陸麗娜 馬梁明

WT1基因與急性髓細(xì)胞白血病預(yù)后的研究

陸麗娜 馬梁明

目的 分析WT1基因與急性髓細(xì)胞白血病(AML)預(yù)后之間可能存在的關(guān)系。方法 實(shí)時(shí)熒光定量PCR法測(cè)定50例AML患者(實(shí)驗(yàn)組)和15例健康人(對(duì)照組)骨髓WT1基因不同階段的表達(dá)水平。結(jié)果 15例正常人骨髓微量或不表達(dá)WT1基因。經(jīng)標(biāo)準(zhǔn)方案化療后, 17例WT1基因表達(dá)水平不高的AML患者中15例達(dá)CR, 33例WT1基因表達(dá)水平增高者18例CR(χ2=4.273, P=0.039), 該18例CR患者骨髓WT1基因表達(dá)與初次發(fā)病時(shí)比較明顯降低(P＜0.05)。經(jīng)隨訪12個(gè)月, 18例WT1增高的患者中12例復(fù)發(fā), 15例WT1正常的患者中2例復(fù)發(fā)(χ2=9.528, P=0.006)。結(jié)論 無(wú)WT1基因表達(dá)增高的AML患者具有較高的CR和更低的復(fù)發(fā)率。

WT1基因 ； 急性髓細(xì)胞白血病；熒光定量PCR

在腎母細(xì)胞瘤中, WT1基因是定位于人類11號(hào)染色體短臂的1區(qū)3帶的一種腫瘤抑制基因, 而通過(guò)近年研究發(fā)現(xiàn),該基因在急性白血病中發(fā)揮癌基因樣作用, 與白血病的發(fā)生、發(fā)展及預(yù)后可能有關(guān), 在各類白血病中有不同程度表達(dá)的基因, 因此WT1基因被認(rèn)為是一種“泛白血病”基因標(biāo)志,定期動(dòng)態(tài)的檢測(cè)WT1基因表達(dá)水平可用來(lái)監(jiān)測(cè)微小殘留病(MRD)和判斷疾病預(yù)后［1,2］。

1 資料與方法

1.1 一般資料 選取2011年12月～2012年12月在本院就診的AML患者50例作為實(shí)驗(yàn)組, 外院未接受過(guò)任何治療。其中男29例, 女21例, 年齡6～62歲, 中位年齡38歲。根據(jù)FAB分型：其中M04例, M13例, M219例, M36例, M412例, M56例。M3患者除給予柔紅霉素化療外, 同時(shí)給予三氧化二砷和維A酸治療, 除M3外其余患者均給予標(biāo)準(zhǔn)DA方案(DNR 45～60/m2, Ara-C 100～200/m2)化療。疾病緩解均符合《血液病診斷及療效標(biāo)準(zhǔn)》［3］。對(duì)照組15例, 均為健康體檢者, 其中男9例, 女6例, 年齡12～60歲, 中位年齡41歲。

1.2 標(biāo)本采集 WT1基因測(cè)定：所有的患者抽取骨髓標(biāo)本3 ml, 采用EDTA抗凝備用。

1.3 WT1測(cè)定方法及取值 提取RNA、逆轉(zhuǎn)錄合成cDNA、實(shí)時(shí)定量PCR及標(biāo)準(zhǔn)曲線的制作、標(biāo)本相應(yīng)的WT1基因表達(dá)水平的計(jì)算均根據(jù)文獻(xiàn)［4］的常規(guī)方法。WT1基因表達(dá)水平 = (WT1拷貝數(shù)/ABL拷貝數(shù))×10000(WT1基因表達(dá)水平>140為陽(yáng)性, WT1基因表達(dá)水平≤140為陰性)。

1.4 統(tǒng)計(jì)學(xué)方法 采用SPSS16.0軟件包進(jìn)行統(tǒng)計(jì)學(xué)分析。計(jì)量資料呈非正態(tài)分布, 采用Mann-Whitney U檢驗(yàn)。分組數(shù)據(jù)率的比較使用χ2檢驗(yàn)。P<0.05為差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義。

2 結(jié)果

2.1 WT1基因在AML患者中表達(dá)陽(yáng)性率為66%(33/50), 而在正常健康者中未表達(dá)或表達(dá)微量；實(shí)驗(yàn)組與對(duì)照組WT1基因比較差異具有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P＜0.01)。兩組年齡比較差異無(wú)統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P>0.05), 說(shuō)明為隨機(jī)抽取樣本, 結(jié)果真實(shí)可靠。見(jiàn)表1。

表1 WT1基因在AML患者中的表達(dá)情況

2.2 在50例AML患者中, 經(jīng)標(biāo)準(zhǔn)方案化療后, WT1基因表達(dá)增高者完全緩解(CR)率與WT1基因表達(dá)正常者比較差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(χ2=4.273, P=0.039)。見(jiàn)表2。

表2 WT1基因表達(dá)增高者與表達(dá)正常者完全緩解率比較(n)

2.3 隨訪觀察12個(gè)月, WT1增高組較WT1正常組復(fù)發(fā)率更高(χ2=9.528；P=0.006)。見(jiàn)表3。

表3 12個(gè)月后兩組復(fù)發(fā)率比較(n)

3 討論

正常人骨髓WT1基因微量表達(dá)或不表達(dá)。WT1基因表達(dá)正常的AML患者較WT1基因增高者有更高的完全緩解率、更低的復(fù)發(fā)率。

通過(guò)對(duì)MRD的動(dòng)態(tài)監(jiān)測(cè)早期發(fā)現(xiàn)復(fù)發(fā)的高危患者, 并在分子水平復(fù)發(fā)時(shí)早期干預(yù)治療, 可阻止血液學(xué)復(fù)發(fā)。但并非所有的血液系統(tǒng)惡性疾病都有其特異性的融合基因或者免疫表型, 尤其是在AML中, 60%以上缺乏獨(dú)特的分子生物學(xué)標(biāo)記［5］, 由此造成對(duì)這一大類白血病患者M(jìn)RD監(jiān)測(cè)的困難。有文獻(xiàn)報(bào)道, WT1基因在約60%～70%的急性髓細(xì)胞白血病中高表達(dá), 故監(jiān)測(cè)該基因的變化, 可能會(huì)提示疾病的復(fù)發(fā)。Bergmann等［6］報(bào)道：通過(guò)使用Rt-PCR法定量檢測(cè)了急性白血病患者的WT1 基因的表達(dá)水平, 結(jié)果表明在所有的標(biāo)本中, WT1 基因表達(dá)水平是正常人外周血、骨髓的103～104倍, 同時(shí)觀察到WT1 基因表達(dá)水平與急性白血病預(yù)后之間的關(guān)系, 將K562細(xì)胞株(慢性粒細(xì)胞白血病急變期細(xì)胞株)的WT1 基因表達(dá)水平定為1, 檢測(cè)結(jié)果發(fā)現(xiàn)WT1 水平<0.6的患者的緩解率與無(wú)病生存率明顯升高［7］, 這些研究結(jié)果均提示W(wǎng)T1基因的表達(dá)水平是急性白血病新的預(yù)后因素, 在疾病不同時(shí)期的表達(dá)水平, 對(duì)疾病的發(fā)展及預(yù)后的預(yù)測(cè)有著重要意義。

本實(shí)驗(yàn)通過(guò)回顧性的分析50例AML患者治療前后WT1基因水平的變化發(fā)現(xiàn), WT1基因表達(dá)陽(yáng)性率結(jié)果(66%)與以往的一些實(shí)驗(yàn)基本吻合, 說(shuō)明該基因在急性髓細(xì)胞白血病中表達(dá)的廣泛性。初發(fā)WT1基因表達(dá)微量或不表達(dá)的AML較WT1基因高表達(dá)的AML具有更高的完全緩解率；而在WT1基因高表達(dá)的AML患者中, 隨著該基因表達(dá)水平的增高, 完全緩解率下降；經(jīng)過(guò)標(biāo)準(zhǔn)化療后, 完全緩解的AML患者, WT1基因表達(dá)水平明顯下降；復(fù)發(fā)的患者, WT1基因表達(dá)水平再次升高, 與初次發(fā)病時(shí)比較差異無(wú)統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P＞0.05)。因此動(dòng)態(tài)的檢測(cè)WT1基因表達(dá)水平, 對(duì)于評(píng)價(jià)AML發(fā)展及預(yù)測(cè)預(yù)后有重要的意義。隨著新的診療技術(shù)的開(kāi)展, 人們將會(huì)更便利地通過(guò)檢測(cè)WT1來(lái)評(píng)估及治療AL, 也許在不久的將來(lái)WT1這一預(yù)后不良指標(biāo)會(huì)像早幼粒白血病/維甲酸受體(PML/RARα)基因一樣成為預(yù)后良好因素。

［1］ Menssen HD, Siehl JM, Thiel E.Wilms tumor gene(WT1) expression as a panleukemic marker.Int J Hematol , 2002,76(2):103-109.

［2］ Kletzel M, Olzewski M, Huang W, et al.Utility of WT1 as a reliable tool for the detection of minimal residual disease in children with leukemia.Pediatr Dev Pathol , 2002,5(3):269-275.

［3］ 張之南.血液病診斷及療效標(biāo)準(zhǔn).第2版.北京：科學(xué)出版社, 1998(4):264.

［4］ 華海應(yīng), 孫愛(ài)寧, 何軍, 等.WT1基因在急性白血病患者骨髓細(xì)胞中的表達(dá)及其臨床意義.蘇州大學(xué)學(xué)報(bào)(醫(yī)學(xué)版), 2009(29):300-303.

［5］ Pallisgaard N, Hokland P, Riishoj DC, et a1.Multiplex reverse transcription-polymerase chain reaction for simultaneous screening of 29 translocations and chromosomal aberrations in acute leukemia.Blood, 1998(92):574-588.

［6］ Bergmann D, Miething C, Maurer U, et al.High levels of Wilms’tumor gene(WT1) mRNA in acute myeloid leukemias are associated with a worse long-term out-come.Blood, 1997(80):1217-1225.

［7］ Miwa H, Beran M, Saunders GF, et al.Expression of the Wilms tumor gene(WT1) in human leukemias.Leukemia, 1992, (6):405-409.

2014-05-21］

030001 山西醫(yī)科大學(xué)研究生院

馬梁明