范玉晶 裴鳳華 宋吉濤 劉冰熔

潰瘍性結(jié)腸炎(ulcerative colitis,UC)目前被認(rèn)為是環(huán)境、免疫以及遺傳等多種因素相互作用所致的一種慢性非特異性結(jié)腸炎癥，其病因和發(fā)病機(jī)制尚未完全明確。有大量研究發(fā)現(xiàn)，細(xì)胞因子及炎性因子的表達(dá)異常在UC的疾病進(jìn)程中發(fā)揮重要作用[1]。本研究通過測(cè)定潰瘍性結(jié)腸炎大鼠模型結(jié)腸組織中白介素-6(IL-6)水平的變化，探討其在UC發(fā)病中的作用和臨床意義。

材料與方法

一、實(shí)驗(yàn)動(dòng)物及模型制備

清潔級(jí)SD大鼠30只(由哈爾濱醫(yī)科大學(xué)附屬二院實(shí)驗(yàn)動(dòng)物中心提供)，隨機(jī)抽取20只為模型組，另外10只作為對(duì)照組。質(zhì)量200～250 g，體質(zhì)健康。SD大鼠首先適應(yīng)性喂養(yǎng)7天，正常進(jìn)食、進(jìn)水，保持飼養(yǎng)環(huán)境適宜。確定大鼠健康后，全部禁食、不禁水24 h。腹腔注射10%水合氯醛(0.2 ml/100 g)將大鼠麻醉，固定。將外徑2.0 mm,長(zhǎng)約15 cm左右的輸液管(用液體石蠟油潤(rùn)滑)，從大鼠肛門逆行插入結(jié)腸內(nèi)約8.0 cm處，一次性將100 mg/kg 2，4，6-三硝基苯磺酸(TNBS)和50%乙醇的TNBS/乙醇液0.25 ml注入大鼠結(jié)腸內(nèi)，用棉簽堵住大鼠肛門，輕揉大鼠腹部1 min，使TNBS/乙醇液均勻地與大鼠結(jié)腸黏膜接觸。然后將大鼠頭向下，身體傾斜45°，放置1 min，再將大鼠放平自然清醒。3 d后，腹腔注射10%水合氯醛(0.2 ml//100 g)，將大鼠麻醉，剖開大鼠腹腔，剪取直腸和結(jié)腸組織，清洗后肉眼觀察結(jié)腸組織，并取腸段(10%甲醛溶液中固定)作組織切片以確定造模是否成功。造模組肉眼觀顯示結(jié)腸黏膜充血、水腫、糜爛、出血、潰瘍;顯微鏡下顯示隱窩有急性炎細(xì)胞浸潤(rùn)，固有膜內(nèi)有慢性炎細(xì)胞浸潤(rùn)。

二、標(biāo)本采集和檢測(cè)方法

取正常大鼠組織及模型組病變潰瘍處4 mm×10 mm的結(jié)腸黏膜組織。勻漿后，分離上清液，置入-80℃冰箱，備用。三硝基苯磺酸(TNBS)購(gòu)自Sigma公司;IL-6試劑盒購(gòu)自武漢博士德生物技術(shù)有限公司。操作按說明書嚴(yán)格進(jìn)行。所有標(biāo)本均同批檢測(cè)。

三、統(tǒng)計(jì)學(xué)處理

采用SPSS 16.0統(tǒng)計(jì)軟件進(jìn)行統(tǒng)計(jì)學(xué)處理，計(jì)量資料以均數(shù)±SD表示，兩組間資料比較采用t檢驗(yàn)，以P<0.05為差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義。

結(jié) 果

20例潰瘍性結(jié)腸炎大鼠模型結(jié)腸組織中IL-6水平有明顯升高，差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P<0.05，表1)。

表1 兩組大鼠中IL-6水平比較(χ±s)

討 論

目前為止，UC的發(fā)病機(jī)制尚不清楚，考慮與環(huán)境、遺傳、感染和免疫因素等多因素有關(guān)，其相互作用導(dǎo)致了疾病的發(fā)生和發(fā)展，大多數(shù)學(xué)者認(rèn)為潰瘍性結(jié)腸炎的發(fā)生發(fā)展過程中，腸道黏膜免疫系統(tǒng)的異常起了至關(guān)重要的作用，而具有免疫調(diào)節(jié)作用的細(xì)胞因子(cytokines,CK)在UC的發(fā)生與發(fā)展過程中發(fā)揮著不可替代的重要作用[1]。

正常人群細(xì)胞因子中促炎因子和抗炎因子處于平衡狀態(tài)，一旦這種平衡被打破，將會(huì)導(dǎo)致疾病的發(fā)生[2]。目前認(rèn)為促炎因子和抗炎因子之間的失衡是UC發(fā)病的重要機(jī)制之一。

IL-6是重要的促炎癥細(xì)胞因子，它是由單核巨噬細(xì)胞產(chǎn)生的、多向性細(xì)胞因子，可由活化的T細(xì)胞、B細(xì)胞、纖維母細(xì)胞、內(nèi)皮細(xì)胞等產(chǎn)生，具有廣泛的生物學(xué)活性。它具有可以介導(dǎo)免疫球蛋白的分泌、加強(qiáng)終末B細(xì)胞的分化、提高T細(xì)胞活化信號(hào)及促進(jìn)細(xì)胞毒T細(xì)胞和NK細(xì)胞溶解細(xì)胞的能力。有研究發(fā)現(xiàn)UC患者的血清IL-6水平明顯升高，且與病變范圍和病變嚴(yán)重程度呈正相關(guān)[3-4]。

本研究發(fā)現(xiàn)：UC組結(jié)腸組織中的IL-6水平明顯高于對(duì)照組，差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義，因此考慮：IL-6表達(dá)水平的增加可能參與了UC疾病的發(fā)生、發(fā)展過程，并在一定程度上反映了疾病的嚴(yán)重程度，臨床上可以此作為監(jiān)測(cè)UC患者的病情和治療效果的指標(biāo)。

[1] 桑力軒,劉漢立,姜敏.潰瘍性結(jié)腸炎發(fā)病機(jī)制研究進(jìn)展.世界華人消化雜志,2007,15(2):2249-2254.

[2] 林平,伍楊,黃華,等.細(xì)胞因子與潰瘍性結(jié)腸炎.湖北民族學(xué)院學(xué)報(bào)(醫(yī)學(xué)版),2003,20(4):28-30.

[3] EJ Goetzl，BA Burrall，L Baud，et al.Generation and recognition of leukotriene mediators of hypersensitivity and inflammation.Dig dis Sci,1988(33):36.

[4] 姚茹冰，邱明義，蔡輝，等.烏梅丸對(duì)潰瘍性結(jié)炎大鼠病變結(jié)腸黏膜腫瘤壞死因子α，白介素-8及白介素-10的影響.中醫(yī)雜志，2002，43(19)：935.