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      二根龍蛭湯對腦缺血模型大鼠神經(jīng)細胞凋亡的影響*

      2014-09-08 12:12:16范小璇頓寶生強選平趙曉平陜西中醫(yī)學院附屬醫(yī)院外四科咸陽712000
      陜西中醫(yī) 2014年1期
      關(guān)鍵詞:水蛭灌胃迷宮

      范小璇 頓寶生 強選平 趙曉平 逯 莉 陜西中醫(yī)學院附屬醫(yī)院外四科(咸陽 712000)

      腦缺血發(fā)生后,常常導致患者學習記憶、肢體、語言等功能障礙,這些功能障礙的出現(xiàn)都是神經(jīng)元損害的結(jié)果。神經(jīng)元對缺血性損害的敏感性不一,凋亡與壞死并存,凋亡主要出現(xiàn)在缺血半暗帶,是遲發(fā)型神經(jīng)元損害的主要形式[1]。二根龍蛭湯是我們臨床總結(jié)的經(jīng)驗方,對缺血性中風等疾病治療效果明顯,為了揭示其作用機制,進行了本項研究,現(xiàn)匯報如下。

      1 材料與方法

      1.1 動物及分組 選用SD成年大鼠40只,體重200±50g,雌雄各半(由西安交通大學醫(yī)學院實驗動物中心提供,合格證號SCXK 2012-003)。隨機分為假手術(shù)組、模型組、對照組和治療組,每組10只。對照組給予吡拉西坦片灌胃,治療組給予二根龍蛭湯(葛根、白茅根、地龍、水蛭、丹參、紅花、川芎)灌胃治療。

      1.2 造 模 參考文獻[2-3]制作腦缺血模型。所有動物購回后適應性喂養(yǎng)7d,術(shù)前12h禁飲食,自由飲水。稱重后用10%水合氯醛(3.5mL/kg)腹腔注射對大鼠麻醉,麻醉成功后將大鼠固定在鼠板上,頸部剃毛、皮膚消毒后,取正中切口,仔細分離右側(cè)頸外動脈、頸內(nèi)動脈,用絲線結(jié)扎頸外動脈,頸內(nèi)動脈遠端放置動脈夾;將頭皮針端口打磨光滑,把頭端涂有石蠟油的尼龍漁線從頸外動脈靠近分叉處導入血管內(nèi),去掉動脈夾,在直視下緩慢推進漁線入顱,遇到阻力后停止,入顱約1.8cm;將頸內(nèi)動脈連同漁線一起結(jié)扎,放開頸外動脈結(jié)扎線,縫合皮膚。假手術(shù)組只切開頸部皮膚、暴露血管后縫合皮膚。

      1.3 治 療 所有動物術(shù)后給予紅霉素軟膏涂抹傷口,假手術(shù)組和模型組術(shù)后6h開始給予進食進水,對照組術(shù)后6h給予進食水的基礎(chǔ)上吡拉西坦片(由宜昌人福藥業(yè)有限責任公司生產(chǎn),按人與實驗用鼠比為1∶10進行換算后以3.6g/Kg·d劑量灌胃)灌胃進行治療,治療組術(shù)后6h給予進食水的基礎(chǔ)上給予二根龍蛭湯(由陜西國際商貿(mào)學院醫(yī)藥學院實驗室提供,根據(jù)體重按人正常用量的10倍)濃縮煎劑灌胃治療。

      1.4 Morris水迷宮實驗 大鼠購回后第3d開始進行水迷宮訓練,連續(xù)3d,術(shù)后第4d再次進行訓練3d,第7d進行水迷宮實驗。放置一直徑1.3m、深0.5m的圓形水池,池壁為白色,標明Ⅰ、Ⅱ、Ⅲ、Ⅳ四個象限,在任何一象限內(nèi)放置一個直徑10cm、高25cm的安全平臺,水面沒過平臺5cm,水中注入適量奶粉,以目視看不見平臺為宜,水溫控制在25℃左右。記錄大鼠尋找到安全平臺時間,即逃避潛伏時間;再撤去平臺,選第Ⅱ象限入水點將大鼠面向池壁放入水中,記錄90s內(nèi)大鼠跨越原平臺次數(shù)。

      1.5 指標測定 第7d水迷宮實驗結(jié)束后10%水合氯醛腹腔注射麻醉后,開胸經(jīng)左心室穿刺,生理鹽水沖洗灌洗,見肝臟顏色發(fā)白后4%甲醛灌注固定,開顱取腦,冠狀面冰凍后切片,片厚6um。按照Bax、Bcl-2免疫組化試劑盒說明步驟進行。在40倍顯微鏡下觀察陽性標記物標記細胞的數(shù)量,進行統(tǒng)計分析。

      2 結(jié) 果 本組實驗過程中,共死亡大鼠4只,其中模型組2只,治療組和對照組各1只。治療后第7d水迷宮實驗結(jié)果見表1,Bax和Bcl-2實驗結(jié)果見表2。

      表1 治療后7d水迷宮實驗結(jié)果比較

      表2 治療后7dBax、Bcl-2結(jié)果比較

      3 討 論 腦缺血屬于中醫(yī)“中風”的范疇,《素問·風論》云:“風者,百病之始也?!闭撔皩嵍酗L。清·喻昌在《尚論后篇·真中》云:“中風之風乃人身自有之風,平素蘊蓄,而一旦內(nèi)出者也?!薄把觥睘橹酗L的病機關(guān)鍵,補陽還五湯用于治療中風病的臨床療效被廣泛認可,故而,活血化瘀治療成為治療的主要大法。經(jīng)驗方二根龍蛭湯由葛根、白茅根、地龍、水蛭、丹參、紅花、川芎七味藥組成。水蛭、地龍共為君藥,水蛭咸、苦、平而歸肝經(jīng),破血、逐瘀、通經(jīng),地龍咸、寒歸肝、脾膀胱經(jīng),息風通絡、利水,二藥共用使瘀血消散,閉阻之經(jīng)絡暢通;臣以丹參、紅花、川芎,丹參苦、寒,歸心、肝經(jīng),具有活血調(diào)經(jīng)、涼血安神之功效,紅花心溫,歸心、肝經(jīng),具有活血通經(jīng)、祛瘀止痛之功效,二者相須為用,功專于化瘀,再加活血行氣、祛風止痛之川芎,能上行頭目,旁通絡脈,使瘀血去、經(jīng)脈通,頭痛止,意識清;佐以葛根,甘辛涼,解肌退熱,擴管通脈,使藥白茅根甘、寒,涼血止血,清熱利水,使熱散而血止,濕滲則水利;全方共奏化瘀通絡利水之效。

      本項研究結(jié)果顯示,模型組大鼠逃避潛伏期時間較假手術(shù)組明顯延長,說明造模成功,二根龍蛭湯治療后,腦缺血大鼠逃避潛伏期較模型組縮短,跨越平臺次數(shù)增加,說明二根龍蛭湯有改善腦缺血大鼠學習記憶功能的作用。研究表明,Bcl-2具有明顯的抗細胞凋亡和延長細胞壽命的作用[4],Bcl-2蛋白家族是細胞凋亡調(diào)控蛋白,Bcl-2/Bax基因是目前研究較為明確的一對在功能上相互對立的凋亡調(diào)控基因[5]。本研究表明,二根龍蛭湯能抑制腦缺血模型大鼠Bax的升高,促進Bcl-2的升高,說明二根龍蛭湯能減輕腦缺血大鼠神經(jīng)細胞的凋亡,從而減輕神經(jīng)功能的損害。

      總之,二根龍蛭湯對腦缺血大鼠學習記憶能力具有明顯的改善作用,可能是通過減輕神經(jīng)細胞凋亡的作用來實現(xiàn)的。

      [1]吳 限,陳 鵬.心腦通絡液對腦梗塞大鼠腦組織凋亡基因 Bcl-2、p53的影響[J].中醫(yī)藥信息,2011,28(4):64-65.

      [2]張榮媛,張宏偉,尚愛加.大鼠大腦中動脈缺血再灌注模型制備及行為學評價標準的改進[J].軍醫(yī)進修學院學報,2008,88(1):211-247.

      [3]包新杰,趙 浩,趙英杰,等.線栓法插線深度對大鼠腦梗死模型制備的影響[J].中國實驗動物學報,2011,19(3):233-236.

      [4]劉 星,宿寶貴,呂來清,等.電針上調(diào)腦梗塞大鼠皮質(zhì)缺血半影區(qū)Bcl-2蛋白質(zhì)的表達[J].解剖學研究,2010,32(2):88-92.

      [5]薛 茜,鄒玉安,趙寶民,等.腦缺血再灌注半暗帶細胞凋亡及Bcl-2/Bax比值的變化及中藥干預機制[J].陜西中醫(yī),2010,31(7):926-927.

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