258例血清中抗-HCV陽(yáng)性聯(lián)合HCV-RNA定量檢測(cè)結(jié)果分析

龐麗娜 薛金方

258例血清中抗-HCV陽(yáng)性聯(lián)合HCV-RNA定量檢測(cè)結(jié)果分析

龐麗娜 薛金方

目的 探討丙型肝炎病毒抗體(抗-HCV)和丙型肝炎病毒核糖核酸(HCV-RNA)定量聯(lián)合檢測(cè)結(jié)果對(duì)丙型肝炎確診的臨床意義。方法 對(duì)258例ELISA法檢測(cè)的血清抗-HCV陽(yáng)性丙型肝炎(HC)患者, 同時(shí)采用PCR-熒光探針?lè)z測(cè)其HCV-RNA含量。結(jié)果 258例抗-HCV陽(yáng)性丙型肝炎患者中HCV-RNA陰性92例, 占35.66%；17例HCV-RNA弱陽(yáng)性, 占6.59%；HCV-RNA陽(yáng)性149例,即57.75%的HC患者存在病毒血癥。結(jié)論 ELISA法聯(lián)合檢測(cè)抗-HCV和HCV-RNA有助于丙型肝炎確診病毒血癥以及監(jiān)控HCV的感染, 并及時(shí)進(jìn)行抗病毒治療。

丙型肝炎病毒抗體; 丙型肝炎病毒核糖核酸; 丙型肝炎; PCR-熒光探針

丙型病毒性肝炎是一種臨床多發(fā)疾病, 其一般癥狀較輕,但病情呈進(jìn)行性進(jìn)展, 如果治療不及時(shí)易形成肝硬化甚至是肝癌［1］, 因此準(zhǔn)確及時(shí)地對(duì)丙型肝炎患者進(jìn)行早期確診和療效觀察顯得十分重要。丙型肝炎病毒抗體(抗-HCV)及丙型肝炎病毒核糖核酸(HCV-RNA)是診斷丙型肝炎(HC)的主要病原學(xué)指標(biāo)［2,3］, 前者是間接反映HCV的感染與既往感染,后者是反映患者血清中是否存在病毒血癥。本文對(duì)258例丙型肝炎病毒抗體陽(yáng)性的丙型肝炎患者進(jìn)行丙型肝炎病毒核糖核酸檢測(cè), 旨在探討丙型肝炎確診病毒血癥以及監(jiān)控HCV的感染, 并及時(shí)進(jìn)行抗病毒治療。

1 資料與方法

1.1 一般資料 2013年5月~2014年5月本院門(mén)診及住院的臨床確診丙型肝炎患者258例, 其中男139例, 女119例。年齡19~82歲, 平均年齡45歲。

1.2 儀器與試劑 用于檢測(cè)HCV-RNA的熒光定量PCR試劑盒購(gòu)于中山大學(xué)達(dá)安基因股份有限公司, 儀器為中山大學(xué)達(dá)安基因股份有限公司ABI Prism 7500 Real Time PCR System,抗-HCV ELISA診斷試劑盒購(gòu)自麗珠生物工程公司。

1.3 HCV-RNA熒光定量測(cè)定

1.3.1 標(biāo)本處理以及RNA提取 取50 μl經(jīng)高壓滅菌處理的離心管, 加200 μl裂解液, 再分別加入200 μl血清, 漩渦振蕩15 s混勻后高速離心10 s, 然后72℃放置10 min；再加入250 μl無(wú)水乙醇, 蓋緊管蓋, 振蕩15 s后移至離心柱室溫下12 000 rpm離心1 min, 將離心柱裝至新的收集管；再加入500 μl的抑制物去除液, 室溫下12 000 rpm離心1 min, 將離心柱裝至新的收集管；再加入500 μl的去離子液, 室溫下12 000 rpm離心1 min, 將離心柱裝至新的收集管；再次加入500 μl的去離子液, 室溫下12 000 rpm離心1 min, 將離心柱裝至新的收集管；將離心柱-收集管于室溫下14 000 rpm離心3 min以除去殘余的乙醇；將離心柱取出, 放置于新的1.5 ml離心管, 打開(kāi)離心柱蓋子, 72℃放置2 min；在離心柱的膜的正上方小心加入72℃預(yù)熱的洗脫液35 μl, 蓋緊離心柱管蓋,室溫靜置1 min后, 14 000 rpm離心1 min。

1.3.2 PCR擴(kuò)增 將反應(yīng)管放入儀器樣品槽內(nèi), 儀器循環(huán)條件設(shè)置為50℃ 15 min, 1個(gè)循環(huán)；95℃ 15 min, 1個(gè)循環(huán)；94℃ 15 s→55℃ 45 s(收集熒光), 45個(gè)循環(huán)。每批PCR試驗(yàn)均做陰性、陽(yáng)性和臨界陽(yáng)性對(duì)照。

1.3.3 結(jié)果判定 反應(yīng)結(jié)束后自動(dòng)保存結(jié)果, 根據(jù)分析后圖像調(diào)節(jié)Baseline的Start值、End值以及Threshold值, 點(diǎn)擊Analysis自動(dòng)獲得分析結(jié)果, 在Report界面察看結(jié)果。若樣本的C<1.00E+003, 則該樣品的HCV-RNA 濃度<1×103IU/ml； 若樣本的1.00E+003≤C≤1.00E+007, 則該樣品的HCV-RNA 濃度1×103IU/ml≤C≤1×107IU/ml； 若樣本的C>1.00E+007,則該樣品的HCV-RNA 濃度>1×107IU/ml；報(bào)告相應(yīng)的病毒載量。

1.4 抗-HCV檢測(cè) 采用酶聯(lián)免疫吸附法(ELISA), 抗-HCV ELISA試劑盒的包被抗原為合成多肽抗原和基因工程抗原(包括HCV病毒結(jié)構(gòu)區(qū)核心抗原和非結(jié)構(gòu)區(qū)抗原), 操作嚴(yán)格遵從試劑盒說(shuō)明書(shū)及免疫學(xué)要求進(jìn)行, 測(cè)得的標(biāo)本的OD≥COV為陽(yáng)性, 小于閾值為陰性(閾值=0.05+0.08×陽(yáng)性對(duì)照臨界平均值)。

2 結(jié)果

258例抗-HCV陽(yáng)性樣本中, HCV-RNA陰性92例；HCV-RNA在臨界值范圍內(nèi)的有17例；HCV-RNA陽(yáng)性有149例。具體見(jiàn)表1。

表1 258例ELISA抗-HCV陽(yáng)性和HCV-RNA 檢測(cè)結(jié)果(n, %)

3 討論

丙型肝炎, 是由丙型肝炎病毒(hepatitis C virus, HCV)感染引起的一種傳染病。丙型肝炎呈世界性分布, 我國(guó)一般人群HCV的感染率為3.2%［4］。我國(guó)丙型肝炎感染率僅次于乙型肝炎。據(jù)報(bào)道世界范圍內(nèi)27%的肝硬化和25%的原發(fā)性肝細(xì)胞癌發(fā)生于HCV感染者［5］, 由于尚無(wú)有效的預(yù)防和治療方法, 丙型肝炎病毒感染者中絕大部分發(fā)展成慢性感染,進(jìn)而發(fā)生肝硬化和肝細(xì)胞性肝癌［1］。丙型肝炎是一種嚴(yán)重危害人類(lèi)健康的病毒性肝炎, 由于起病隱匿, 大多數(shù)感染者無(wú)明顯的臨床癥狀和體征, 需依賴(lài)實(shí)驗(yàn)室檢查明確診斷［6-8］。目前, 對(duì)HCV復(fù)制活躍的患者, 早期開(kāi)始抗丙肝病毒治療可望中止或延緩病變發(fā)展, 從而改善患者預(yù)后［9］。因此, 對(duì)HCV感染的早期診斷十分必要和迫切。目前, 對(duì)于HCV感染的診斷, 臨床上仍以檢測(cè)抗-HCV為主。

本實(shí)驗(yàn)的258例患者中, 92例標(biāo)本雖然抗-HCV陽(yáng)性,但HCV-RNA陰性, 表示丙型肝炎病毒在體內(nèi)停止復(fù)制；其中17例HCV-RNA介于實(shí)驗(yàn)的臨界值, 表示丙型肝炎病毒在體內(nèi)可能存在復(fù)制趨勢(shì)；149例HCV-RNA陽(yáng)性, 表示丙型肝炎病毒在體內(nèi)高度復(fù)制, 為抗病毒治療指征。同時(shí), 在急性丙型肝炎的恢復(fù)期, 丙型肝炎病毒復(fù)制停止致HCVRNA轉(zhuǎn)陰, 而抗-HCV仍可存在一段時(shí)間。對(duì)于慢性丙型肝炎, 抗-HCV高滴度表示丙型肝炎病毒復(fù)制且有傳染性。ELISA法檢測(cè)抗-HCV和HCV-RNA的聯(lián)合檢測(cè)有助于丙型肝炎確診病毒血癥以及監(jiān)控HCV的感染, 并及時(shí)進(jìn)行抗病毒治療, 預(yù)防疾病嚴(yán)重化。

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Result analysis of serum anti-HCV positive combined with HCV-RNA quantitative detection of 258

cases

PANG Li-na, XUE Jin-fang.Department of Clinical Laboratory, Fifth Affiliated Hospital of Sun Yat-sen

University, Zhuhai 519000, China

Objective To investigate the clinical significance of hepatitis C virus antibody (anti-HCV) combined with hepatitis C virus ribonucleic acid (HCV-RNA) quantitative detection in the diagnosis of hepatitis C (HC).Methods A total of 258 cases of HC with anti-HCV positive were detected by ELISA method and PCR-fluorescence probe for the HCV-RNA content.Results Among the 258 cases with anti-HCV positive, there were 92 cases of HCV-RNA negative as 35.66%, 17 cases of HCV-RNA weakly positive as 6.59%, and 149 cases of HCV-RNA positive.Thus, there were 57.75% of the HC patients with viremia.Conclusion ELISA method in combined detection of anti-HCV and HCV-RNA helps to diagnose viremia of HC, monitor HCV infection and conduct timely antiviral treatment.

Antibody to hepatitis C virus; Hepatitis C virus ribonucleic acid; Hepatitis C; PCR-fluorescence probe

2014-07-23］

519000 中山大學(xué)附屬第五醫(yī)院檢驗(yàn)科