郭撿紅，朱新平，趙 建，魏成清，潘德博

（中國水產科學院珠江水產研究所／農業(yè)部熱帶亞熱帶水產種質資源利用與養(yǎng)殖重點實驗室，廣東廣州 510380）

低溫處理對黃喉擬水龜胚胎發(fā)育的影響

郭撿紅，朱新平，趙 建，魏成清，潘德博

（中國水產科學院珠江水產研究所／農業(yè)部熱帶亞熱帶水產種質資源利用與養(yǎng)殖重點實驗室，廣東廣州 510380）

【目的】研究低溫對黃喉擬水龜Mauremysmutica胚胎發(fā)育的影響.【方法】將黃喉擬水龜受精卵在14、18、20℃條件下分別保存30、60、90 d，然后移至29℃孵化，測量相關性狀.【結果和結論】在14、18℃條件下，黃喉擬水龜受精卵質量減少，20℃條件下卵質量變化不顯著；卵移至29℃孵化后，質量基本都增加；卵的受精斑隨低溫保存時間延長而變得模糊，受精斑環(huán)帶寬度進展受抑制；3個溫度處理組均有幼體孵出，孵化成功率低，最高只有33.33%；在成功孵出幼體的試驗組中，卵在29℃的孵化期隨保存溫度升高或保存時間延長而縮短，幼體畸形率隨保存時間延長而升高.因此，長期暴露在低溫條件下，不利于黃喉擬水龜胚胎的發(fā)育，甚至會導致其胚胎死亡.

黃喉擬水龜；低溫；胚胎發(fā)育

黃喉擬水龜Mauremysmutica隸屬龜鱉目Testudines地龜科Geoemydidae擬水龜屬Mauremys，主要分布于東亞和東南亞，也是我國南方常見的水產養(yǎng)殖品種［1］.黃喉擬水龜每年4—8月份產卵，為剛性卵［2］.自然狀態(tài)下，母龜在沙土中產卵將其掩埋后離開，無孵卵和護幼行為［3］.在黃喉擬水龜養(yǎng)殖生物學研究中發(fā)現，室內自然溫度下，前一年在沙堆中產的卵可以在來年春季自然孵出幼體.這預示著適度的低溫可以延緩龜的胚胎發(fā)育.本研究探討龜卵經過一段時期低溫保存是否可以孵出幼體，以及低溫對胚胎發(fā)育的影響程度.

1 材料與方法

1.1 材料及儀器

黃喉擬水龜卵取自中國水產科學研究院珠江水產研究所龜類繁育試驗場.JJ100型精密電子天平購自常熟雙杰測試儀器廠；游標卡尺購自上海臺海工量具有限公司；LRH-150F型生化培養(yǎng)箱購自上海一恒科技公司.

1.2 試驗方法

試驗卵于產卵當日收集，經可孵性鑒別（有無乳白色受精斑），用JJ100型精密電子天平稱質量、游標卡尺測量相關性狀并編號，移入長×寬×高規(guī)格為315 mm×240 mm×125 mm內含蛭石的塑料孵化盒中.試驗設置14、18、20℃共3個溫度，每個溫度處理組45枚受精卵.

試驗方法參照文獻［4］.14℃處理組的45枚受精卵分為試驗組1、2、3，每組15枚卵，在14℃LRH-150F型生化培養(yǎng)箱中分別孵化30、60和90 d，然后移至29℃生化培養(yǎng)箱中孵化直至孵出幼體；18℃處理組分為試驗組4、5、6，分別孵化30、60和90 d后在29℃孵化直至孵出幼體；20℃處理組分為試驗組7、8、9，分別孵化30、60和90 d后在29℃孵化直至孵出幼體.

孵化濕度設置為-150 kPa，由干蛭石與水以質量比1∶0.89配成，孵化方法按文獻［5］操作.卵入孵后，每7 d稱質量，測量卵短徑和受精斑寬，直至卵破殼或胚胎死亡.幼體孵出后收集并記錄孵出幼體中畸形的個數.所有試驗數據用SPSS 20.0處理，進行雙因素方差分析.

2 結果與分析

2.1 低溫處理對入孵卵質量的影響

對本試驗受精卵9個試驗組初始質量（圖1）進行雙因素方差分析，發(fā)現3個溫度處理組間存在顯著差異（P＜0.05），3個保存時間組差異不顯著（P＞0.05），所以將初始質量作為協方差變量以去除初始質量的影響.試驗組1、2、3、4、5、6的入孵卵在低溫處理過程中均表現為質量減少，而試驗組7、8、9的卵質量變化不顯著，經雙因素方差分析，去除初始質量影響，14與18℃間無顯著差異（P＞0.05），但兩者與20℃間均差異極顯著（P＜0.01）；保存時間中，30與60 d之間差異顯著（P＜0.05），其他組間差異不顯著（P＞0.05）.溫度與保存時間之間協同效應不顯著（P＞0.05）.轉移至29℃孵化后，試驗組1、2、3、4均表現為增質量，試驗組5、6、8、9在前期表現為增質量，中后期表現為減質量，試驗組7前期表現為減質量，中后期表現為增質量.

圖1 試驗組孵化過程中卵質量變化Fig.1 Eggmass changes of test groups during incubation

2.2 低溫處理對受精斑變化的影響

據觀察，卵受精斑隨著低溫保存時間的延長而變得模糊，受精斑環(huán)帶寬度的變化在低溫條件下明顯受到抑制.在14℃保存溫度下，卵受精斑環(huán)帶平均只增長了8%，且受精斑環(huán)帶均未繞卵短徑合攏，與低溫保存時間的長短沒有顯著的關系.在18℃條件下，卵受精斑環(huán)帶平均增長了45%，部分卵受精斑環(huán)帶繞卵短徑合攏.20℃條件下，卵受精斑環(huán)帶平均增長了36%，部分卵受精斑環(huán)帶繞卵短徑合攏.

2.3 低溫處理對孵化期、孵化成功率和畸形率的影響

低溫處理對孵化期、孵化成功率和幼體畸形率影響結果見表1.3個溫度試驗組中均有幼體孵出，14、18℃只有保存30 d的試驗組1、4成功孵出幼體.20℃的試驗組7、8、9都有幼體孵出.總體孵化成功率低，最高只有33.33%.

表1 不同保存溫度下黃喉擬水龜卵的孵化期、孵化成功率及畸形率Tab.1 Incubation length，hatching success and abnormality ratio of Mauremysmutica eggs incubated w ith different treatments

在成功孵出幼體的試驗組中，卵在29℃時的孵化時間隨著保存溫度的升高或保存時間的延長而縮短.孵出幼體的畸形率也隨著低溫保存時間的延長而升高.

3 討論與結論

14、18℃條件下，黃喉擬水龜卵胚胎發(fā)育停滯，水分被動蒸發(fā)或者其他原因造成卵質量減少.20℃時，胚胎發(fā)育停滯，但仍然維持一定的代謝，這可從它們轉移到29℃后孵化期較短的結果中推測出來，而這種代謝速率保證了卵質量的基本恒定.而有些低溫保存后可以繼續(xù)發(fā)育的龜卵如寬甲長頸龜Chelodinaexpansa卵置于18℃保存97 d，其卵質量也無顯著變化［4］.在自然溫度下，受精卵出現受精斑后會一直增長，其增長與胚胎發(fā)育、孵化時間呈對應關系，隨著胚胎的發(fā)育，受精斑會繞卵短徑1周［6-7］.本研究中，卵受精斑在低溫保存后變得模糊，這預示胚胎發(fā)育進程受到較大影響，嚴重時會造成胚胎的死亡.黃喉擬水龜卵保存溫度越低、保存時間越長，其孵化成功率越低.而低溫對寬甲長頸龜的孵化成功率并無影響［4］，錦龜Chrysemyspicta剛產的卵置于接近0℃下保存30 d后，轉移至室溫仍能正常發(fā)育，不同時期的胚胎其冷耐受力也不同，已經有8個體節(jié)的鱷龜Chelydraserpentina胚胎在10℃條件下停留幾個星期后，轉移至30℃條件下也能正常孵出幼體，而在15℃條件下停留3個星期后即變成畸形胚胎［8］.這說明不同物種其胚胎對溫度的耐受性是不一樣的［9］.在14、18℃保存30 d后，轉入29℃孵化，兩者的孵化期幾乎一樣，分別為70.5和70.4 d，與恒溫29℃條件下的孵化期（69.4 d）［6］接近，說明黃喉擬水龜卵在14和18℃低溫處理階段，其胚胎發(fā)育受低溫影響而停滯.20℃保存的胚胎發(fā)育有較緩慢的進程，因為它們在29℃條件下具有較短的孵化期，而且孵化期隨著保存時間的延長而縮短.本研究結果表明，低溫對黃喉擬水龜胚胎發(fā)育影響較大，而這種影響往往是致死的.因此在養(yǎng)殖生產上，要盡量給龜卵提供合適的溫度，以保證胚胎的正常發(fā)育.

［1］ 朱新平，陳永樂，陳昆慈，等.淡水龜高效養(yǎng)殖技術一本通［M］.北京：化學工業(yè)出版社，2010：15-20.

［2］ 朱新平，陳永樂，魏成清，等.黃喉擬水龜的繁殖生物學研究［J］.水生生物學報，2001，25（5）：449-453.

［3］ 趙偉華，魏成清，郭撿紅，等.黃喉擬水龜產卵行為的觀察［J］.動物學雜志，2008，43（4）：92-96.

［4］ BOOTH D T.The breaking of diapause in embryonic broad-shelled river turtles（Chelodinaexpansa）［J］.JHerpetol，2002，36（2）：304-307.

［5］ 郭撿紅，朱新平，趙偉華，等.溫度、濕度對黃喉擬水龜胚胎發(fā)育的影響［J］.應用生態(tài)學報，2010，21（1）：215-220.

［6］ ZHU Xinping，WEI Chenqing，ZHAO Weihua，et al. Effects of incubation temperatures on embryonic development in Asian yellow pond turtle［J］.Aquaculture，2006，259（1／2／3／4）：243-248.

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［8］ YNTEMA C L.Effects of various temperatures on the embryonic development ofChelydraserpentine［J］.Anat Rec，1960，136：305-306.

［9］ DEEMING D C，FERGUSON MW J.Egg incubation：Its effects on embryonic development in birds and reptiles［M］.Great Britain：Cambridge University Press，1991：173-191.

【責任編輯霍 歡】

Effects of low tem perature on embryonic development of yellow pond turtle，Mauremysmutica

GUO Jianhong，ZHU Xinping，ZHAO Jian，WEIChengqing，PAN Debo
（Pearl River Fisheries Research Institute，Chinese Academy of Fishery Sciences／Key Laboratory of Tropical＆Subtropical Fishery Resource Application＆Cultivation of Ministry of Agriculture，Guangzhou 510380，China）

【Objective】To study the effects of low temperature on embryonic development of yellow pond turtleMauremysmutica.【Method】Eggs ofM.muticawere stored in vermiculite with awater potential of -150 kPa at14，18，20℃for 30，60 and 90 days respectively，and then were incubated at29℃with the same water potential.The characters correlated to embryonic development were measured.【Result and conclusion】All eggs lostmass after being stored at14，18℃，but there was no difference at20℃. The eggswhich were incubated at 29℃increased in mass.There were hatchlings at three temperature treatments.The hatching success rates were very low，with the highest hatching success rate being 33.33%.The incubation period at29℃of all treatmentswhich hatched out successfully decreased with storage temperature rising and time increasing.Abnormality ratio increased with the storage period extending at low temperatures.The results suggested that embryonic development of yellow pond turtle would be influenced or even die if itwas exposed to low temperatures for a long time.

Mauremysmutica；low temperature；embryonic development

S966.5

A

1001-411X（2014）04-0114-03

2013-02-25優(yōu)先出版時間：2014-06-03

優(yōu)先出版網址：http:∥www.cnki.net／kcms／doi／10.7671／j.issn.1001-411X.2014.04.021.html

郭撿紅（1978—），女，助理研究員，碩士，E-mail:guojianhon＠yahoo.com.cn；通信作者:朱新平（1964—），男，研究員，博士，E-mail:zhuxinping_1964＠163.com

國家農業(yè)科技成果轉化資金項目（2011GB23260021）；中國水產科學研究院院級基本科研業(yè)務費專項（2012A0403）；廣州市珠江科技新星專項（2012089）

郭撿紅，朱新平，趙 建，等.低溫處理對黃喉擬水龜胚胎發(fā)育的影響［J］.華南農業(yè)大學學報，2014，35（4）：114-116.