廣西中醫(yī)藥大學(xué)，廣西 南寧 530001

不同產(chǎn)地金銀花主要活性成分的含量比較

梁爽

廣西中醫(yī)藥大學(xué)，廣西 南寧 530001

目的比較不同產(chǎn)地的金銀花中主要活性成分綠原酸及木樨草苷的含量。方法超聲波提取供試品，采用高效液相色譜法和化學(xué)分析法對(duì)5個(gè)產(chǎn)地金銀花主要活性成分的含量進(jìn)行測(cè)定。結(jié)果5個(gè)產(chǎn)地金銀花中綠原酸含量：湖南>河北>山東>河南>湖北；木樨草苷含量：山東>河南>河北>湖北>湖南。結(jié)論不同產(chǎn)地金銀花藥材中有效成分綠原酸及木樨草苷的含量存在很大差異，本試驗(yàn)為不同生產(chǎn)目的選用不同產(chǎn)地的金銀花藥材提供了實(shí)驗(yàn)依據(jù)。

金銀花；綠原酸；木樨草苷；HPLC；含量比較

金銀花為中國(guó)藥典2010版一部收載品種[1]，有良好的藥用植物資源，又名忍冬花(《新修本草》)、銀花(《溫病條辨》)、鷺鷥花(《植物名實(shí)圖考》)、雙花(《中藥材手冊(cè)》)。本品為忍冬科植物忍冬Lonicera japonica Thunb.的干燥花蕾[2]。性寒，味甘，歸肺、心、胃經(jīng)，具有清熱解毒、涼散風(fēng)熱之功，常用于癰腫疔瘡、喉痹丹毒、血熱毒盛，為臨床常用藥。金銀花主要成分為綠原酸，木樨草苷，具有抗病毒、抗炎、解熱、調(diào)節(jié)機(jī)體免疫力、降血脂等多種藥理作用[3-7]，其含量的高低是目前衡量金銀花品質(zhì)優(yōu)劣的指標(biāo)之一[8]。本實(shí)驗(yàn)建立高效液相色譜法對(duì)其中主要活性成分的含量進(jìn)行測(cè)定，對(duì)金銀花質(zhì)量研究具有很重要的意義。

1 材料、儀器與試劑

1.1 材料 綠原酸標(biāo)準(zhǔn)品(110763-200212)，木樨草苷對(duì)照品(111720-200604)，均由中國(guó)藥品生物制品檢定所提供。山東、河南、河北、湖南、湖北產(chǎn)地的金銀花樣品來自安徽亳州中藥材大市場(chǎng)，經(jīng)劉漢珍老師鑒定為忍冬科植物忍冬Lonicera japonica Thunb.的干燥花蕾。

1.2 儀器與試劑 KQ-250DE 數(shù)控超聲波清洗器，由昆山市超聲儀器有限公司生產(chǎn)；Waters1525型高效液相色譜儀，由美國(guó)Waters公司生產(chǎn)； Waters2487型紫外檢測(cè)器，由美國(guó)Waters公司生產(chǎn)。甲醇，乙醇，冰醋酸，磷酸，乙腈等均為分析純，水為超純水。

2 方法與結(jié)果

2.1 色譜條件與系統(tǒng)適用性試驗(yàn)

2.1.1 綠原酸色譜條件與系統(tǒng)適用性試驗(yàn) 流動(dòng)相：乙腈-0.4%磷酸溶液(13∶87)；固定相：十八烷基硅烷鍵合硅膠；檢測(cè)波長(zhǎng)：327nm；流速：0.8～1ml·min-1；進(jìn)樣量：對(duì)照品、供試品進(jìn)樣均為20μL；柱溫為常溫。在此色譜條件下, 理論塔板數(shù)不小于2000, 峰形較好。

2.1.2 木樨草苷色譜條件與系統(tǒng)適用性試驗(yàn) 流動(dòng)相A：甲醇；流動(dòng)相B： 0.5%冰醋酸；按表1梯度洗脫檢測(cè)波長(zhǎng)：350nm；流速：0.8～1 ml·min-1；進(jìn)樣量：20μl；柱溫為常溫。在此色譜條件下, 理論塔板數(shù)不小于2000, 峰形較好。

表1 梯度洗脫條件

2.2 對(duì)照品溶液的制備

2.2.1 綠原酸對(duì)照品溶液的制備 精密稱取綠原酸對(duì)照品10mg，置50mL棕色量瓶中，用50%甲醇稀釋制成每毫升含0.2mg的溶液即得。

2.2.2 木樨草苷對(duì)照品溶液的制備 精密稱取木樨草苷對(duì)照品5.5mg，置50mL錐型瓶中，加70%乙醇制成每毫升含0.11mg的溶液即得。

2.3 供試品溶液的制備

2.3.1 綠原酸供試品溶液的制備 精密稱取金銀花樣品粉末0.5g，置于100mL具塞錐形瓶中，加入50%甲醇50mL，超聲波處理30min，放冷，再稱定重量，用50%甲醇補(bǔ)足減失的重量，搖勻，將溶液放入離心管里，離心10～15min后停止離心，待離心機(jī)停止轉(zhuǎn)動(dòng)后取出，精密量取上清液5ml，置25ml棕色瓶中，加入50%甲醇至刻度定容，搖勻，即得。

2.3.2 木樨草苷供試品溶液的制備 精密稱取金銀花樣品粉末3g，置100ml具塞錐形瓶中，加入70%乙醇50ml，超聲波處理60min，放冷，再稱定重量，用70%乙醇補(bǔ)足減失的重量，搖勻，將溶液放入離心管里，離心10～15min后停止離心，待離心機(jī)停止轉(zhuǎn)動(dòng)后取出，精密量取上清液5ml，置25ml棕色瓶中，加入70%乙醇至刻度定容，搖勻，即得。

2.4 線性關(guān)系考察

2.4.1 精密吸取綠原酸對(duì)照品溶液1.0、4.0、8.0、12.0、16.0μl注入液相色譜儀,測(cè)定峰面積,以綠原酸進(jìn)樣量(μg) 為橫坐標(biāo),峰面積為縱坐標(biāo),繪制標(biāo)準(zhǔn)曲線,其回歸方程為Y=2E+06X-55568，r=0.99985。結(jié)果表明綠原酸在0.20～3.2μg之間與峰面積呈良好的線性關(guān)系。

2.4.2 精密吸取木樨草苷對(duì)照品溶液2.0、6.0、10.0、16.0、20 μl注入液相色譜儀, 測(cè)定峰面積, 以木樨草苷進(jìn)樣量(μg) 為橫坐標(biāo), 峰面積為縱坐標(biāo), 繪制標(biāo)準(zhǔn)曲線, 其回歸方程為Y =4E+06X-33367，r = 0.9 997。結(jié)果表明木樨草苷在0.22～2.2μg之間與峰面積呈良好的線性關(guān)系。

2.5 精密度試驗(yàn)

2.5.1 精密吸取綠原酸對(duì)照品溶液10μL, 重復(fù)進(jìn)樣5次，記錄峰面積，結(jié)果精密度良好，RSD為2.516%。

2.5.2 精密吸取木樨草苷對(duì)照品溶液10μL,重復(fù)進(jìn)樣6次，記錄峰面積，結(jié)果精密度良好，RSD為2.243%。

2.6 重復(fù)性試驗(yàn)

2.6.1 精密吸取5份同一批金銀花提取液,同2.3項(xiàng)下方法制備供試品溶液, 進(jìn)樣分析, 計(jì)算金銀花中綠原酸的含量，結(jié)果重復(fù)性良好，RSD為2.393%。

2.6.2 精密吸取5份同一批金銀花提取液, 同2.3項(xiàng)下方法制備供試品溶液, 進(jìn)樣分析, 計(jì)算金銀花中木樨草苷的含量，結(jié)果重復(fù)性良好，RSD為1.896%。

2.7 穩(wěn)定性試驗(yàn)

2.7.1 精密吸取金銀花提取液, 同2.3項(xiàng)下方法制備供試品溶液，于0、1、2、4、6、8、12、24h分別進(jìn)樣20μL分析, 計(jì)算綠原酸的含量, 結(jié)果穩(wěn)定性良好，RSD為2.792%。

2.7.2 精密吸取金銀花提取液, 同2.3項(xiàng)下方法制備供試品溶液，于0、1、2、4、6、8、12、24h分別進(jìn)樣20μL分析, 計(jì)算木樨草苷的含量, 結(jié)果穩(wěn)定性良好，RSD為2.789%。

2.8 加樣回收率試驗(yàn)

2.8.1 精密吸取同一批已知綠原酸提取液10μL,共5份，每份分別加入對(duì)照品(0.2mg·μL-1)10μL,分別進(jìn)樣分析,由測(cè)得量與加入量計(jì)算回收率, 結(jié)果平均回收率為99.56%，RSD為2.235%，表明回收率良好。

2.8.2 精密吸取同一批已知木樨草苷提取液10μL,共5份，每份分別加入對(duì)照品(0.11 mg·μL-1)10μL,分別進(jìn)樣分析,由測(cè)得量與加入量計(jì)算回收率,結(jié)果表明回收率良好。

2.9 樣品含量測(cè)定

2.9.1 按色譜條件進(jìn)樣20μL，以峰面積值求得綠原酸的質(zhì)量,再計(jì)算出金銀花中綠原酸的含量,山東、河北、河南、湖南、湖北金銀花中綠原酸含量為3.921%、4.372%、3.558%、5.215%、1.177%。

2.9.2 按色譜條件進(jìn)樣20μL，以峰面積值求得木樨草苷的質(zhì)量,再計(jì)算出金銀花中木樨草苷的含量, 山東、河北、河南、湖南、湖北中各金銀花中木樨草苷的含量為0.142%、0.063%、0.088%、0.033%、0.057%。

3 結(jié)論

不同產(chǎn)地金銀花中綠原酸含量有較大差別，5個(gè)產(chǎn)地金銀花中綠原酸含量是湖南﹥河北﹥山東﹥河南﹥湖北；木樨草苷含量為山東﹥河南﹥河北﹥湖北﹥湖南。以綠原酸，木樨草苷含量為檢測(cè)指標(biāo)，建立了綠原酸，木樨草苷含量測(cè)定的HPLC方法，并進(jìn)行了方法學(xué)考察,結(jié)果表明，湖南金銀花中綠原酸成分的含量高于其他產(chǎn)地綠原酸的含量，山東金銀花中木樨草苷成分的含量高于其他產(chǎn)地的木樨草苷的含量。為進(jìn)一步綜合開發(fā)金銀花、擴(kuò)大金銀花的生藥資源奠定基礎(chǔ)，為金銀花的質(zhì)量控制規(guī)范化和標(biāo)準(zhǔn)化提供了依據(jù)。

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ComparativeStudyonthemainactiveingredientcontentofloniceraeflosfromDifferentProducingAreas

Liang shuang

Guangxi University of Chinese Medicine, Guangxi Province,Nanning 530001, China

Objective To compare the content of chlorogenic acid and luteolin glycosides in lonicerae flos from different origin. Methods Test samples have been extracted by ultrasonic, the content of main active ingredients from five origin has been measured by HPLC and chemical analysis. Results the content of chlorogenic acid in five origin: Hunan> Hebei> Shangdong > Henan> Hubei; the content of luteolin glycosides：Shandong> Henan> Hebei> Hubei> Hunan. Conclusion The content of chlorogenic acid and luteolin glycosides is different in different origin, the study provide an experimental basis on selecting flos lonicerae for different production purposes.

Flos lonicerae;chlorogenic acid;Luteolin glycosides;HPLC;Compare of content

R284

A

1007-8517(2014)09-0004-02

2014.03.12)