J].中國熱帶醫(yī)學(xué)，2005，5（9）：1986-1988.

[14] 胡瓊力，陳寶田，崔桂梅.天麻鎮(zhèn)眩顆粒毒理學(xué)實(shí)驗(yàn)研究[J].中浙江中醫(yī)藥大學(xué)學(xué)報(bào)，2008，32（1）：96-99.

[15] 毛勇，蘇敏，那敏，等.天麻粉喂養(yǎng)大鼠30d毒性試驗(yàn)[J].中國藥理學(xué)與毒理學(xué)雜志，2013，27（3）：561.

[16] 袁芳，馮玉茹，李勇，等.天麻藥材粉對SD大鼠的胚胎發(fā)育毒性[J].中國藥理學(xué)與毒理學(xué)雜志，2013，27（3）：604-605.

（收稿日期：2014-04-02 本文編輯：郭靜娟）

1.7 統(tǒng)計(jì)學(xué)分析

采用SPSS 11.0統(tǒng)計(jì)軟件進(jìn)行數(shù)據(jù)分析，計(jì)量資料采用t檢驗(yàn)，以P<0.05為差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義。

2 結(jié)果

2.1 急性毒性試驗(yàn)

天麻細(xì)粉片對小鼠和大鼠的急性毒性試驗(yàn)結(jié)果見表1。雌、雄小鼠和大鼠經(jīng)天麻細(xì)粉片空腹灌胃后觀察14 d均未見中毒癥狀，無死亡。本試驗(yàn)中天麻細(xì)粉片經(jīng)口急性毒性試驗(yàn)的MTD>15.0 g/kg體重，屬無毒級。

2.2 Ames試驗(yàn)

Ames試驗(yàn)的結(jié)果見表2，陽性對照組在加S9或不加S9條件下均導(dǎo)致回復(fù)突變菌落數(shù)明顯增加，與空白對照組比較，差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P<0.01）；天麻細(xì)粉片各劑量組在加S9或不加S9條件下均未引起回復(fù)突變菌落數(shù)增加，與空白對照組比較，差異無統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P>0.05），提示天麻細(xì)粉片Ames試驗(yàn)結(jié)果為陰性。

2.3 小鼠骨髓細(xì)胞微核試驗(yàn)

環(huán)磷酰胺導(dǎo)致小鼠骨髓細(xì)胞微核率顯著增加（P<0.01），天麻細(xì)粉片各劑量組微核率與溶劑對照組比較，差異無統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P>0.05）（表3），提示天麻細(xì)粉片小鼠骨髓細(xì)胞微核試驗(yàn)陰性。

2.4 小鼠精子畸變試驗(yàn)

環(huán)磷酰胺處理小鼠后精子畸形率顯著增加，與溶劑對照組比較，差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P<0.01）；天麻細(xì)粉片各劑量組精子畸形率未見明顯變化，與溶劑對照組比較，差異無統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P>0.05）（表4），提示天麻細(xì)粉片小鼠精子畸變試驗(yàn)陰性。

2.5 30 d喂養(yǎng)試驗(yàn)

2.5.1 動物一般狀況 試驗(yàn)期間各組動物的一般狀況未見明顯異常。

2.5.2 天麻細(xì)粉片對大鼠體重、進(jìn)食量和臟器系數(shù)的影響 試驗(yàn)期間各劑量天麻細(xì)粉片對動物的體重未造成明顯影響，與對照組比較，差異無統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P>0.05）。各劑量天麻細(xì)粉片對動物的進(jìn)食量、食物利用率以及肝、腎、脾、性腺等臟器的重量和系數(shù)無明顯影響（數(shù)據(jù)未顯示）（表5）。

2.5.3 血液學(xué)和血清生化檢查結(jié)果 各劑量天麻細(xì)粉片對動物的血常規(guī)指標(biāo)以及血清生化指標(biāo)無明顯影響（表6）。

2.5.4 病理組織學(xué)檢查 各劑量天麻細(xì)粉片給藥后肉眼觀察動物臟器顏色、形狀、大小等均未見明顯病變。病理檢查標(biāo)本為對照組和天麻細(xì)粉片高劑量組的肝、腎、胃、腸、脾、卵巢（睪丸）。標(biāo)本系甲醛固定，經(jīng)水洗、修塊、脫水、石蠟包埋、切片、HE染色。結(jié)果（表7）顯示，對照組20只大鼠中有2例動物肝小葉有少量炎性細(xì)胞浸潤，1例動物肝臟匯管區(qū)有少量炎性細(xì)胞浸潤；天麻細(xì)粉片高劑量組20只大鼠中有2例動物肝臟匯管區(qū)有少量炎性細(xì)胞浸潤；其他臟器均未觀察到明顯病理改變。高劑量天麻細(xì)粉片對動物的肝、腎、胃腸、脾、卵巢（睪丸）等組織無明顯毒性。

3 討論

天麻作為天然藥物在我國已有超過一千年的應(yīng)用歷史。目前，天麻及其制劑在臨床上主要用于治療神經(jīng)系統(tǒng)疾病如癲癇、眩暈等[9]。此外，天麻還具有代謝調(diào)節(jié)[3-6]、抗炎[10-11]和抗血小板聚集[12]等藥理作用，具有廣闊的臨床應(yīng)用前景。盡管大部分報(bào)道顯示天麻安全性好，毒副作用小[3-6]，但對其片劑進(jìn)行系統(tǒng)性的毒理學(xué)研究尚未見報(bào)道。

本文實(shí)驗(yàn)結(jié)果顯示，天麻細(xì)粉片在小鼠和大鼠中的口服MTD>15.0 g/kg體重，屬無毒級。天麻細(xì)粉片的Ames試驗(yàn)、骨髓細(xì)胞微核試驗(yàn)及小鼠精子畸變試驗(yàn)結(jié)果均為陰性，提示無致畸和致突變的作用。大鼠30 d喂養(yǎng)試驗(yàn)顯示天麻細(xì)粉片在雌、雄大鼠中劑量為11.25 g/kg體重（相當(dāng)于人體推薦量的100倍）時(shí)對血液學(xué)和組織器官病理學(xué)檢測指標(biāo)無明顯影響。

有關(guān)天麻制成的其他劑型的毒性研究也有報(bào)道。如天麻軟膠囊的毒性研究顯示[13]，對小鼠經(jīng)口MTD>15.0 g/kg體重，大鼠30 d喂養(yǎng)試驗(yàn)未觀察到中毒表現(xiàn)，給藥組動物的體重、食物利用率、血液學(xué)和血液生化等指標(biāo)值、各臟器的臟/體比值與空白對照組比較，差異無統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P>0.05）。天麻鎮(zhèn)眩顆粒毒理學(xué)實(shí)驗(yàn)研究顯示，其在小鼠中的MTD>140 g/kg體重，且長期連續(xù)口服給藥安全[14]。SD大鼠連續(xù)30 d給予天麻藥材粉5.845 g/kg體重未觀察到有害作用[15]。妊娠期SD大鼠給予天麻藥材粉6.16 g/kg體重對胚胎及胎仔發(fā)育無明顯毒性作用[16]。

綜上所述，本研究為天麻片劑的臨床應(yīng)用提供了安全性數(shù)據(jù)，結(jié)合本實(shí)驗(yàn)研究與文獻(xiàn)報(bào)道[13-16]，天麻制劑無論是片劑、膠囊還是粉劑，在動物中均未觀察到明顯毒副作用以及致畸和致突變作用。由于動物實(shí)驗(yàn)中天麻的劑量遠(yuǎn)高于人體推薦量，提示天麻在臨床推薦劑量下應(yīng)用安全可靠。

[參考文獻(xiàn)]

[1] 陰健，郭力弓.中藥現(xiàn)代研究與臨床應(yīng)用[M].北京：學(xué)苑出版社，1993：140-145.

[2] 李青，趙冰清.天麻微量元素測定研究[J].湖南中醫(yī)雜志，1998，14（4）：75-78.

[3] 于濱，左增艷，蔣建東.天麻細(xì)粉和天麻素降血脂作用的實(shí)驗(yàn)研究[J].中國醫(yī)藥生物技術(shù)，2010，5（6）：415-418.

[4] 于濱，李永利，左增艷，等.天麻細(xì)粉片在高血脂大鼠模型中的降血脂實(shí)驗(yàn)研究[J].中國醫(yī)藥導(dǎo)報(bào)，2012，9（36）：5-6.

[5] 張聰恪，于濱，李永利，等.天麻細(xì)粉片治療高脂血癥的臨床療效和安全性觀察[J].中國醫(yī)藥導(dǎo)報(bào)，2013，10（15）：109-110.

[6] 耿亞娜，于濱，左增艷，等.天麻粉改善脂肪乳劑灌胃大鼠肝臟脂肪變性的實(shí)驗(yàn)研究[J].中國醫(yī)藥導(dǎo)報(bào)，2013，10（30）：11-15.

[7] 衛(wèi)生部衛(wèi)生法制與監(jiān)督司.保健食品檢驗(yàn)與評價(jià)規(guī)范[Z].2003.

[8] 徐冰，張炎，王海玉，等.氨糖膠囊的安全性毒理學(xué)試驗(yàn)[J].實(shí)用預(yù)防醫(yī)學(xué)，2011，18（12）：2384-2387.

[9] 陶云海.天麻藥理研究新進(jìn)展[J].中國中藥雜志，2008， 33（1）：108-110.

[10] Dai JN，Zong Y，Zhong LM，et al.Gastrodin inhibits expression of inducible NO synthase，cyclooxygenase-2 and proinflammatory cytokines in cultured LPS-stimulated microglia via MAPK pathways[J].PLoS One，2011，6（7）：e21891.

[11] Yang P，Han Y，Gui L，et al.Gastrodin attenuation of the inflammatory response in H9c2 cardiomyocytes involves inhibition of NF-κB and MAPKs activation via the phosphatidylinositol 3-kinase signaling[J].Biochem Pharmacol，2013，85（8）：1124-1133.

[12] 孟保華，李文軍，淤澤溥，等.天麻素對家兔體外血小板聚集的影響[J].中藥藥理與臨床，2006，22（3-4）：46-47.

[13] 梁堅(jiān)，趙鵬，李彬，等.天麻軟膠囊的毒性研究研究[J].中國熱帶醫(yī)學(xué)，2005，5（9）：1986-1988.

[14] 胡瓊力，陳寶田，崔桂梅.天麻鎮(zhèn)眩顆粒毒理學(xué)實(shí)驗(yàn)研究[J].中浙江中醫(yī)藥大學(xué)學(xué)報(bào)，2008，32（1）：96-99.

[15] 毛勇，蘇敏，那敏，等.天麻粉喂養(yǎng)大鼠30d毒性試驗(yàn)[J].中國藥理學(xué)與毒理學(xué)雜志，2013，27（3）：561.

[16] 袁芳，馮玉茹，李勇，等.天麻藥材粉對SD大鼠的胚胎發(fā)育毒性[J].中國藥理學(xué)與毒理學(xué)雜志，2013，27（3）：604-605.

（收稿日期：2014-04-02 本文編輯：郭靜娟）