錢峰

·藥物與臨床·

干擾素治療慢性乙型肝炎對(duì)患者T淋巴細(xì)胞CD28表達(dá)的影響

錢峰

目的 探討干擾素治療慢性乙型肝炎對(duì)患者T淋巴細(xì)胞CD28表達(dá)的影響。方法 符合納入標(biāo)準(zhǔn)的慢性乙型肝炎患者112例, 給予干擾素α-2b抗病毒治療, 療程為12個(gè)月, 治療前后測(cè)定并比較患者淋巴細(xì)胞CD28表達(dá)情況。結(jié)果 治療后, 患者CD4+CD28+T細(xì)胞由(0.43±0.1)×109/L增加至(0.56±0.2)×109/L, CD8+CD28+T細(xì)胞由(0.19±0.2)×109/L增加至(0.31±0.1)×109/L, CD28的表達(dá)均明顯高于治療前, 比較差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P<0.05)。高病毒載量組與低病毒載量組患者治療后T淋巴細(xì)胞CD28表達(dá)差異無(wú)統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P＞0.05)。結(jié)論 干擾素α-2b可以有效增加慢性乙型肝炎患者T淋巴細(xì)胞CD28的表達(dá), 其抗病毒作用可能與有效激活CD4+CD28+和CD8+CD28+T細(xì)胞有關(guān)。

干擾素α-2b；慢性乙型肝炎；CD28

慢性乙型肝炎(CHB)是一種全球性的傳染性疾病, 約有20億人群感染過(guò)乙型肝炎病毒(HBV), 中國(guó)是乙型肝炎的高發(fā)地區(qū), 其中約有1.2億人群是病毒攜帶者［1］, 嚴(yán)重危害人類健康。治療CHB, 抗病毒治療是關(guān)鍵。目前認(rèn)為, T淋巴細(xì)胞介導(dǎo)的細(xì)胞免疫在清除HBV中發(fā)揮關(guān)鍵作用, 其活化和發(fā)揮作用的關(guān)鍵因素是T淋巴細(xì)胞表面協(xié)同刺激分子極其配體的正常表達(dá)［2］。T細(xì)胞只有在抗原特異性的第一信號(hào)和T細(xì)胞上的CD28與抗原提呈細(xì)胞上的B7分子結(jié)合提供的第二信號(hào)同時(shí)存在時(shí), 才開(kāi)始增殖并分泌相關(guān)細(xì)胞因子［3］。因此, 提高T細(xì)胞CD28的表達(dá), 對(duì)HBV的有效清除有著積極的意義。本研究旨在探討干擾素α-2b治療慢性乙型肝炎對(duì)患者T淋巴細(xì)胞CD28表達(dá)的影響, 以期為臨床用藥進(jìn)一步提供相關(guān)臨床證據(jù)。

1 資料與方法

1.1 一般資料 收集本科2012年1月～2013年10月收治的CHB患者112例, 納入標(biāo)準(zhǔn)：①符合中華醫(yī)學(xué)會(huì)傳染病與寄生蟲(chóng)病學(xué)分會(huì)、肝病學(xué)分會(huì)制定的病毒性肝炎防治方案中CHB的診斷標(biāo)準(zhǔn)［4］；②排除HBV相關(guān)疾病, 合并甲、丙、丁、戊型肝炎病毒感染及自身免疫性疾病患者；③未接受過(guò)抗病毒及免疫治療。其中男71例, 女41例, 平均年齡(32.5±11.2)歲。所以患者均給予干擾素α-2b 500萬(wàn)單位隔日肌肉注射1次抗病毒治療, 療程為12個(gè)月。治療前后檢測(cè)并比較患者CD28表達(dá)情況。病毒載量>1×106IU/ml為高病毒載量患者, <1×106IU/ml為低病毒載量患者, 比較高病毒載量患者與低病毒載量患者治療后CD28表達(dá)情況。

1.2 CD28表達(dá)情況檢測(cè) 外周血淋巴細(xì)胞CD28表達(dá)檢測(cè)：各加入50 μl EDTA抗凝血至樣品測(cè)定管中, 每管中加入相應(yīng)抗體10 μl, 振蕩混勻, 室溫避光孵育20 min, 加入溶血素1 ml, 振蕩混勻, 室溫避光放置10 min, 1200 r/min的轉(zhuǎn)速離心4 min棄上清, 加入PBS 1 ml, 1200 r/min轉(zhuǎn)速離心4 min, 棄上清, 加入PBS 400 μl, 混勻后上機(jī)檢測(cè)。使用三色熒光進(jìn)行檢測(cè), 其中CD4和CD8采用FITC標(biāo)記, CD28使用PE標(biāo)記。軟件Cellquest進(jìn)行分析。于治療前后各采血檢測(cè)1 次上述指標(biāo)。

1.3 統(tǒng)計(jì)學(xué)方法 采用統(tǒng)計(jì)學(xué)軟件SPSS16.0對(duì)數(shù)據(jù)進(jìn)行分析。計(jì)量資料以均數(shù)± 標(biāo)準(zhǔn)差( x-±s)表示, 采用t檢驗(yàn)；計(jì)數(shù)資料采用χ2檢驗(yàn)。以 P＜0.05為差異具有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義。

2 結(jié)果

2.1 抗病毒治療前后CD28表達(dá)情況比較 12個(gè)月的療程結(jié)束后, 患者CD4+CD28+T細(xì)胞及CD8+CD28+T細(xì)胞較治療前明顯增加, 比較差異均有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P<0.05)。表明干擾素α-2b可以增加慢性乙型肝炎患者T淋巴細(xì)胞CD28的表達(dá) , 詳見(jiàn)表1。

表1 抗病毒治療前后CD28表達(dá)情況比較［ x-±s, (×109/L)］

2.2 不同病毒載量患者治療后CD28表達(dá)情況比較 高病毒載量組與低病毒在兩組在治療后患者CD4+CD28+T細(xì)胞及CD8+CD28+T細(xì)胞CD28的表達(dá)差異均無(wú)統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P＞0.05),詳見(jiàn)表2。

表2 不同病毒載量患者治療后CD28表達(dá)情況比較［ x-±s, (×109/L)］

3 討論

CD28分子是免疫球蛋白超家族的成員, 是T細(xì)胞初始活化過(guò)程中不可缺少的第二信號(hào), 在病毒感染的初始階段, T細(xì)胞在CD28介導(dǎo)的刺激信號(hào)作用下開(kāi)始克隆增殖, 并促進(jìn)白細(xì)胞介素-2的分泌, 為清除病毒做準(zhǔn)備, 而缺乏CD28的介導(dǎo)作用, 將導(dǎo)致T細(xì)胞的無(wú)能［5］。Fan等［6］研究發(fā)現(xiàn),阻斷CD28 /B7可以抑制T細(xì)胞活化, 并誘導(dǎo)免疫耐受。研究表明, CHB的預(yù)后與患者抗病毒免疫密切相關(guān), 正常的免疫反應(yīng)可以有效清除HBV。但CHB患者的細(xì)胞免疫功能與正常人相比常有不同程度的下降, T淋巴細(xì)胞CD28表達(dá)顯著降低, 不利于HBV的清除, 更容易導(dǎo)致病毒的持續(xù)感染, 以致病情遷延不愈。因此, T淋巴細(xì)胞CD28分子表達(dá)的減少可能是CHB患者病毒難以清除的原因之一, 增加T淋巴細(xì)胞表面CD28分子的表達(dá)可以提高HBV的有效清除率。

理想的抗HBV方案應(yīng)該具有激活足夠免疫細(xì)胞、肝細(xì)胞損傷較少及有效終止病毒持續(xù)感染的優(yōu)點(diǎn)。干擾素是一種具有抗病毒和免疫調(diào)節(jié)雙重機(jī)制的多功能糖蛋白, 通過(guò)上調(diào)I型主要組織相容性復(fù)合體FC受體, 促使CTL細(xì)胞分化并提高宿主免疫應(yīng)答, 從而清除HBV感染的細(xì)胞［7］。目前, 干擾素已廣泛用于CHB的抗病毒治療, 并取得了一定的療效,但其對(duì)CHB患者T淋巴細(xì)胞表明CD28分子表達(dá)的影響的相關(guān)研究較少。

本研究中, 通過(guò)12個(gè)月療程的干擾素α-2b治療, 患者CD4+CD28+T細(xì)胞由(0.43±0.1)×109/L增加至(0.56±0.2)×109/L, CD8+CD28+T細(xì)胞由(0.19±0.2)×109/L增加至(0.31±0.1)×109/L, CD28分子表達(dá)均明顯高于治療前。結(jié)果表明, 干擾素α-2b有效上調(diào)CHB患者T淋巴細(xì)胞CD28的表達(dá), 此機(jī)制可能與干擾素α-2b的抗病毒作用有關(guān)。然而, 高病毒載量組與低病毒載量組患者治療后T細(xì)胞CD28表達(dá)情況并無(wú)顯著差異,與張曉幫等［8］報(bào)道較為一致。

綜上所述, 干擾素治療可有效增加T淋巴細(xì)胞CD28的表達(dá), 從而達(dá)到激活T細(xì)胞免疫反應(yīng)的抗病毒作用, 在乙肝治療中發(fā)揮作用。

［1］ 鄒德力.談乙型肝炎病毒的傳播、預(yù)防和致病機(jī)制.中國(guó)醫(yī)藥導(dǎo)報(bào), 2009, 6(20):151-152.

［2］ 涂遠(yuǎn)航, 馬勇, 谷曼, 等.拉米夫定對(duì)慢性乙型肝炎患者CD28表達(dá)的影響.鄭州大學(xué)學(xué)報(bào)(醫(yī)學(xué)版), 2011, 46(5):795-797.

［3］ 郝峰, 方芳, 李艷, 等.乙肝患者外周血T淋巴細(xì)胞上CD28表達(dá)及臨床意義.中國(guó)民康醫(yī)學(xué)(上半月), 2007, 19(19):826-827.［4］ 中華醫(yī)學(xué)會(huì)傳染病與寄生蟲(chóng)病學(xué)分會(huì)、肝病學(xué)分會(huì).病毒性肝炎防治方案.中華傳染病雜志, 2001, 19(1):56.

［5］ 朱傳武, 羅端德, 曾令蘭, 等.慢性乙型肝炎患者干擾素療效與CD28陽(yáng)性外周血單個(gè)核細(xì)胞的關(guān)系.臨床肝膽病雜志, 2002, 18(4):251-252.

［6］ Fan K, Wang H, Wei H, et al.Blockade of LIGHT/HVEMand B7/CD28 signaling facilitates long-term islet graft survivalwith development of allospecific tolerance.Transplantation, 2007, 84(6):746.

［7］ 向曉玲, 蔡杰, 楊云.干擾素α-2α聯(lián)合中藥治療HbeAg陽(yáng)性慢性乙型肝炎的臨床觀察.臨床醫(yī)藥實(shí)踐, 2009(36):904-905.

［8］ 張曉幫, 劉波, 徐岳軍, 等.慢性乙型肝炎患者外周血CD4+CD25+、CD8+CD28+淋巴細(xì)胞的變化及與病毒載量的關(guān)系.放射免疫學(xué)雜志, 2010, 23(1):77-79.

2014-05-29］

215007 江蘇省蘇州市第五人民醫(yī)院感染科